Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника микробиология
Оглавление темы “Нормальная микрофлора человека. Дисбактериоз. Влияние на микробы факторов внешней среды.”: Дисбактериоз. Дисбиоз микрофлоры. Диагностика дисбактериоза. Показания для бактериологической диагностики дисбактериоза кишечника.На состав микробных сообществ полостей организма влияют различные факторы: состав и качество пищи, курение и употребление алкоголя, нормальная перистальтика и своевременное опорожнение кишечника и мочевого пузыря, качество пережёвывания пищи и даже характер трудовой деятельности (сидячий или иной). Наибольшее воздействие оказывают заболевания, связанные с изменениями физико-химических свойств эпителиальных поверхностей (например, синдром мальабсорбции), и приём антимикробных препаратов широкого спектра, действую- ] щих на любые, в том числе непатогенные микроорганизмы. В результате выживают более устойчивые виды — стафилококки, кандиды и грамотрицательные палочки (энтеробактерии, псевдомонады). Следствие этого — стойкие нарушения микробных ценозов — дисбактериозы, или дисбиозы. Наиболее тяжёлые формы дисбактериозов — стафилококковый сепсис, сие- ! темный кандидоз и псевдомембранозный колит; среди всех форм доминируют поражения микрофлоры кишечника. • Показания для бактериологической диагностики дисбактериоза кишечника: длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не удаётся выделить патогенные энтеробактерии; затяжной период реконвалесценции после перенесённой кишечной инфек- ции; дисфункции ЖКТ на фоне или после проведённой антибиотикотерапии или у лиц, постоянно контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует проводить при болезнях злокачественного роста, у страдающих диспептическими расстройствами, лиц, подготавливаемых к операциям на органах брюшной полости, недоношенных или травмированных новорождённых, а также при наличии бактериемии и гнойных процессов, трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты, холециститы и др.). • Посевы изучают на наличие патогенных микроорганизмов и на нарушение соотношения различных видов микробов. Результаты исследования следует считать объективными при анализе роста изолированных колоний в том случае, если можно изучить морфологию и подсчитать количество колоний на чашку Пётри. После идентификации проводят пересчёт содержания микроорганизмов каждого вида на 1 г исследуемого материала. При обнаружении патогенной микрофлоры необходимо изучить ее чувствительность к антибактериальным препаратам и бактериофагам. При определении чувствительности следует отдавать предпочтение антибиотикам узкого спектра для возможно более направленного подавления патогенов. • К оценке результатов следует подходить осторожно, поскольку состав кишечной микрофлоры варьирует. Необходимо отличать истинный дисбактериоз от дисбактериаяьнъа реакций {сдвиги в составе микрофлоры незначительны, либо кратковременны и не требуют специфической коррекции). При истинном дисбактериозе нарушения микробного ценоза обычно коррелируют с клиническими проявлениями, и их нормализация достаточно длительна (20-30 сут). При оценке результатов следует указать наличие или отсутствие патогенной микрофлоры и дать состав присутствующих микроорганизмов. • Повторные исследования при дисбактериозе. Следует отразить положительную или отрицательную динамику изменения в составе микробных сообществ. • Коррекция дисбактериозов. Для коррекции дисбактериозов следует применять эубиотики — взвеси бактерий, способные восполнить численность недостающих или дефицитных видов. В отечественной практике широко применяют бактерийные препараты в виде высушенных живых культур различных бактерий, например, коли-, лакто- и бифидобактерины (содержащие соответственно Escherichia coli, виды Lactobacillus и Bifidobacterium), бификол (содержащий | виды Bifidobacterium и Escherichia coli), бактисубтил (культура Bacillus subtilis) и др.
– Также рекомендуем “Влияние на микробы физических факторов внешней среды. Температура. Мезофильные виды бактерий. Термофильные виды. Психрофильные виды.” |
Источник
Диагноз дисбактериоза устанавливается на основании клинической картины, отсутствия эффекта или ухудшения состояния после применения антибиотиков. Для подтверждения диагноза дисбактериоза кишечника, помимо клинической картины, большое значение имеют данные лабораторных методов (бактериологических и серологических). При этом необходимо повторное обнаружение в посевах кала обильного роста условно-патогенных бактерий, таких как бактерий рода протея, стафилококков, дрожжеподобных грибов, лактозонегативных эшерихий и др.
Методика исследования кала на дисбактериоз. Исследуются испражнения больных (5-10 г), которые собирают в стерильные баночки. Консервант к испражнениям не добавляется. Для сбора испражнений используются горшки, судна и другая посуда, в которую кладется плотная стерильная бумага для защиты материала от возможных следов дезраствора. Собранный материал следует немедленно доставить в лабораторию и до посева хранить в холодильнике, но не более 4 ч. Особенно важно сбор материала проводить до начала антибактериального лечения.
Для выявления анаэробной микрофлоры рекомендуется разводить испражнения физиологическим раствором в 10 раз. Из этого основного разведения делают ряд последующих (1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10000, 1 : 100000). Из последнего разведения делают посевы по 0,1 мл на среды Эндо, Левина, Сабуро, Плоскирева, кровяной агар и др. Количество кишечной палочки и других микробов в 1 г фекалий определяют по числу колоний, выросших на соответствующей питательной среде с пересчетом на количество посеянного материала и степень его разведения.
На 5% кровяном агаре учитывают процентные соотношения между колониями, обладающими и не обладающими гемолизирующими свойствами. Палочку протея легко обнаружить в посеве на агаре по Шукевичу (Н-форма) или среде Ресселя с мочевиной – окрашивание в фиолетово-коричневый цвет при индикаторе тимоловый синий с добавлением кислого фуксина. Чашки со средой Сабуро выдерживают в термостате в течение 3-5 дней, затем плотные колонии пересевают в среду с солодовым суслом и также помещают в термостат на 3-4 дня. При исследовании нативного препарата можно видеть длинные или короткие нити мицелия, характерные для патогенных дрожжеподобных грибов.
Для выявления анаэробных бифидобактерий необходимо делать посев на модифицированную среду Блаурококка. Посев фекалий делают в больших разведениях. На среду Блаурококка засевают 1 г фекалий в разведении от 106 до 1011. Посевы ставят в термостат при 37°С на 24 ч. Из посевов, в которых виден ст в виде помутнения всей среды или отдельных колоний, готовят мазки и Рашивают их по Граму. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах в виде римской цифры V, с несколько утолнными концами подтверждает их принадлежность к бифидобактериям. Выделение чистой культуры бифидобактерий является очень трудоемким и не обязательным, так как определение разведения, в котором их обнаруживают является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного содержания в фекалиях.
При описании кишечной микрофлоры обращают внимание на процентные соотношения следующих микроорганизмов:
лактозонегативных энтеробактерий по отношению к общему числу колоний, выросших на среде Эндо;
гемолизирующей кишечной палочки по отношению к общему числу колоний этого микроба на среде Эндо;
кокковых форм (стафилококков и энтерококков) по отношению ко всем выросшим на кровяном агаре колониям;
гемолизируюших кокковых форм к их общему числу на кровяном агаре.
Кроме этого, обязательно отмечается выделение протея, патогенного стафилококка, грибов Candida, синегнойной палочки и др.
Примеры ответов:
Выявлен незначительно выраженный дисбактериоз кишечника, характеризующийся преобладанием гемолитической кишечной палочки (35%) и наличием коагулазоположительного стафилококка.
Выявлен резко выраженный дисбактериоз кишечника, характеризующийся значительным процентом лактозонегативных эшерихий (70%), гемолизирующего энтерококка (63%), наличием патогенного стафилококка и грибов Candida.
При генерализованном дисбактериозе, когда в патологический процесс вовлекаются кроме кишечника другие органы и системы, следует производить бактериологическое исследование не только фекалий, но также крови и мочи. Кроме традиционного бактериологического исследования показана также микроскопия фекального мазка.
В случае подозрения на кандидамикоз лабораторные исследования состоят из следующих этапов:
микроскопическое исследование испражнений и мочи;
изучение культуральных и биохимических свойств выделенных грибов;
постановка серологических реакций и аллергических проб – реакция связывания комплемента с убитой дрожжеподобной вакциной и полисахаридной фракцией из культуры Candida albicans.
Реакция связывания комплемента считается положительной при разведении сыворотки 1:10 и выше. Реакция агглютинации со взвесью живой культуры дрожжеподобного гриба. Эта реакция считается положительной при разведении сыворотки 1:200 и выше. Обнаружение при микроскопическом исследовании нитей псевдомицелия или почкующихся клеток, а также обильный рост колоний гриба Candida на среде Сабуро дает основание предполагать грибковый дисбактериоз.
Содержание микрофлоры кишечника в норме
Наименование микроорганизмов | КОЕ/г фекалий |
Бифидобактерии | 108-1010 |
Лактобактерии | 106-109 |
Бактероиды | 107-109 |
Пептококки и псптострсптококки | 105- 106 |
Эшерихий | 106-108 |
Стафилококки (гемолитические, плазмокоагулируюшие) | Не более 103 |
Стафилококки (негемолитические, эпидермальные, коагулазоотрицательные) | 104-105 |
Стрептококки | 105-107 |
Клостридии | 103-105 |
Эубактерии | 109-10’° |
Дрожжеподобные грибы | Не более 103 |
Условно-патогенные энтеробактерий и нефермеитирующие грамотрицательные палочки | Не более 103-104 |
Состав микрофлоры кишечника здорового человека представлено в таблице в колониеобразующих единицах (КОЕ) на 1 г фекалий.
У большинства больных при дисбактериозе кишечника возникают как количественные, так и качественные изменения нормальной микрофлоры. Дисбактериоз кишечника проявляется повышенным количеством кишечной палочки со слабо выраженными ферментативными свойствами (> 10%), появлением лактозонегативных энтеробактерий (> 5%), гемолизируюших эшерихий и др.
Весьма показательным признаком дисбактериоза также считают снижение способности микрофлоры инактивировать кишечные ферменты – энтерокиназу и щелочную фосфатазу. Обычно в фекалиях здорового человека они присутствуют в весьма незначительных количествах, а у больных с гастроэнтерологической патологией, особенно с заболеваниями кишечника с сопутствующим дисбактериозом, концентрация их резко возрастает.
Исследование индола, летучих фенолов, желчных и карбоновых кислот позволяет косвенно оценить биохимическую активность кишечной микрофлоры.
Дисбактериоз является динамичным процессом, в котором можно условно выделить отдельные этапы развития.
При преобладании в кишечнике бродильных процессов обращают на себя внимание резко кислый запах испражнений, значительное количество крахмальных зерен и переваренной клетчатки. Кал обычно жидкий с примесью пены, реакция кислая. При микроскопическом исследовании мазков кала, окрашенных раствором Люголя, выявляют большое количество клеток крахмала и обильную йодофильную флору.
Для гнилостной диспепсии характерен жидкий или кашицеобразный стул коричневого цвета со зловонным запахом. Кал имеет щелочную реакцию. При микроскопии в испражнениях обнаруживают остатки непереваренных мышечных волокон.
При копрологическом исследовании для слизистой колики типична примесь к испражнениям трубкообразной или лентообразной слизи, что обусловлено ее гиперсекрецией и спастическим состоянием толстой кишки. В слизи большое количество эозинофилов, кристаллов Шарко-Лейдена, в ряде случаев – много кристаллов кислого кальция фосфата.
Жидкие испражнения отражают гиперсекрецию в толстой кишке. При ложном поносе стул всегда водянистый или кашицеобразный, обычно с признаками бродильной диспепсии. Копрограмма при кишечном дисбактериозе нередко характеризуется повышенным содержанием лейкоцитов, часто одновременно с эритроцитами. Реакция на белок может быть положительной (определяется методом Гауфона).
Для запора типично исчезновение клетчатки или крахмала и вместе с тем отсутствие йодофильной флоры. При нарушениях пищеварения в илеоцекальном отделе кишки, обусловленных дисбактериозом, кал чаще не оформлен, золотисто-желтого цвета, запах кислый, реакция слабокислая. При копрологическом исследовании обнаруживается в большом количестве перевариваемая клетчатка и внутриклеточный крахмал, обильная йодофильная флора, в незначительном числе измененные мышечные волокна и расщепленный жир.
При дистальном колите кал не оформлен, содержит слизь, нередко в большом количестве, в нем много лейкоцитов, клеток кишечного эпителия.
Дискинетический синдром характеризуется фрагментами кала, окутанными слизью.
Синдром недостаточности всасывания (синдром мальабсорбции) – клинический симптомокомплекс, обусловленный нарушением питания организма вследствие расстройств процессов абсорбции в тонкой кишке. Чаще развивается при патологии тонкой кишки, в том числе и при дисбактериозе. Кроме того, синдром может быть связан с нарушением гидролиза пищевых веществ в результате снижения продукции пищеварительных ферментов в желудке и поджелудочной железе с уменьшением всасывательной поверхности кишки при ее резекции, лимфогранулематозе и других патологических процессах в ней. Синдром мальабсорбции характеризуется расстройством обмена веществ – жирового, углеводного, белкового, водно-солевого, а также нарушением обмена витаминов.
Источник
Цель. Определение состава фекальной микрофлоры : выделение чистой культуры фекальных микроорганизмов и идентификация.
Исследуемый материал – различные разведения фекалий в физиологическом растворе от 101 до 1011.
1-й этап.Получение изолированных колоний фекальной микрофлоры.
Ход работы.
1.Делают посевы соответствующих разведений испражнения на среды:
-для выявления анаэробных бифидобактерий необходимо делать посевы фекалий в разведениях от 106 до 1011 глубоким уколом в пробирки с полужидкой средой Блаурококка (печеночно-МПА с цистеином и лактозой);
– для выделения E.сoli – на среду Эндо (Левина),
-для выделения патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.) – на среду Плоскирева,
-для выделения Proteus vulgaris – посев по Щукеевичу в конденсационную воду скошенного МПА,
-для выделения стафилококков с лецитиназной активностью – на желточно-солевой агар,
-для выделения гемолитических бактерий – на кровяной агар,
-для выделения грибов рода Кандида – на среду Сабуро и др.
2.Все посевы помещают в термостат при 37°С на 18-24 часа, Блаурококка – 48 час., за исключением среды Сабуро ( при 28-30°С на 3-5 дней).
2-й этап.Выделение чистой культуры.
Ход работы.
1. Подсчет колоний и макроскопическое описание их:
Выделение чистой культуры бифидобактерий является весьма трудоемким и практически необязательным, так как определение разведения, в котором обнаруживают бифидобактерий является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного содержания их в фекалиях. Из посевов, в которых виден рост в виде помутнения всей среды или отдельных колоний, готовят мазки и окрашивают их по Граму. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах в виде римской цифры V, с несколько утолщенными концами подтверждает их принадлежность к бифидобактериям (рис.24).
-на среде Эндо: определение общего количества E.сoli, подсчет лактозонегативных (бесцветных) и со слабовыраженными ферментативными свойствами (розывые) колоний (рис.25);
-на среде Плоскирева – бесцветных колоний патогенных энтеробактерий (сальмонелл, шигелл и др.);
-на скошенном МПА – рост Proteus vulgaris по всей поверхности;
-на желточно-солевой агаре – лецитиназная активность стафилококков проявляется в виде радужного помутнения вокруг колоний (рис.26);
-на кровяном агаре – колонии бактерий, обладающих гемолитической активностью;
-на среде Сабуро – колонии грибов рода Кандида округлой формы, выпуклые, с гладкой поверхностью, ровными краями, матового цвета. Из подозрительной колонии готовят неокрашенный препарат. При его микроскопии должны быть почкующиеся овальные клетки – псевдомицелии (почкующиеся клетки распалагаются в цепочку). Окрашиваются по Граму положительно.
2.Микроскопическое исследование колоний.
3.Пересев небольшой части колоний на скошенную среду.
4. Инкубация в термостате при 37°С в течение 18-24 часа.
3-й этап. Идентификация выделенной чистой культуры.
Ход работы.
1. Макроскопическое определение роста микробов.
2. Проверка на чистоту выделенной чистой культуры – микроскопическое исследование.
3. Окончательная идентификация по ферментативной активности путем пересева на диференциально-диагностические среды и по др. признакам.
4-й этап. Учет результатов идентификации и оформление заключения о наличие и степени дисбактериоза.
Источник