Бактериологический метод диагностики острых кишечных инфекций

Бактериологическое исследование – способ проверки биоматериала на наличие

возбудителя инфекционного заболевания. Метод бакпосева позволяет выявить и идентифицировать патогенный микроорганизм даже при относительно малых его концентрациях в тканях. Для этого исследуемые образцы высевают на питательные среды и культивируют для получения визуально видимых колоний возбудителя. Полученные штаммы бактерий типируют и проверяют на устойчивость к антибиотикам.

На заметку! Бактериологические методы исследования уступают по точности иммуноферментному анализу (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР), но в отличие от них, с высокой точностью определяют степень чувствительности выделенных штаммов бактерий к группам антибиотиков. Полученный результат позволяет подобрать максимально эффективное лечение и скорректировать дозы лекарств.

Процедура занимает несколько суток (48-72 часа).

В каких случаях используют бактериологический метод

Исследование проводят для диагностики инфекционных заболеваний с хроническим (реже – острым) течением. Локализация и степень поражения может быть различной. Общие примеры:

• ЗППП и инфекции мочевыделительной системы – хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз и др.;
• кишечные инфекции – дизентерия, брюшной тиф, сальмонеллез;
• хронические поражения органов дыхательной системы – синуситы, тонзиллиты, бронхиты, пневмонии;
• гнойные процессы различной локализации, в том числе гнойничковые поражения кожи. В данном случае определение чувствительности микроорганизма к антибиотикам особенно актуально;
• дисбактериоз слизистых структур – кишечника, половых органов, ротовой полости. Методика позволяет не только выявить патогенных и условно-патогенных возбудителей, но и сделать заключение о составе здоровой микрофлоры;
• сепсис – общее заражение крови.

Последовательность действий и особенности методики

Для проведения бактериологического исследования необходимо выполнить сбор материала и культивировать его на питательных средах с последующей микроскопией полученных штаммов и проверкой чувствительности к антибиотикам.

Сбор материала

Биоматериалом для исследования могут служить кровь, моча, ликвор, мокрота, сперма, кал, мазки из глотки, влагалища, уретры, любые другие ткани и жидкости из области инфекционного процесса. Образцы собирают в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и в течение 2-х часов доставляют в лабораторию. При необходимости пробы хранят при пониженных температурах.

Культивирование

Культивирование проводят с применением механических или биологических методов. Механический подход с использованием стандартных искусственных сред – наиболее распространенный. В данном случае для высевания образцов используют жидкие и твердые питательные составы. Наиболее распространенные – агар, мясо-пептонный бульон.

Посев материала производят с помощью специальной петли или пастеровской пипетки, растирая полученный образец по поверхности или вводя его в толщу питательной среды. Выделение бактерий производят из чистых культур, которые получают повторным посевом ранее выращенных колоний на новую среду.

Биологические методы подразумевают использование специальных питательных сред, которые учитывают особенности микроорганизма, в частности, чувствительность к некоторым химическим веществам, в том числе антибиотикам. В некоторых случаях применяют метод заражения лабораторных животных или тканевых культур с отслеживанием патологических изменений. Такой подход актуален при крайне незначительном накоплении микроба в тканях человека – в этом случае его выделение посевом на питательных средах не дает результата.

Микроскопическое исследование

Основной метод бактериологической диагностики – бактериоскопия. Она подразумевает визуальную оценку параметров микроорганизма под микроскопом. Для этого используют фиксированные и нефиксированные препараты.

Нефиксированные препараты позволяют исследовать живые образцы бактерий. Основные методы:

• раздавленная капля – образец придавливают между предметным и покровным стеклами;
• висячая капля – образец помещают в лунку на предметном стекле и герметично накрывают покровным.В качестве среды используют изотонический раствор или расплавленный агар. Методика позволяет наблюдать за живыми микроорганизмами в течение нескольких дней.

Фиксированные препараты используют для окрашивания с подробным изучением морфологических и некоторых биохимических параметров патогенов. Каплю бактериального состава размазывают по предметному стеклу и фиксируют пламенем горелки или специальными химическими составами.

Для определения свойств бактериальных препаратов используют ряд общих и специфических методик:

• микроскопия – определение формы, размеров, окрашивания по Граму;
• биохимические методы – исследование ферментативной способности микроорганизма к расщеплению тех или иных углеводов, аминокислот, метаболитов, в том числе способность к гемолизу, фибринолизу при попадании в кровь живых существ;
• серологические методы идентификации – реакции агглютинации под воздействием специфической сыворотки и другие антигенные свойства;
• биологические методы – заражение лабораторных ждивотных с проверкой патогенности и токсигенности взятых образцов, их устойчивости к антибиотикам.

Только совокупный анализ результатов всех методов диагностики – микроскопических, биохимических, серологических, биологических – дает объективный результат для вынесения точного диагноза.

Расшифровка результатов

Стандартный результат сводится к двум пунктам анализа:

• качественный анализ с определением факта наличия/отсутствия определенного возбудителя;
• количественный анализ с указанием числа микроорганизмов на единицу объема – выражают в КОЕ (колониеобразующие единицы). Чем выше этот показатель, тем сильнее бактериальное поражение организма данным возбудителем.

Внимание! Отрицательный результат является относительным и показывает отсутствие патогенных организмов лишь в отдельно взятой порции материала. Для большей объективности данных требуется повторное обследование.

Дополнительно указывают чувствительность микроорганизмов к основным классам антибактериальных средств – пенициллинам, тетрациклинам, цефалоспоринам, макролидам. Чем выше показатель чувствительности, тем успешнее будет лечение данным антибиотиком.

Источник

Вопросы для самоподготовки:

1. Энтеропатогенные ки­шечные палочки. Диагностика колиэнтеритов.

2. Сальмонеллы – возбудители брюшного тифа и паратифов, их свойства Патогенез брюшного тифа. Микробиологическая диагностика брюшного тифа и пара­тифов. Лечение и профилактика.

3. Сальмонеллы – возбудители гастроэнтероколитов. Микробиологиче­ская диагностика гастроэнтероколитов.

4. Шигеллы. Свойства и классификация возбудителей дизентерии. Микро­биологическая диагностика дизентерии.

5. Холерный вибрион и его свойства. Патогенез и клиника холеры. Этапы микробиологичекой диагностики холеры.

6. Характеристика возбудителей ботулизма. Микробиологическая диагности­ка ботулизма.

Теоретический материал для самоподготовки

Вопрос 1. Эшерихии (род Escherichia)

Типовой вид – E.coli, имеет наибольшее значение в медицине. Заболевания, вызываемые E.coli, называются эшерихиозами.

Морфологические признаки: E.coli – мелкие палочки с закругленными концами, грамотрицательные, спор не образуют, перитрихи. Некоторые штаммы имеют микрокапсулу.

Чистая культура E.coli. Колонии кишечной палочки на среде Эндо.

Окраска по Граму.

Культуральные признаки: E.coli – факультутативный анаэроб, хорошо растет на простых питательных средах, давая на жидких – помутнение, на плотных – выпуклые колонии серого цвета S- или R-типа. Элективной средой является среда Эндо, на которой E.coli образует красные колонии с металлическим блеском.

Антигенная структура: E.coli имеет:

– соматический О-антиген (имеет более 170 вариантов), который определяет серогруппу,

– поверхностный К-антиген, который по чувствительности к температуре подразделяется на А, В и L- фракции (чаще преобладает В-фракция), К-антиген имеет более 100 вариантов,

– Н-антиген имеет более 50 вариантов, определяет серовар.

Штаммы E.coli, отличающиеся по антигенам (антигенной формуле), называются сероварами (серотипами). Например, штамм О55:К5:H21 относится к серогруппе О55.

Биохимические признаки. Наиболее важным признаком E.coli является ее способность ферментировать лактозу. Дифференциально-диагностические признаки E.coli:

– ферментация глюкозы с образованием кислоты и газа,

-продукция индола и неспособность образовывать сероводород.

По антигенным и токсигенным свойствам возбудителей разделяют на условно-патогенные и патогенные кишечные палочки:

– условно-патогенные кишечные палочки – комменсалы (представители нормальной микрофлоры кишки), возбудители оппортунистических инфекций (парентеральных эшерихиозов) в виде сепсиса, перитонита, цистита т.д.; –

– патогенные, или диареегенные кишечные палочки – вызывают энтеральные эшерихиозы (гастроэнтериты, колиты и др.).

Заболевания, вызываемые диареегенными Escherichia coli:

1. Энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП) – факторы патогенности: пили, факторы колонизации (CF), термолабильный (LT= аналог холерного токсина) и термостабильный (ST) токсины. Поражается тонкая кишка . Заболевания – диарея путешественников, холероподобная диарея у детей и взрослых.

2. Энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП) – факторы патогенности : факторы инвазии – поверхностные белки, кодируемые большой плазмидой, определяющие ивазию ЭИКП в клетки эпителия толстой кишки с последующим разрушением эпителия. Вызывают дизентериеподобное заболевание (стул с небольшой примесью крови).

3. Энтеропатогенные кишечные палочки (ЭПКП), разрушающие микроворсинки и повреждающие апикальную часть эпителия тонкой кишки. Факторы патогенности – белок-адгезин наружной мембраны, кодируемый плазмидой, и белок наружной мембраны интимин, кодируемый хромосомным геном. Вызывают диарею у детей 1 года жизни.

4. Энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП, например, E. coli О157:Н7) с преобладанием геморрагического фактора, вызывающего гемолитический уремический синдром. Поражается толстая кишка . Факторы патогенности: пили, шигаподобные токсины (SLT I,SLT II; веротоксины), разрушающие эндотелий мелких кровеносных сосудов; белок наружной мембраны интимин, кодируемый хромосомным геном. Вызывают геморрагический колит(диарея с примесью крови); гемолитико-уремический синдром.

5. Энтероаггрегирующие кишечные палочки (ЭАГКП) с персистенцией, вызывают тяжелое обезвоживание детей. Аггрегируют на культуре клеток Нер-2. Поражается тонкая кишка . Механизм поражения: плазмидоопосредованное аггрегативное прикрепление, предупреждающее абсорбцию жидкости . Вызывают диарею у детей.

Микробиологическая диагностика.

Основной метод – бактериологический. Материал засевают на среду Эндо. Выбирают не менее 10 колоний красного цвета с металлическим блеском и ставят реакцию агглютинации на стекле с О-сыворотками. Определяют вид чистой культуры (грамотрицательные палочки, оксидазоотрицательные, ферментирующие глюкозу и лактозу до кислоты и газа, образующие индол, не образующие H2 S) и принадлежность к серогруппе, что позволяет отличить условно-патогенные кишечные палочки от диареегенных. Внутривидовая идентификация, имеющая эпидемиологическое значение, заключается в определении серовара с помощью диагностических адсорбированных иммунных сывороток.

Лечение.

Для лечения применяют антибиотики тетрациклинового ряда, цефалоспорины последних поколений, фторхинолон, хлорамфеникол, для предупреждения развития грибков в ЖКТ параллельно назначают антимикотики, например, нистатин; при непереносимости антибиотиков или детям до года назначают коли-протейный бактериофаг. Для восстановления нормальной микрофлоры ЖКТ после применения антибиотиков или одновременно с ними рекомендуется назначать эубиотики: бифидумбактерин, лактобактерин, колибактерин и др.

Профилактика.

Специфической профилактики нет. В экстренных случаях всем контактировавшим с больным назначают коли-протейный бактериофаг и эубиотики: бифидумбактерин, лактобактерин, колибактерин и др.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #
• #

Источник