Бактерии группы кишечной палочки молоко
Текст работы размещён без изображений и формул.
Полная версия работы доступна во вкладке “Файлы работы” в формате PDF
Бактерии группы кишечной палочки – группа бактерий, объединяющая около 100 видов. Основное место обитания – это кишечник млекопитающих (человека, животных) и птиц, но также способны жить в водной среде, молоке, почве, на руках довольно долгое время. Температурой комфортного развития и размножения является +37⁰С, но могут жить и при +20⁰С, погибают при воздействии температуры свыше +60⁰С в течение 15 минут.
Бактерии группы кишечных палочек – большая группа колиформных бактерий, их содержание является санитарно-показательным. По ГОСТу определение БГКП производят в воде, молоке, мясе и других пищевых продуктах, смывах с оборудования и рук персонала.
Самым известным представителем бактерии группы кишечных палочек является кишечная палочка или Escherichia Coli. Некоторые штаммы этих микроорганизмов вызывают пищевые отравления. Также к колиформным бактериям относятся и сальмонеллы. Заражение сальмонеллой вызывает сальмонеллез. Человек, получивший сильнейшее пищевое отравление токсинами этих микроорганизмов, нуждается в обязательной госпитализации.
В соответствии с ГОСТ 9225—68 «Молоко и молочные продукты» при бактериологическом исследовании молока и других молочных продуктов производят определение бактерий группы кишечной палочки.
Работу мы проводили на базе научно-исследовательского инновационного центра микробиологии и биотехнологии кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ.
Для исследования были использованы 3 пробы молока, полученные от коров, принадлежащих мегаферме «Октябрьская» Чердаклинского района Ульяновской области (рис. 1).
Рис 1. Исследуемые пробы молока |
Все опыты проводили в трёхкратной последовательности.
Для определения бактерий группы кишечной палочки проводили посевы проб молока в пробирки со средой Кода. Продукт считали не загрязненным кишечной палочкой при наличии зеленого окрашивания среды. При пожелтении среды проводили посев на среду Эндо.
Рис. 2. Посевы на среду Кода проб № 1-3 | |
Рис. 3. Пересев материала пробы № 1 на среду Эндо | |
Рис. 4. Пересев материала пробы № 2 на среду Эндо | |
Рис. 5. Пересев материала пробы № 3 на среду Эндо |
В результате проведенных исследований мы установили, что пробы № 2 и № 3, содержат бактерии группы кишечной палочки. Среда Кода имела желтый цвет в пробах № 2 и № 3, на среде Эндо регистрировали в пробе № 2 наличие колоний без металлического блеска (рис. 4) и в пробе № 3 – колоний с металлическим блеском (рис.5).
Для дальнейшей идентификации бактерий кишечной палочки необходимо провести микроскопию мазков с окрашиванием по Грамму и при наличии грамотрицательных палочек провести биохимическую идентификацию выделенных микроорганизмов.
Библиографический список
1. Загуменнов, А.В. Выделение бактериофагов бактерий вида B.bronchiseptica и Kl.pneumoniae / А.В. Загуменнов, Ю.Б. Васильева, Е.И. Суркова, А.Г. Семанин, Е.Б. Мухин / Материалы Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны». – СПб, издательство ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ». – 2015. – С.91-92.
2. Мухин, Е.Б. Разработка препарата на основе бактериофагов / Е.Б. Мухин, Ю.Б. Васильева, А.Г. Семанин, А.В. Загуменнов, Е.И. Суркова / Материалы Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны». – СПб, издательство ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ». – 2015. – С. 146-147
3. Семанин, А.Г. Разработка селективной добавки для выделения возбудителя респираторной инфекции / А.Г. Семанин, Ю.Б. Васильева, А.В. Загуменнов, Е.Б. Мухин / Материалы Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны». – СПб, издательство ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ». – 2015. – С. 196-197.
4. Суркова, Е.И. Выделение фагов респираторных инфекций / Е.И. Суркова, А.Г. Семанин, Ю.Б. Васильева, А.В. Загуменнов, Е.Б. Мухин / Материалы Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны». – СПб, издательство ФГБОУ ВПО «СПбГАВМ». – 2015. – С. 214-215.
5. Нафеев А.А. Зоонозные инфекции, с природной очаговостью, с позиции эпидемиологического и эпизоотологического диагнозов / А.А. Нафеев, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Ю.Б. Васильева // Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной науки». – Ульяновск, ГСХА им. П.А. Столыпина, 2015. – С.50-53.
6. Васильева Ю.Б. Подбор селективных компонентов к питательной среде для выделения B.bronchiseptica / Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.Г. Сверкалова, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Материалы Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной науки». – Ульяновск, ГСХА им. П.А. Столыпина, 2015. – С.12-15.
7. Васильева Ю.Б. Совершенствование диагностики бордетеллеза / Ю.Б. Васильева, А.В. Мастиленко, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин / Материалы VI Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – 2015. – С. 64-67.
8. Мастиленко А.В. Биохимические особенности метаболизма углеводов бактериями рода Bordetella / А.В. Мастиленко, Д.А.Васильев, О.Ю. Борисова, Ю.Б. Васильева, Т.Н. Полетаева, Н.В. Макшанова, АА. Ломакин / Материалы VI Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения». – 2015. – С. 107-111.
9. Зооантропонозные инфекции: учебно-методическое пособие (курс лекций) для студентов и магистрантов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов. – Ульяновск: УГСХА, 2015. – 119 с.
10. Зооантропонозные инфекции: учебно-методическое пособие (практикум) для студентов и магистрантов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов. – Ульяновск: УГСХА, 2015. – 79 с.
11. Эпизоотология и инфекционные болезни животных. Раздел «Общая эпизоотология»: учебно-методическое пособие (практикум) для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов. – Ульяновск: УГСХА, 2015. – 72 с.
12. Эпизоотология и инфекционные болезни животных. Раздел «Общая эпизоотология»: учебно-методическое пособие (курс лекций) для студентов и магистрантов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов. – Ульяновск: УГСХА, 2015. – 163 с.
13. Методические указания к выполнению курсовых работ по дисциплине «Эпизоотология и инфекционные болезни животных» для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии очной и заочной формы обучения по специальности «Ветеринария» / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов [электронный ресурс]. – Ульяновск: УГСХА, 2015. – 29 с.
14. Методические указания к выполнению курсовых работ по дисциплине «Инфекционные болезни животных» для студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии очной и заочной формы обучения по направлению подготовки «Ветеринарно-санитарная экспертиза» / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов [электронный ресурс]. – Ульяновск: УГСХА, 2015. – 29 с.
15. Тестовые задания по дисциплине «Эпизоотология и инфекционные болезни животных»: учебное пособие для самоконтроля студентов факультета ветеринарной медицины и биотехнологии / Ю.Б. Васильева, И.И. Богданов. – Ульяновск: УГСХА, 2015. – 90 с.
Источник
О чем говорит наличие БГКП в питьевом молоке?
У одного и того же производителя регулярно в молоке пастеризованном выявляются бактерии группы кишечной палочки (БГКП). Поскольку реализуемое молоко питьевое не соответствует требованиям ТР ТС 033/2013 (приложение № 8) и учитывая, что данное нарушение создает угрозу причинения вреда жизни и здоровью граждан, в действиях изготовителя продукции имеется административное правонарушение, ответственность за которое предусмотрена частью 2 статьи 14.43 КоАП РФ. В основном наличие БГКП свидетельствует об общем санитарном состоянии производства, об эффективности мытья и дезинфекции оборудования и соблюдения правил личной гигиены работниками именно на производстве. С другой стороны, обнаружение БГКП в продукте может свидетельствовать о неправильных условиях хранения. Таким образом, можно сказать, что виновником присутствия и/или роста этого микроорганизма могут быть производитель продукции, перевозчик и продавец. Кто виноват больше, а кто – меньше, с точки зрения потребителя не важно.
Чтобы исключить доводы владельца некачественной продукции в суде о несоблюдении продолжительности доставки лабораторных проб, температуры транспортировки и условий хранения, при отборе проб следует:
1. Указывать в акте отбора проб продукции температуру хранения продукции на основании записей в журнале учета температурных режимов холодильных витрин в торговых залах магазинов или холодильниках;
2. При поступлении пробы в лабораторию указывать в протоколе испытаний температуру в изотермическом контейнере с поступившей продукцией с помощью инфракрасного термометра, прошедшего поверку.
При выполнении указанных мер доводы о нарушении условий хранения проб до начала испытаний молочной продукции будут являться необоснованными.
Молоко питьевое пастеризованное в потребительской упаковке предназначено для непосредственного употребления в пищу. Пастеризованное молоко должно иметь указанную на упаковке жирность, плотность не менее 1027кг/м3, кислотность не более 21°Т, температуру не выше +6°С, фермент фосфатаза должен отсутствовать.
Изготовитель продукции, заявив на маркировке срок годности продукта 5 суток при температуре хранения ((4±2)°С, должен гарантировать отсутствие бактерий группы кишечной палочки в течение этих пяти суток плюс коэффициент резерва для скоропортящихся продуктов 1,5, т.е. при микробиологических исследованиях на восьмой день хранения от даты производства наличие БГКП не допускается в 0,01см3. Если объем стандартной капли воды – 0,05см3, а молоко на 83% состоит из воды, то наличие БГКП всего в 0,01см3
молока указывает на огромное количество бактерий в стакане молока.
Бактерии группы кишечной палочки являются представителями сем. Enterobacteriaceae, в эту группу входят род эшерихия (Escherichia), цитробактер (Citrobacter), энтеробактер (Enterobacter), клебсиелла (Klebsiella), серрация (Serratia) – бесспоровые, грамотрицательные, аэробные и факультативно-анаэробные палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа. Микроорганизмы, входящие в семейство, являются представителями кишечной микрофлоры.
Получив свое название «условно патогенные», бактерии группы кишечной палочки далеко не так безобидны. Условно патогенные микроорганизмы – это микроорганизмы, которые в обычных условиях обитания в организме человека или животных не вызывают инфекционного процесса, но могут стать причиной заболевания, особенно если попадают в восприимчивый организм штаммы микроорганизмов, продуцирующих токсины. Например, энтерогеморрагические штаммы Escherichia coli способны вызвать у людей геморрагическую диарею и гемолитический уремический синдром. Гемолитико-уремический синдром обычно развивается спустя как минимум одну неделю после первых признаков диареи и проявляется в виде гемолитической анемии, тромбоцитопении (снижение тромбоцитов – клеток, участвующих в свертывании крови) и острой почечной недостаточности.
Штаммы с повышенной патогенностью вызывают заболевание после заражения в низкой дозе, достаточно алиментарным путем получить 1-100 клеток бактерий. Пищевое отравление может вызвать продукт или с очень большой обсемененностью (содержанием) этих бактерий, или же продукт, в котором присутствуют отдельные небезопасные для человека представители этой группы (патогенные).
Молоко, а также изготовляемые на его основе молочные продукты являются повседневным продуктом питания населения, поэтому особенно важно обращать внимание на безопасность молока для здоровья человека. «Безопасность пищевых продуктов – состояние обоснованной уверенности в том, что пищевые продукты при обычных условиях их использования не являются вредными и не представляют опасности для здоровья нынешнего и будущих поколений» (Федеральный закон от 02.01.2000 № 29-ФЗ).
Положениями пункта 1 статьи 36, части 1 статьи 38 Федерального закона N 184-ФЗ предусмотрено, что за нарушение требований технических регламентов изготовитель (исполнитель, продавец, лицо, выполняющее функции иностранного изготовителя) несет ответственность в соответствии с законодательством Российской Федерации.
Источник
В группу БГКП входят представители нескольких родов семейства Enterobacteriaceae, в том числе Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia. Эти микроорганизмы обладают многими общими морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами.
Бактерии группы кишечных палочек – короткие (длина 1-3 мкм, ширина 0,5-0,8 мкм) полиморфные подвижные и неподвижные грамотрицательные палочки, не образующие спор. Бактерии этой группы хорошо растут на простых питательных средах: мясопептонном бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА). На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок небольшой, сероватого цвета, легкоразбивающийся. Образуют пристеночное кольцо, пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой. На среде Эндо образуют плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) или без блеска (Е. aerogenes). Для лактозоотрицательных вариантов кишечной палочки (В. paracoli) характерны бесцветные колонии. Им свойственна широкая приспособительная изменчивость, в результате которой возникают разнообразные варианты, что усложняет их классификацию.
Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других Сахаров, а также спиртов. Не обладают оксидазной активностью. По способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на лактозоотрицательные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или колиформные, которые нормируются по международным стандартам. Из группы ЛКП выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу при температуре 44,5°С. К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной среде.
В соответствии с ГОСТ 32901-2014 «Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа» бактерии группы кишечных палочек (БГКП, коли-формы) – это микроорганизмы семейства энтеробактерий родов эшерихия, цитробактер, энтеробактер, клебсиела, серратия; бесспоровые, грамотрицательные, аэробные и факультативно-анаэробные палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа.
На этих свойствах основано определение БГКП в молочных продуктах в средах Кесслер (в соответствии с 32901-2014 по образованию газа) или Кода (по изменению цвета индикатора) после термостатирования при температуре 37±1°С в течение 24 ч, а для мороженого – 48 ч. Дифференциально- диагностическая – среда Эндо, на которой Е. coli образует красные колонии с металлическим блеском. Образование полупрозрачных бесцветных или бледно-розовых колоний говорит о принадлежности микроорганизмов к лакгозоотри- цательным, в том числе патогенным энтеробактериям.
Санитарно-показательное значение родов неодинаково: наличие эшери хий свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении, цитробактер и энтеробактер (иногда их считают измененными эшерихиями под влиянием пребывания во внешней среде) – показатели давнего или нефекального загрязнения.
В молоке БГКП хорошо размножаются, доводя его кислотность до 50- 80°Т и образуя в нем неровный ноздреватый сгусток. Молочнокислые микроорганизмы замедляют развитие БГКП. При режимах пастеризации, принятых в молочной промышленности, БГКП гибнут. Обычные дезинфицирующие средства полностью обеззараживают оборудование, инвентарь, руки от БГКП.
Дифференциацию БГКП можно проводить с помощью специальных тестов (комплекс признаков ТИМАЦ + Л):
Т – температурный тест (тест Эйкмана, выявляет способность эшери- хий ферментировать глюкозу, лактозу, маннит с образованием газа при 44- 45°С, другие не обладают такой способностью);
И– индолообразование (способность эшерихий расщеплять аминокислоту триптофан с выделением индола);
М – реакция с метиловым красным, заключается в определении кислотообразования при ферментации глюкозы: если индикатор изменяет светло-желтый цвет на красный, это свидетельствует о снижении рН до 5 и о наличии эшерихий и цитробактер, энтеробактер не изменяет цвет индикатора;
А– реакция на ацетилметилкарбинол (ацетоин), выявляет способность микроорганизмов образовывать это вещество в среде с глюкозой; проводится качественная реакция с гидроксидом калия и креатином, дающая розовый цвет, такой способностью обладают только представители рода цитробактер;
Ц – цитратный тест (способность микроорганизмов усваивать в качестве единственного источника углерода лимонную кислоту или ее соли, используют среду Козера с цитратами, цитробактер и энтеробактер растут на таких средах, называются цитратположительными бактериями, эшерихии – нет);
Л – лактозный тест (способность ферментировать лактозу).
Основные (наиболее стабильные) тесты – температурный и цитратный.
При воздействии факторов внешней среды (например, в присутствии антибиотиков) свойства БГКП могут меняться. Для дифференциации видов дополнительно определяют уреазную активность, рост на средах с цианистым калием, ферментацию различных углеводов, используют специальные таблицы.
Критерии санитарной оценки молочных продуктов и других объектов по присутствию СПМ предусмотрены действующими ГОСТ и СанПиН. Использовавшийся ранее показатель бродильного титра заменен показателем отсутствия БГКП в определенной массе продукта. Так, например, в пастеризованном молоке БГКП должны отсутствовать в 0,01 см, в ультрапастеризованном молоке – в 10 см3, ряженке – в 1 г, в кефирной закваске – в 3 мл, в твороге – в 0,001 г.
Источник