Бактериологические методы исследования кишечных инфекций
Основным методом
лабораторной диагностики кишечных
инфекций является бактериологический,
основанный на выделении чистой культуры
возбудителя и ее идентификации. Для
идентификации бактерий кишечной группы
используют изучение их ферментативной
активности и антигенной структуры.
Этапы бактериологического исследования
1 день.
Посев исследуемых материалов на
дифференциально-диагностические среды
(Эндо, Плоскирева, Левина).
Для выделения
гемокультуры сальмонелл производят
посев крови на 10-20% желчный бульон или
на среду Рапопорт. Соотношение крови и
среды должно составлять 1:10. Инкубация
18-24 часа при температуре 37ºС
2 день.
Просмотр и описание колоний. Микроскопия
материала из колоний и окраска по Граму.
Пересев материала из колоний на скошенный
МПА, среду Ресселя для накопления чистой
культуры. Со среды Рапопорт культуру
пересевают на среду Эндо и Ресселя.
В случае диффузного
помутнения и изменения цвета среды
Рапопорта (она приобретает красный
цвет) за счет ферментации глюкозы с
образованием кислоты делают предварительный
вывод о наличии возбудителей брюшного
тифа; при наличии кроме этих признаков
газообразования в поплавке – возбудителей
паратифов.
Постановка
ориентировочной реакции агглюцинации
на стекле с материалом из отдельных
колоний и смесью эшерихиозных сывороток,
со смесью дизентерийных сывороток, со
смесью сывороток против сальмонелл,
содержащих антитела против наиболее
распространенных сероваров возбудителей
кишечных инфекций. При положительном
результате проводят реакцию агглютинации
с моновалентными агглютинирующими
сыворотками на стекле.
3 день.
Проверка чистоты выделенной культуры.
Учет изменения цвета среды Ресселя.
Постановка с чистыми культурами реакции
агглютинации на стекле с поливалентными
сыворотками, затем с видовыми и типовыми
сыворотками. Постановка развернутой
реакции агглютинации. Пересев культур
на среды для определения ферментативной
активности (среды Гисса).
4 день.
Учет результатов реакции агглютинации.
Учет роста на
средах Гисса.
Окончательный
ответ о виде и сероваре дают на основании
результатов реакции агглютинации и
“пестрого” ряда.
Возбудители
эшерихиозов ферментируют глюкозу и
лактозу с образованием кислоты и газа,
выделяют сероводород.
Шигеллы ферментируют
углеводы с образованием кислоты.
Возбудители сальмонеллезов не ферментируют
лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу
маннит и мальтозу с образованием кислоты
и газа, не образуют индол и за небольшим
исключением выделяют сероводород.
Дифференциально-диагностическая
таблица кишечно-тифозной группы
Название бактерий | Углеводы | Индол | Подвижность | Экзотоксин | ||||
Лактоза | Глюкоза | Мальтоза | Маннит | Сахароза | ||||
Кишечная палочка | кг | кг | кг | кг | кг или – | + | | |
Паратифозная В-палочка | – | кг | кг | кг | – | – | + | – |
Паратифозная А-палочка | – | кг | кг | кг | – | – | + | – |
Брюшнотифозная | – | к | к | к | – | – | + | – |
Дизентерийная Григорьева-Шига | – | к | – | – | – | – | – | + |
Дизентерийная Флекснера | – | к | к или – | к или – | к или – | | – | – |
Дизентерийная Зонне | к (2-10 суток) | к | к или – | к | к | – | – | – |
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
Бактериологическое исследование – способ проверки биоматериала на наличие
возбудителя инфекционного заболевания. Метод бакпосева позволяет выявить и идентифицировать патогенный микроорганизм даже при относительно малых его концентрациях в тканях. Для этого исследуемые образцы высевают на питательные среды и культивируют для получения визуально видимых колоний возбудителя. Полученные штаммы бактерий типируют и проверяют на устойчивость к антибиотикам.
На заметку! Бактериологические методы исследования уступают по точности иммуноферментному анализу (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР), но в отличие от них, с высокой точностью определяют степень чувствительности выделенных штаммов бактерий к группам антибиотиков. Полученный результат позволяет подобрать максимально эффективное лечение и скорректировать дозы лекарств.
Процедура занимает несколько суток (48-72 часа).
В каких случаях используют бактериологический метод
Исследование проводят для диагностики инфекционных заболеваний с хроническим (реже – острым) течением. Локализация и степень поражения может быть различной. Общие примеры:
- ЗППП и инфекции мочевыделительной системы – хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз и др.;
- кишечные инфекции – дизентерия, брюшной тиф, сальмонеллез;
- хронические поражения органов дыхательной системы – синуситы, тонзиллиты, бронхиты, пневмонии;
- гнойные процессы различной локализации, в том числе гнойничковые поражения кожи. В данном случае определение чувствительности микроорганизма к антибиотикам особенно актуально;
- дисбактериоз слизистых структур – кишечника, половых органов, ротовой полости. Методика позволяет не только выявить патогенных и условно-патогенных возбудителей, но и сделать заключение о составе здоровой микрофлоры;
- сепсис – общее заражение крови.
Последовательность действий и особенности методики
Для проведения бактериологического исследования необходимо выполнить сбор материала и культивировать его на питательных средах с последующей микроскопией полученных штаммов и проверкой чувствительности к антибиотикам.
Сбор материала
Биоматериалом для исследования могут служить кровь, моча, ликвор, мокрота, сперма, кал, мазки из глотки, влагалища, уретры, любые другие ткани и жидкости из области инфекционного процесса. Образцы собирают в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и в течение 2-х часов доставляют в лабораторию. При необходимости пробы хранят при пониженных температурах.
Культивирование
Культивирование проводят с применением механических или биологических методов. Механический подход с использованием стандартных искусственных сред – наиболее распространенный. В данном случае для высевания образцов используют жидкие и твердые питательные составы. Наиболее распространенные – агар, мясо-пептонный бульон.
Посев материала производят с помощью специальной петли или пастеровской пипетки, растирая полученный образец по поверхности или вводя его в толщу питательной среды. Выделение бактерий производят из чистых культур, которые получают повторным посевом ранее выращенных колоний на новую среду.
Биологические методы подразумевают использование специальных питательных сред, которые учитывают особенности микроорганизма, в частности, чувствительность к некоторым химическим веществам, в том числе антибиотикам. В некоторых случаях применяют метод заражения лабораторных животных или тканевых культур с отслеживанием патологических изменений. Такой подход актуален при крайне незначительном накоплении микроба в тканях человека – в этом случае его выделение посевом на питательных средах не дает результата.
Микроскопическое исследование
Основной метод бактериологической диагностики – бактериоскопия. Она подразумевает визуальную оценку параметров микроорганизма под микроскопом. Для этого используют фиксированные и нефиксированные препараты.
Нефиксированные препараты позволяют исследовать живые образцы бактерий. Основные методы:
- раздавленная капля – образец придавливают между предметным и покровным стеклами;
- висячая капля – образец помещают в лунку на предметном стекле и герметично накрывают покровным.В качестве среды используют изотонический раствор или расплавленный агар. Методика позволяет наблюдать за живыми микроорганизмами в течение нескольких дней.
Фиксированные препараты используют для окрашивания с подробным изучением морфологических и некоторых биохимических параметров патогенов. Каплю бактериального состава размазывают по предметному стеклу и фиксируют пламенем горелки или специальными химическими составами.
Для определения свойств бактериальных препаратов используют ряд общих и специфических методик:
- микроскопия – определение формы, размеров, окрашивания по Граму;
- биохимические методы – исследование ферментативной способности микроорганизма к расщеплению тех или иных углеводов, аминокислот, метаболитов, в том числе способность к гемолизу, фибринолизу при попадании в кровь живых существ;
- серологические методы идентификации – реакции агглютинации под воздействием специфической сыворотки и другие антигенные свойства;
- биологические методы – заражение лабораторных ждивотных с проверкой патогенности и токсигенности взятых образцов, их устойчивости к антибиотикам.
Только совокупный анализ результатов всех методов диагностики – микроскопических, биохимических, серологических, биологических – дает объективный результат для вынесения точного диагноза.
Расшифровка результатов
Стандартный результат сводится к двум пунктам анализа:
- качественный анализ с определением факта наличия/отсутствия определенного возбудителя;
- количественный анализ с указанием числа микроорганизмов на единицу объема – выражают в КОЕ (колониеобразующие единицы). Чем выше этот показатель, тем сильнее бактериальное поражение организма данным возбудителем.
Внимание! Отрицательный результат является относительным и показывает отсутствие патогенных организмов лишь в отдельно взятой порции материала. Для большей объективности данных требуется повторное обследование.
Дополнительно указывают чувствительность микроорганизмов к основным классам антибактериальных средств – пенициллинам, тетрациклинам, цефалоспоринам, макролидам. Чем выше показатель чувствительности, тем успешнее будет лечение данным антибиотиком.
Источник
Информация для врачей инфекционистов, врачей – педиатров, семейных врачей, врачей-терапевтов, врачей-эпидемиологов
Актуальность проблемы острых кишечных инфекций (ОКИ) обусловлена широким распространением патологии, тяжестью течения, необходимостью быстрого назначения этиотропной терапии, характер которой зависит от выявления возбудителя инфекции. Этиологическая диагностика ОКИ входит в комплекс первичных противоэпидемических мероприятий.
Вирусологическая лаборатория ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Архангельской области» предлагает выявление следующих возбудителей ОКИ в клиническом материале (фекалиях):
- Групповой антиген ротавирусов методом иммуноферментного анализа (ИФА);
- РНК (ДНК) ротавирусов группы А, норовирусов 2 генотипа, астровирусов, аденовирусов группы F, кампилобактерий, энтероинвазивных эшерихий и шигнелл, сальмонелл методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Наиболее целесообразным является исследование фекалий больного методом ПЦР, так как при этом имеется возможность одномоментной индикации большого количества возбудителей ОКИ, наиболее часто вызывающих инфекцию.
По результатам исследований, выполняемых вирусологической лабораторией, использование метода ИФА для индикации ротавирусов позволяет уточнить этиологию ОКИ в 35% случаев, использование метода ПЦР для индикации указанного спектра возбудителей ОКИ – в 70% случаев.
Использование традиционных бактериологических методов исследований способствует расшифровке не более 30% случаев ОКИ, особенно в зимнее-весенний период времени, когда отмечается рост заболеваемости ОКИ вирусной этиологии.
Правила отбора и доставки материла:
Для выполнения указанных исследований необходимо доставить в вирусологическую лабораторию пробу фекалий, отобранную в острый период заболевания (не позднее 3-го дня от начала клинических проявлений).
Пробу необходимо отобрать в одноразовый пластиковый стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой, который можно приобрести в любой аптеке или получить в лаборатории, выполняющей данное исследование.
Количество отбираемых фекалий – 1-3 мл, фекалии отбираются одноразовой лопаточкой из нескольких мест (4 – 6 раз) в небольшом количестве в один контейнер.
Пробу допускается хранить в условиях холодильника при температуре 2-8ºС, доставить в лабораторию в течение 3 суток. При комнатной температуре проба может храниться не более 6 часов.
Стоимость исследований: обнаружение антигена ротавирусов методом ИФА – 190 рублей, обнаружение спектра возбудителей ОКИ методом ПЦР – 700 рублей.
Вирусологическая лаборатория ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Архангельской области» аккредитована на проведение данных видов исследований.
Аттестат аккредитации Испытательного лабораторного центра № ГСЭН.RU.ЦОА.005 (зарегистрирован в Едином Реестре Системы № POCC RU.0001. 510413 3 июля 2008 года, действителен до 2013г.).
Лицензия на осуществление деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний III- IV групп патогенности № 77.99.15.001.Л. 000961.07.05 от 04.07.2005г. действительна до 04.07.2010г.
Лицензия на осуществление медицинской деятельности № ФС -29-01- 000276 от 17.06.2009г, действительна до 17.06.2013г.
Вирусологическая лаборатория расположена по адресу: г. Архангельск, ул. Гайдара, д. 24, тел/факс 65-27-68.
Источник
17.09.2020 Алёна Машева Здоровье
Кишечные инфекции – большая группа заболеваний, вызываемых патогенными или условно-патогенными бактериями, вирусами и простейшими. Ведущим симптомом таких патологий является диарея. Такие заболевания очень широко распространены в мире, включая развитые страны.
Все кишечные инфекции лечатся одинаково, поэтому выявление конкретного возбудителя важно не лечащему врачу, а ученым-эпидемиологам, изучающим пути распространения, способы передачи, проявления болезни в каждом новом случае, эффективность лечения и другие характеристики бактерии или вируса-возбудителя. Эта информация крайне важна, учитывая широкое распространение кишечных инфекций на планете и их высокую заразность, поскольку бактерии и вирусы изменяются. Кроме того, возбудителя устанавливают для понимания, какие профилактические мероприятия нужно провести, чтобы предотвратить заражение других людей.
Одним из способов выявления инфекционного агента является бактериологический анализ кала. Он проводится при любых обращениях к врачу с жалобами на диарею. Это самый универсальный способ выявления причины кишечной инфекции, не требующий сложной аппаратуры.
Бактериологический анализ кала основан на изучении физиологических свойств возбудителя, выявленного в биоматериале. Он включает культивирование, выделение чистых культур, идентификацию и типирование возбудителей.
Классификация кишечных инфекций
Перечислим заболевания, которые относятся к группе кишечных инфекций.
1. Вызванные бактериями:
2. Вызванные простейшими:
3. Вызванные вирусами:
4. Вызванные условно-патогенными микроорганизмами:
5. Кишечные инфекции невыясненной этиологии.
6. Смешанные кишечные инфекции.
В 40% случаев возбудителем кишечной инфекции являются вирусы, в 20% — бактерии, в 40% возбудитель не удается установить.
По данным ВОЗ острые кишечные инфекции являются причиной 30 % смертельных случаев у детей до 5 лет.
Как правильно сдать анализ
Подготовка к анализу кала на бактериологическое исследование включает особые правила:
Проба должна попасть в лабораторию в максимально короткие сроки. Допускается хранение материала 2 часа при комнатной температуре и 3 часа при температуре 2-8 °С. Для выявления некоторых возбудителей необходим посев на питательную среду сразу же после взятия биоматериала.
Этапы бактериологического анализа кала
1 день. Посев материала на дифференциально-диагностические среды.
Это специальные питательные среды, применяемые для выявления групп бактерий, отличающихся по способности утилизировать то или иное вещество. Например, часто для выращивания возбудителей кишечных инфекций в питательную среду добавляют лактозу. Некоторые бактерии (кишечная палочка) ее расщепляют. Тогда на поверхности среды вырастают окрашенные колонии микроорганизмов. Некоторые микроорганизмы лактозу не расщепляют (сальмонеллы). Тогда вырастают неокрашенные колонии.
2 день. Выросшие колонии просматривают под микроскопом и описывают. Окрашивают по Граму и пересевают на другие специфические среды для накопления чистой культуры возбудителя.
3 день. С бактериями чистых культур проводят реакции агглютинации. Пересевают культуры на другие среды (Гисса) для выяснения ферментативной активности.
4 день. Оценивают результаты реакции агглютинации, рост на средах Гисса. На основании полученной информации дают окончательный ответ о виде возбудителя, присутствующего в кале.
Расшифровка результата
Стандартный анализ кала на бактериологическое исследование включает выявление нескольких групп бактерий. Особое внимание уделяется кишечной палочке – отдельно сообщается о ее колониях с разными ферментативными свойствами. Большинство этих бактерий относится к группе условно-патогенных. То есть они обитают в кишечнике в качестве сапрофитов, но при определенных условиях становятся патогенными. Стандартное исследование включает и бактериологический анализ кала на дисбактериоз. Какие бактерии могут быть обнаружены в пробе? Об этом можно узнать из приведенного ниже (для примера) результата анализа.
Кишечная палочка, или Escherichia coli (E. coli)
Эти микроорганизмы заселяют толстый кишечник ребенка сразу после рождения. Здесь они преобладают среди факультативно-анаэробных бактерий. Кишечные палочки выполняют множество полезных функций в организме человека. Они способствуют выработке иммунитета к патогенным разновидностям бактерии, а также вырабатывают вещества, сдерживающие рост других микроорганизмов.
Бактерии вида E. coli бывают патогенные и условно-патогенные. Под микроскопом одни и другие выглядят одинаково. Их различают по строению антигенов, расположенных на поверхности бактерий. Для этого проводят серологическое исследование. Условно-патогенные кишечные палочки обитают в толстом кишечнике, но на фоне иммунодефицита могут вызвать воспаления и в других органах, например, в мочевыводящих. Патогенные представители E. coli называют диареегенными. Они относятся к транзиторным бактериям, то есть не локализуются постоянно в организме. При попадании в кишечный тракт они вызывают болезни под общим названием эшерихиозы, главным проявлением которых является диарея.
Расшифровка результатов определения количества кишечной палочки
Стандартный бактериологический анализ кала на кишечную группу инфекций включает такие подсчеты количества кишечных палочек:
Общее количество эшерихии коли в 1 г кала у детей колеблется в пределах от 400 млн до 1 млрд, а у взрослых – 300-400 млн. Чрезмерное размножение бактерий в кишечнике приводит к дисбактериозу.
Типичные (классические) кишечные палочки полезны для организма. Их нормальное количество в кале должно быть в интервале 107-108 . Снижение свидетельствует об интоксикации, приводящей к гибели полезной микрофлоры в толстом кишечнике, а также о заселении кишечника паразитами – глистами или простейшими. Другие причины – высокая чувствительность к аллергенам, поражение печени, почек, поджелудочной и щитовидной желез.
Высокое содержание в кале этих бактерий говорит об их чрезмерном размножении, что может привести к появлению гнойных воспалений разной локализации.
Кишечные палочки со сниженной ферментативной активностью – «тунеядцы». При нормальном иммунитете они не вызывают болезни, но и пользы не приносят. Такие бактерии занимают место полезных кишечных палочек. В итоге организм недополучает ряд веществ, включая витамины. В норме их должно быть не больше 105. Их повышение всегда свидетельствует о дисбактериозе и может привести к возникновению воспалений.
Разновидности кишечной палочки, не ферментирующие лактозу (лактозонегативные), являются патогенными. Они поражают клетки толстого кишечника, вызывая диарею. Количество данных бактерий в кале не должно превышать 105. Если у больного с диареей их обнаружено больше, например 106 или 107, значит, именно эти микроорганизмы явились причиной болезни. Неспособность использовать лактозу и некоторые другие свойства роднят их с шигеллами – возбудителями дизентерии.
Гемолитические кишечные палочки являются патогенными, локализуются, в основном, в слепой кишке. Вызывают геморрагический колит с симптомами общей интоксикации (тошнота, рвота). В норме в кале отсутствуют.
Условно-патогенные микроорганизмы, способные вызвать кишечную инфекцию
Все чаще бактерии, постоянно обитающие в толстом кишечнике человека, вызывают инфекции различной локализации – пищеварительного тракта, дыхательной или мочеполовой системы. К этому приводят ухудшающаяся экологическая обстановка, бесконтрольный прием антибиотиков и других препаратов, постоянное присутствие бактерий в окружении человека. Заболевают, как правило, новорожденные и дети первых 6 месяцев жизни.
Можно выполнить бактериологический анализ кала в «Инвитро». Это сеть лабораторий, филиалы которых есть во всех крупных городах. Пациентам нравится то, что результаты анализа можно получить онлайн, то есть не нужно за ними ехать в лабораторию.
Стафилококки
Существует три вида бактерий рода Staphylococcus, которые способны вызвать кишечную инфекцию:
Золотистый стафилококк является самым патогенным из них, то есть при попадании в организм всегда вызывает развитие болезни. Поэтому в результатах анализа он обычно прописывается отельной строкой. В норме золотистого стафилококка в кале быть не должно. На картинке представлен вид чистой культуры золотистого стафилококка под микроскопом.
Эпидермальный вид также является патогенным, но он менее агрессивен, чем золотистый, то есть может присутствовать в организме, не повреждая его. Сапрофитный вид является обычным обитателем толстого кишечника. Суммарно количество эпидермального и сапрофитного стафилококков не должно превышать 104.
Патогенные микроорганизмы, вызывающие кишечные инфекции
Бактериологический анализ кала на патогенную кишечную группу включает определение бактерий рода Salmonella и рода Shigella. Они являются патогенными, то есть в случае попадания в кишечник вызывают патологии – сальмонеллез, брюшной тиф, дизентерию. В норме отсутствуют в организме, поэтому не выделяются с калом.
Реже в анализах кала обнаруживают другие патогенные микроорганизмы, способные вызвать кишечные инфекции.
Вирусы при анализе кала
У детей первого года жизни возбудителями кишечных инфекций могут быть различные вирусы. При анализе кала микроскопическими и бактериологическими методами вирусы не выявляются.
Обнаружение в кале возбудителей любых кишечных инфекций требует госпитализации детей до 3-месячного возраста. Желательна госпитализация и детей до года.
При установлении дизентерии, сальмонеллеза, стафилококковой инфекции, пищевых токсикоинфекций, эшерихиоза у взрослых и детей старше года назначают лечение на дому. Если течение болезни тяжелое или существует высокая степень риска распространения болезни, больных госпитализируют в инфекционную больницу.
Источник: fb.ru
Источник