Анализы воды на кишечную палочку
В нашем организме живут миллионы бактерий — их общий вес составляет около двух килограммов. Кишечная палочка занимает среди них далеко не последнее место. Эта бактерия может долгое время помогать человеку в формировании микрофлоры и пищеварении, а может в один момент превратиться в серьезную медицинскую проблему. В нашей статье мы расскажем о способах выявления кишечной палочки.
Кишечная палочка: две стороны одной медали
Кишечная палочка, или Escherichia coli (Эшерихия коли) — это палочковидная бактерия, которая обитает в кишечнике человека и некоторых животных. Существует более сотни разновидностей этой палочки. Большинство из них совершенно безвредны, но некоторые могут вызвать серьезные заболевания.
Кстати
Один из редких видов кишечной палочки — штамм О141:Н4 — стал знаменит из-за эпидемии в Европе в 2011 году. Тогда в странах Европы и северной Америки за период с мая по июнь заболело примерно 4 000 человек, из них 43 человека погибло.
У здорового человека Escherichia coli живет в толстом кишечнике. Ее количество обычно составляет 104–1010 КОЕ в 1 мл содержимого. В кишечнике эта бактерия участвует в переваривании пищи, синтезирует нужные нам витамины, а также производит органические кислоты. Эти кислоты создают благоприятную среду для развития лакто- и бифидобактерий.
У организма человека есть различные механизмы, которые помогают контролировать количество бактерий и ограничивать места их «обитания». Но если механизм дает сбой, могут возникнуть как легкие проходящие расстройства, так и действительно серьезные заболевания, иногда с летальным исходом. Из-за кишечной палочки могут развиваться различные заболевания: от диареи до тяжелого менингита и коли-сепсиса. Обнаружение бактерии в любых органах, кроме толстого кишечника, уже говорит о развитии нарушений.
Чаще всего кишечная палочка попадает в другие органы при нарушении гигиены или при снижении иммунитета. Попадая в женскую половую систему, она вызывает кольпит, аднексит, другие воспалительные заболевания. Особенно опасно заражение при беременности и после родов. Это может вызвать внутриутробную инфекцию у ребенка и стать причиной послеродового эндометрита у матери. Мужчин эта опасность тоже не обходит стороной. Кишечная палочка, попавшая в уретру, может вызвать уретрит, простатит, воспаление придатков и яичек.
Кроме этого, нормальная кишечная палочка может мутировать и становиться действительно опасной. Некоторые виды этой бактерии, например O157:H7, O104:H4, O121 и O104:H21, выделяют сильные токсины. Они могут вызвать гемолитико-уремический синдром, перитонит, пневмонию, пищевые отравления.
Чаще всего мутировавшая кишечная палочка попадает в организм вместе с продуктами питания, такими как немытые овощи, плохо обработанное мясо, молоко. Но в некоторых случаях такие штаммы могут образоваться внутри организма в результате мутаций и обмена генами.
Когда может быть назначен анализ
Патогенная кишечная палочка нередко вызывает диарею. Обычно эшерихиозом страдают дети младшего возраста и люди, путешествующие в страны с низким уровнем гигиены (так называемая диарея путешественников). Вовремя проведенный анализ позволит выявить кишечную палочку и начать лечение.
Некоторые опасные штаммы кишечной палочки могут вызвать гемолитико-уремический синдром (ГУС). Это тяжелое состояние, при котором в мелких сосудах образуется большое количество тромбов, собственные эритроциты разрушаются и возникает полиорганная недостаточность — тяжелая стресс-реакция организма. При любом подозрении на ГУС обязательно проводят анализ на энтеропатогенные (опасные) эшерихии.
Обычный бактериологический анализ, который проводят при воспалительных заболеваниях органов половой системы, послеродовых эндометритах и других, — также может показать наличие кишечной палочки.
Еще одним показанием к проведению исследования является дисбактериоз. Изменение состава микрофлоры кишечника может привести к проблемам с пищеварением, к урчанию и болям в животе. Нарушение образования витаминов и повышенное всасывание токсинов приводит к слабости, утомляемости и другим неспецифическим симптомам.
Какие типы анализов назначают при подозрении на патологический процесс
Кишечную палочку можно обнаружить в кале, в моче, в мазках с поверхности половых органов или из ран, при посеве промывных вод. Также во время исследований она может быть обнаружена в ране, в легких.
Основным методом анализа для обнаружения кишечной палочки является бактериологический посев. Для этого небольшое количество материала помещают в питательную среду, на которой бактерии очень хорошо размножаются. Результат подсчитывают через несколько дней по количеству образовавшихся колоний. Единица измерения — КОЕ/мл, то есть количество бактерий, из которых при исследовании выросли колонии, в миллилитре материала.
На выращенных колониях проводят тест с чувствительностью к антибиотикам или бактериофагам. Для этого в чашку Петри помещают микробы и выкладывают на ее поверхность диски, содержащие определенный антибиотик. Если антибиотик действует, рядом с диском образуется «пустое» кольцо, в котором роста микроорганизмов нет. Так же поступают и с бактериофагами.
Кроме ручного способа существует и полуавтоматический метод исследования чувствительности. Для этого микроб «засевают» не на чашки Петри, а на специальные кассеты, уже содержащие определенный набор антибиотиков. После эти кассеты помещают в анализатор.
Также существует метод ПЦР-диагностики. Он позволяет сказать, присутствует ли в материале патогенная кишечная палочка. Но ни количество бактерий, ни их чувствительность к лекарственным препаратам этот метод не покажет.
Другие методы, которые не подразумевают выделение чистой культуры кишечной палочки, могут сказать о заражении только косвенно. Например, в общем анализе мочи могут обнаружить бактерии в виде палочек. Но для того чтобы определить их вид придется сдавать дополнительно бактериологический посев. Похожая ситуация и с копрограммой. Анализ может дать представление о состоянии желудка и кишечника, но не позволяет выявить конкретные бактерии.
Общий анализ крови позволяет выявить характерные для воспалительных заболеваний сдвиги. Но они могут быть вызваны не только эшерихиозом, но и дизентерией, пневмонией или любым другим воспалительным заболеванием.
Как сдавать биоматериал для анализа на кишечную палочку
Любое бактериологическое исследование нужно проводить до начала лечения антибиотиками. В противном случае можно получить ложноотрицательный результат.
Анализ кала на кишечную палочку собирается в стерильную пробирку с транспортной средой. Для этого нужно заранее подготовить судно или другую емкость, тщательно вымыть ее и ополоснуть кипятком. В эту емкость собирается кал после естественной дефекации. Из специальной пробирки с транспортной средой нужно достать аппликатор, погрузить его в несколько участков собранного биоматериала и снова убрать в пробирку, плотно закрыв крышку. Если в собранном материале присутствуют кишечные палочки, бактериологический анализ это покажет.
Знаете ли вы, что…
кишечная палочка попадает в организм ребенка в первые же дни его жизни. Уже через 40 часов после рождения кишечник малыша заселен нормальной микрофлорой, в том числе и кишечной палочкой. Такое «сожительство» будет продолжаться всю его жизнь.
Анализ мочи на бактериологическое исследование тоже собирают в специальную стерильную емкость. Собрать материал можно в любое время суток. Перед этим обязательно нужно принять душ, чтобы в емкость не попали бактерии с поверхности кожи. Чем скорее получится доставить материал в лабораторию, тем лучше.
Мазки и соскобы урогенитального тракта при подозрении на уретрит, вагинит и любые другие мочеполовые заболевания, вызванные кишечной палочкой, забирают сразу в лаборатории или на приеме врача. Специальной щеточкой делается соскоб из уретры, со стенок влагалища или с шейки матки. Это не очень приятная процедура, но без нее не обойтись.
В каком виде и когда выдаются результаты
Быстрый анализ, который позволяет выявить в материале ДНК кишечной палочки, проводится за 1–2 рабочих дня. Результат бактериологического анализа на кишечную палочку придется ждать дольше — от 5 до 7 дней. За это время выращивается культура клеток, определяется их вид, проводится анализ на чувствительность к антибиотикам и бактериофагам.
В норме кишечной палочки не должно быть нигде, кроме толстого кишечника. То есть если вы сдаете мочу или мазок, то лучший результат — это отрицательное заключение. Если речь идет о содержимом кишечника, то здесь не должно обнаруживаться энтеропатогенных кишечных палочек, таких как O157:H7. В некоторых лабораториях проводят быстрый ПЦР-тест на целую группу таких бактерий.
При определении чувствительности к антибиотикам или бактериофагам выдается бланк, на котором напротив каждого наименования написана степень влияния препарата на рост бактерии. По такому бланку врач за несколько минут подберет наиболее эффективный для конкретного случая антибиотик.
Где можно сдать анализ на кишечную палочку
Анализ на эшерихиоз можно сдать как в обычной поликлинике, так и в частной лаборатории. Желательно заранее уточнить, какой метод исследования при этом используется.
Бактериологические исследования лучше проводить в клиниках и лабораториях, оснащенных автоматическими и полуавтоматическими анализаторами. Это исключает человеческий фактор, позволяет проводить исследование с широким перечнем антибиотиков и бактериофагов. Такие оснащенные лаборатории имеют как современные государственные больницы, занимающиеся лечением инфекционных болезней, так и частные медицинские центры.
Также стоит обратить внимание на время проведения исследования. Для бактериологического исследования это не менее пяти дней. Раньше бактерия просто не успеет вырасти в достаточном для анализа количестве. Время больше 7–10 дней говорит о том, что исследование будет проводиться в сторонней лаборатории. Это существенный недостаток, поскольку речь идет о транспортировке биоматериала, что нежелательно: чем раньше был доставлен материал, тем более достоверным будет результат.
Так как с результатами исследования еще придется идти к врачу для назначения лечения, не стоит выбирать неизвестные лаборатории по принципу «ближе к телу». Врач может просто не поверить полученным результатам и отправить сдавать анализ заново в свою больницу или в лабораторный центр, которому он доверяет. А это повлечет дополнительные временные и денежные траты.
Кишечная палочка — неотъемлемая часть микрофлоры кишечника. Пока она находится под контролем организма, ее клетки помогают синтезировать витамины, переваривать пищу, создавать благоприятную среду для жизни других полезных микробов. Но любое нарушение этого равновесия грозит патологиями вплоть до серьезных воспалительных заболеваний. К счастью, медицина помогает нам вовремя выявить отклонения от нормы и приять соответствующие меры.
Источник
При наличии на среде Эндо колоний, типичных для группы кишечной палочки, — красных с металлическим блеском или без блеска, розовых с темным центром, розовых слизистых, бледно-розовых и бесцветных (не разлагающих лактозу) — приступают к микроскопическому их исследованию (мазок окрашивается по Граму). Выборочно изучают по 2—3 колонии разного типа из каждого объема исследуемой воды. Заключение о наличии бактерий группы кишечной палочки только по внешнему виду колоний, без их микроскопического исследования, недопустимо. В случае обнаружения в препарате смешанной культуры для дальнейшего микроскопического исследования выбирают другие колонии или производят рассев на чашку со средой Эндо с целью получения чистой культуры. При отсутствии в мазках грамотрицательных неспороносных палочек дается окончательный ответ (бактерии группы кишечной палочки не обнаружены). [c.148]
ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ НА НАЛИЧИЕ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ [c.129]
Отсутствие помутнения или газообразования во флаконах и пробирках дает Отрицательный (—) ответ на наличие в данном объеме воды показателей фекального загрязнения и позволяет закончить исследование через 24 ч. Муть и газообразование или только муть в посевах указывают на наличие кишечных палочек, в этом случае переходят ко второму этапу анализа. По истечении 18—24 ч выращивания из всех сосудов, в которых наблюдается газообразование или муть, производят пересев петлей штрихом на поверхность среды Эндо на сектора соответственно схеме посева. Пересев делают с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. [c.196]
Наличие в пробирках вторичной бродильной пробы только мути дает право на окончательный отрицательный ответ. Обнаружение в бродильных пробирках мути и газа указывает на присутствие в пробе воды бактерий группы кишечной палочки, происходящих от теплокровных, что дает право на окончательный положительный ответ. Результаты исследования выражают в виде коли-титра, пользуясь стандартными таблицами (см. выше). [c.148]
При бактериологическом исследовании воды прежде всего необходимо установить ее заражение болезнетворными бактериями, возбудителями тифа, холеры, дизентерии и др. В связи с тем что определение их представляет известные трудности, бактериологический анализ обычно сводится к установлению общего количества бактерий в I мл воды, растущих при температуре 37° С, и кишечной палочки (бактерии коли). Наличие последней в большинстве случаев, хотя и не опасно для человека, но свидетельствует о загрязнении воды выделениями людей и животных и заставляет подозревать наличие болезнетворных микробов, попавших в воду с бытовыми стоками и отбросами. [c.48]
По данным исследований [33], энтеровирусы в несколько раз устойчивее к действию активного хлора, чем кишечная палочка. Как оказалось, вирусы полиомиелита более устойчивы также и к воздействию ультразвука по сравнению с сальмонеллами и стрептококками. Естественно, что при температуре 8—10° С сохраняемость энтеровирусов в воде была большей, чем у кишечных палочек, и даже большей, чем у фага [84]. Теперь мы уже знаем, что устойчивость энтеровирусов к прогреванию, например, повышается при наличии в среде ионов Са + и Mg + [126], хлористого аммония [112]. Хотя устойчивость энтеровирусов к различным воздействиям более высока, чем у бактерий, их способность выживать все же не выше таковой споровых форм. [c.81]
При наличии на фильтрах колоний, характерных для группы кишечной палочки (см. выше), производят подсчет их, пользуясь лупой, и с каждого фильтра подвергают выборочному микроскопическому изучению 2—3 колонии, типично окрашенные и бесцветные. В- случае исследования хлорированной воды микроскопическому изучению необходимо подвергать все выросп1Ие на фильтрах формы колоний. При этом из каждой колонии готовйт мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках грамотрицатель-ных неспоронОсных палочек позволяет дать окончательный отрицательный ответ на наличие кишечной палочки, в исследуемом объеме воды. [c.133]
К качеству воды по бактериологическим показателям в крупнейших городах предъявляются более строгие требования коли-индекс должен быть не более 2, коли-титр — не менее 500. При наличии бактериального загрязнения воды выше допустимых норм проводятся дополнительные исследования на присутствие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения — кишечных палочек преимущественно Esheri hia oli. Наличие их устанавливается по способности ферментировать лактозу до кислоты и газа при 43° С в присутствии ингибиторов посторонней микрофлоры. [c.237]
Источник
Что это такое и какие цели исследования?
Бактериологический анализ является одним из способов оценки того, в каком количестве и какие конкретно виды бактерий присутствуют в воде.
Анализ имеет следующие цели:
- определение количества микроорганизмов, присутствующих в воде;
- оценка этого количества;
- выявление конкретных видов бактерий, находящихся в воде;
- проверка воды на наличие опасных для человека микроорганизмов;
- выбор оптимального варианта очистки воды.
Целью исследования является выяснение пригодности воды для конкретных задач (питья, купания).
Виды вод, для которых используют санитарно-бактериологический тест
Исследование на наличие микроорганизмов предусмотрено для следующих видов вод:
- водопроводная;
- из колодцев;
- из закрытых водоемов (прудах, котлованах);
- из рек, в которых предполагается купание людей;
- артезианская (добытые из скважин);
- грунтовые (взятые из подземных верхних слоев земли);
- родниковая;
- сточные.
Регламентирующие документы
Исследование воды на наличие микроорганизмов регламентируется ГОСТами и СанПиНами. Основным документом является ГОСТ 18963-73. В нем зафиксированы способы бактериологического анализа воды, которая используется для питья.
В этом документе прописаны:
- способы отбора проб воды для исследования;
- правила их хранения;
- правила перевозки в лаборатории.
Также в ГОСТе прописана применяемая при теста аппаратура. Указаны используемые реактивы вместе с питательными средами. Подробно прописана подготовка к исследованию, сама процедура анализа.
- Применяется и ГОСТ 24849-2014. В этом стандарте прописаны методики бактериологического исследования воды в полевых условиях.
- Некоторые положения касательно анализа воды на наличие микроорганизмов зафиксированы в ГОСТе Р 51232-98. Там прописаны способы бактериологического исследования воды для питьевых нужд.
- В СанПиН 2.1.4 1074 01 зафиксированы требования касательно качества воды, идущей на питьевые нужды. В документе содержатся нормативы по бактериологическому составу питьевой воды, согласно которым она может считаться безопасной.
На наличие каких бактерий проводится тест?
В процессе анализа вода исследуется на две разновидности микроорганизмов:
- Первая из них – колиформные. Это бактерии, которые принадлежат к разным видам кишечной палочки.
- Вторая разновидность – термотолерантные колиформные микроорганизмы или фекальные бактерии, хорошо размножающиеся при температуре в 43-450С.
Применяемое оборудование
При исследовании используется такое оборудования:
- банки с широким горлышком;
- стеклянные воронки;
- конусовидные колбы;
- колбы вместе с тубусом;
- стеклянные флаконы;
- лабораторная посуда;
- пипетки;
- цилиндры;
- бактериологические пробирки;
- спиртовки;
- лабораторные стаканы;
- покровные и предметные стекла;
- бактериологические чаши;
- пробирные поплавки;
- электрический автоклав;
- фильтровальные аппараты;
- кристаллизаторы;
- вакуумный насос;
- лабораторные весы.
Для анализа также используется водоструйный насос. Применяется его лабораторный вариант, выполненный из стекла. Используется водяная баня. Обязательным элементом является биологический микроскоп.
Применяются также:
- осветители;
- металлические пеналы;
- сигнальные часы;
- сетчатые пластины;
- увеличительные лупы;
- pH-метры (для измерения кислотности);
- дистилляторы.
Дополнительно используются:
- электрические термостаты, они предназначены для выращивания микроорганизмов при определенной температуре.
- счетный прибор для измерения выращенных колоний бактерий и сушильные шкафы.
Обязательным элементом являются холодильники. Используются как электрические, так и газовые с температурным режимом от 40С до 60С. Могут применяться походные сумки-холодильники, если бактериологический анализ проводится в полевых условиях.
Забор и транспортировка
Для проведения исследования требуется правильно подготовить воду. Ее забор делается по схеме:
-
Берется только стерильная бутылка. - Водопроводный кран, откуда будет делаться забор воды, предварительно обжигается.
- Из крана на протяжении 7-10 минут должна сливаться вода. Только после этого ее можно набирать в стерильную емкость.
- Тара наполовину набирается водой, закрывается пробкой и перевозится в лабораторию. При этом вода при доставке к месту анализа не должна контактировать со стерильной пробкой.
Для исследования подходит только та вода, с момента забора которой прошло не больше 1,5 часа.
Сам анализ проводится по следующему плану:
- Осуществляют подготовку лабораторной посуды и всех материалов. Вся посуда стерилизуется, промывается и тщательно сушится. Стерилизация происходит в сушильном шкафу. Температура внутри него должна быть порядка 160-1650С. Посуда обрабатывается сухим жаром на протяжении часа. Вместо сушильного шкафа может применяться автоклав. В нем температура ниже – порядка 1260С. Обработка длится полчаса.
- Простерилизованную посуду вынимают из шкафа только после того, когда он остынет до температурных значений меньше 600С.
- Обработанную посуду помещают в лабораторные шкафы. Они должны плотно закрываться.
- Готовят стерильную воду. Сначала исследуемая вода разливается по флаконам, которые закрываются пробками. После этого флаконы с водой стерилизуются в автоклаве в течение 20 минут при температуре 1200С. Такая вода пригодна для использования в течение 2 недель.
- Готовят питательную среду. Ее компонентами может быть как мясной бульон, так и глюкоза, лактоза или фильтрованная желчь скота.
- Готовят химические реактивы для конкретного анализа.
- Подготовленную питательную среду ставят на водяную баню, после чего охлаждают до 45-500С.
- Расставляют стерильные чаши с пометками.
- Берут несколько проб питательной среды и делают два посева в стерильные чаши.
- Колбы со взятой для анализа воды открывают, обжигают их горлышки и немного продувают их воздухом через пипетку. Она должна быть стерильной.
- Чистой палочкой делается забор воды. Она добавляется в стерильные чаши, которые закрываются пробкой.
- Взятая вода заливается остуженным питательным раствором. Чаша со смесью быстро перемешивается вращательными движениями. Далее чаша ставится на ровную поверхность. Смесь внутри нее должна застыть.
- Чаша с застывшим раствором переворачивается вверх дном и ставится в термостат. Там создается оптимальная среда для выращивания посевов (370С). Чаша находится в термостате сутки.
- Чаша с выращенными колониями микроорганизмов кладется на затемненный фон вверх дном. При помощи лупы делается подсчет количества появившихся колоний бактерий. При подсчетах учитывается число микроорганизмов на 1 см3 взятой для анализа воды.
- Результаты фиксируются в протоколе и регистрационном журнале. Дополнительно фиксируются особые условия, при которых проходил анализ.
Стоимость
Примерная цена процедуры для предприятий составляет 6-8 тысяч рублей. Физические лица могут заказать исследования примерно за 2 тысячи рублей.
Бактериологический анализ можно заказать только в специальных лабораторных центрах. У таких организаций обязательно должна быть лицензия (аттестат) и заключение о том, что они имеют все условия для измерений.
Очистка от обнаруженных бактерий
Очистка воды происходит в несколько этапов. При наличии в ней бактерий применяется хлорирование. Также она очищается путем добавления в нее ионов серебра.
Еще одним эффективным методом является угольная сорбция. В воду добавляется активированный уголь, который поглощает опасные примеси.
Также для очистки воды от бактерий применяется ее ультрафиолетовое обеззараживание при помощи ламп и озонирование, в ходе которого вода очищается осушенным воздухом.
Заключение
Бактериологический анализ воды – способ оценки количества и конкретного вида присутствующих в ней бактерий. Основная цель процедуры – оценка качества воды и проверка ее безопасности.
Чаще всего исследуется водопроводная и речная вода, а также вода из колодцев. Если исследование показало наличие бактерий в воде, то ее очищают методами хлорирования, озонирования, угольной сорбции, ультрафиолетового обеззараживания.
А какова Ваша оценка данной статье?
Источник