Элективная среда для возбудителей кишечного семейства
Оглавление темы “Методы выделения бактерий. Микроскопия. Питательные среды для культивирования бактерий.”: Характеристики питательных сред для культивирования бактерий. Консервирующие среды для бактерий. Среды обогащения для бактерий. Элективные и селективные питательные среды для выращивания бактерий.Консервирующие питательные среды предупреждают отмирание патогенов и подавляют рост сапрофитов. Наибольшее применение нашли глицериновая смесь (среда Тйга), гипертонический раствор, глицериновый консервант с LiCl2, раствор цитрата натрия и дезоксихолата натрия (среда Бенгсанга-Эллиота).
Среды обогащения для бактерийСреды обогащения (например, среда Китта-Тароцци, селенитовый бульон, тиогликолятная среда) применяют для накопления определённой группы бактерий за счёт создания условий, оптимальных для одних видов и неблагоприятных для других. Наиболее часто в качестве подобных агентов используют различные красители и химические вещества — соли жёлчных кислот, тетратионат Na+, теллурит К , антибиотики, фуксин, гендиановый фиолетовый, бриллиантовый зелёный и др. Элективные и селективные питательные среды для выращивания бактерийЭлективные и селективные среды (например, среды Уилсона-Блэра, Эндо, Плоскирева, Мак-Конки) предназначены для первичного посева материала или для пересева с консервирующих сред или сред обогащения с целью получения чистой культуры. Среды готовят с учётом биохимических и энергетических потребностей микроорганизмов. Соответственно, выделяют кровяные и сывороточные среды (например, Леффлера, Борде-Жангу), яичные среды (например, Левенштайна-Йенсена) и др. – Также рекомендуем “Дифференциально-диагностические питательные среды для культивирования бактерий. Среды содержащие белки. Среды содержащие углеводы. Среды для определения редуцирующей способности бактерий.” |
Источник
Глюкозо-пептонная среда (Эйкмана) (ГПС)
Глюкозо-пептонная среда готовится в двух модификациях: концентрированная и разведенная. Концентрированная глюкозо-пептонная среда. К 1 л водопроводной воды прибавляют 100 г пептона, 100 г глюкозы и 50 г хлористого натрия. Сначала в воде растворяют пептон и соль, кипятят, фильтруют и, добавив в фильтрат глюкозу, устанавливают pH 7,4. Если необходимо, среду подщелачивают. После установления pH среду кипятят; если образовался осадок, фильтруют.
Концентрированную среду разливают в бродильные сосуды 1 и пробирки с поплавками с таким расчетом, чтобы при посеве среда разбавлялась посевным материалом в 10 раз. Для посева 100 мл воды нужно в бродильный сосуд поместить 10 мл ГПС, а в пробирки для посева 10 мл воды вливают по 1 мл ГПС. Стерилизация концентрированной глюкозо-пептонной среды осуществляется в кипятильнике Коха по 30 мин в течение трех дней.
В практической работе для сокращения срока стерилизации глюкозо-пептонной среды можно рекомендовать следующий режим. Температуру автоклава вначале доводят до 120°С и стерилизуют среду при этой температуре 5 мин. Постепенно снижают давление в автоклаве, выпуская пар и прекратив нагрев, до 0 ат (что соответствует температуре 100 °С) и при 100 °С (при открытом паровыпускном клапане) выдерживают среду еще 15 мин.
Разведенная глюкозо-пептонная среда содержит в 10 раз меньше всех плотных ингредиентов, чем концентрированная. Это достигается прибавлением к одной части концентрированной среды девяти частей воды. Разведенную глюкозо-пептонную среду разливают в пробирки с поплавками по 9 мл. Стерилизуют так же, как и основную среду. Используют разведенную глюкозо-пептонную среду при посеве малых количеств воды или ее разведений.
Среда Булира
При санитарной оценке воды и молока для определения в них коли-титра вместо ГПС можно применять среду Булира в разведенном и концентрированном виде.
Концентрированная среда Булира – основной раствор. Используется она в тех случаях, когда для посева берут 10 мл воды и более. К 1 л мясопептонного бульона добавляют 2,5 г маннита и после растворения устанавливают pH 6,8-7,0. Кипятят среду 10 мин, затем в горячий раствор добавляют насыщенный водный раствор нейтральрота до появления ясной вишнево-красной окраски. Среду фильтруют и разливают в бродильные сосуды и пробирки с поплавками с таким расчетом, чтобы при посеве среда разбавлялась посевным материалом в 3 раза. Обычно среды в бродильный сосуд наливают в 2 раза меньше, чем вносится посевного материала, т.е. для посева 10 мл воды в бродильный сосуд наливают 5 мл среды, для посева 100 мл воды нужно налить 50 мл среды и пр. Стерилизация среды Булира проводится в кипятильнике Коха по 30 мин в течение трех дней. Можно стерилизовать ее и в автоклаве при 120 °С в течение 15 мин.
При исследовании молока, а также при анализе воды, когда для посева берут небольшие количества продукта, готовят разведенную среду Булира: к одной части концентрированной среды приливают две части воды. Разведенную среду Булира разливают в пробирки с поплавками по 6-7 мл. Стерилизуют, как указано выше. Среда ГПС и среда Булира являются средами накопления.
Среда Кеслера
Среда Кеслера применяется для определения коли-титра в молоке и других молочных продуктах. К 1 л водопроводной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании в течение 20-30 мин, фильтруют ее через вату и в фильтрате растворяют 10 г лактозы. Объем доводят до 1 л. pH среды устанавливают 7,4-7,6, добавляют 2-4 мл 1%-ного раствора (водного) генцианвиолета на 1 л среды. В пробирки с поплавками разливают по 5 мл среды и стерилизуют 15 мин при 120 °С.
Источник
Специальные питательные
среды – среды, на которых
создаются условия для выращивания тех
бактерий, которые не растут на простых средах. Кровяной агар или кровяной
бульон – получают путем добавления к питательной среде 5-10% подогретой
стерильной дефибринированной крови барана,
кролика лошади, человека. Среда используется для выделения стрептококков, пневмококков
и других бактерий, а также для изучения
гемолитической активности. Сывороточный бульон или сывороточный агар получают,
путем добавления к простым средам 15-20% лошадиной или бычьей сыворотки. Среда
применяется для выделения пневмококков, менингококков.
Желчный бульон или желчный агар получают
путем добавления к питательной среде медицинской желчи без консерванта, или свежеполученной от крупного
рогатого скота. Среда применяется для
выделения брюшнотифозных, паратифозных и дизентерийных палочек. Специальные
среды для культивирования анаэробных бактерий:
среда Китта-Тароцци состоит из питательного бульона, глюкозы и кусочков печени или мясного фаршадля
адсорбции кислорода.
Желатин
– животный белок, продукт частичного гидролиза коллагена. Имеет вид бесцветных
или светло-желтых пластинок без запаха и вкуса. В холодной воде набухает, сильно
поглощая воду. При температуре
30°С растворяется, при охлаждении до 20-22°С превращается в гель (студень).
Используется в микробиологии для изучения протеолитических ферментов.
Дифференциально-диагностические
среды позволяют различить один вид микроба от другого. Принцип построения
дифференциально-диагностических сред основан на разной биохимической активности
бактерий. В состав дифференциально-диагностических сред входит основная питательная среда, обеспечивающая размножение
бактерий, определенный химический субстрат, различное отношение к
которому является диагностическим
признаком, индикатор, изменение цвета которого свидетельствует о разложении субстрата и образовании кислых
продуктов.
Агар Эндо
– плотная среда, применяется для выделения и первичной идентификации
энтеробактерий. В состав ее входят, кроме питательной основы, лактоза и основной
фуксин, обесцвеченный сульфитом и фосфатом натрия. Правильно приготовленная среда
бесцветна или имеет слегка розовый оттенок. Колонии бактерий (кишечная палочка),
ферментирующие лактозу, окрашиваются
на ней в красный цвет; бактерии, не ферментирующие
лактозу (сальмонеллы), остаются бесцветными.
Среда
Левина (лактозоэозинметиленовый агар) – среда для выделения энтеробактерий.
Колонии лактозоферментирующих бактерий окрашены в темно-синий или черный цвет, колонии лактозоотрицательных
бактерий вырастают под цвет среды (светло-фиолетового цвета).
Среды
Гисса – набор определенных углеводов для изучения ферментативной активности
бактерий и их дифференциации по этим признакам.
Элективные
питательные среды содержат дополнительные вещества, задерживающие рост
грамположительных бактерий. Селективные питательные среды стимулируют рост одних
микробов и угнетают рост других. Селективные условия получают путем
добавления в среду химических веществ. Так как в этих средах патогенные бактерии размножаются и накапливаются, их называют
также средами обогащения.
Среда
Плоскирева – плотная питательная среда, содержащая соли желчных кислот, бриллиантовый
зеленый, лактозу и индикатор. Эта среда является не только селективной, так как
подавляет рост многих микробов и способствует лучшему росту возбудителей брюшного
тифа, паратифов,
дизентерии, но и дифференциально-диагностической, так как лактозоотрицательные
бактерии (шигеллы) образуют на ней бесцветные колонии, а лактозоположительные – кирпично-красные.
Селенитовая среда – является
лучшей средой обогащена для сальмонелл и
дизентерийных микробов Зонне. Селенит натрии, содержащийся в среде, стимулирует
рост этих бактерий и подавляет рост сопутствующей флоры.
Среда Мюллера служит для накопления
сальмонелл. К питательной среде добавлют
мел, раствор Люголя и гипосульфит натрия. При взаимодействии этих веществ образуется тетратионат натрия, который угнетает
рост кишечных палочек, но создает благоприятные условия для размножения сальмонелл.
Висмут-сульфит агар (среда Вильсона-Блера)
– содержит соли висмута, бриллиантовую
зелень. Сальмонеллы растут на этой среде в виде колоний чернота цвета. Другие виды бактерий на этой среде роста не
дают.
Желточно-солевой
агар (ЖСА) – среда для
выделения стафилококков, содержит до 10% хлорида натрия, что подавляет большинство бактерий, содержащихся в материале. Кроме
того, эта среда является и
дифференциально-диагностической, так как присутствие яичного желтка позволяет выявить фермент
лецитиназу (лецитовителлазу), который образуют патогенные стафилококки. Лецитиназа
расщепляет лецитин на фосфорхолины и
нерастворимые в воде жирные кислоты, поэтому среда вокруг
лецитиназоположительных колоний мутнеет и появляется
опалесцирующая зона в виде «радужного венчика».
Теллуритовые
среды (сывороточно-теллуритовый агар, кровяно-теллуритовый агар) – селективные среды для выделения
дифтерийных бактерий, содержат теллурит
калия. Бесцветная соль теллура, содержащаяся
в питательной среде, восстанавливается дифтерийными бактериями до металла, окрашивающего колонии в черный цвет.
Щелочной агар элективен для холерных вибрионов, щелочная реакция среды (рН 9,0) не препятствует
росту холерных вибрионов, но тормозит рост других микроорганизмов.
Консервирующие среды – среды, содержат добавки, предупреждающие размножение и гибель микробов, что
способствует сохранению их
жизнеспособности. Консервирующие среды применяются когда нет возможности быстрого посева на питательные среды. Для
бактерий наиболее употребительны
консерванты:
а) глицериновая смесь, состоящая
из 0,5 л химически чистого
глицерина и 1,0 л физиологического раствора.
б) боратная
смесь
в) фосфатно-буферная
смесь
Для длительного сохранения свежевыделенных и производственных культур применяют
полужидкий голодный агар, в этой среде при пониженной жизнедеятельности
микробов продукты обмена накапливаются незначительно, что способствует хорошему
сохранению культур.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание – внизу страницы.
Источник