Элективные среды на кишечную группу

Среда Хейфеца.Выпускается в сухом виде. В состав, кроме основных питательных компонентов (вода, пептон, маннит, натрия хлорид), входят розоловая кислота, раствор метиленового синего. Готовая среда красно_фиолетового цвета, при росте кишечной палочки рН сдвигается в кислую сторону, и среда приобретает зеленоватую окраску.

ХБ.В 1000 мл воды растворяют 10 г пептона, 5 г маннита, 5 г хлорида натрия. Приготовленную смесь кипятят 15–20 мин, устанавливают рН 7,4–7,6, процеживают через бумажный фильтр, кипятят фильтрат 10 мин, охлаждают до температуры +60_С, после чего прибавляют 30 мл дрожжевого диализата, 15 мл желчи, 10 мл раствора хинозола и 10 мл 1,6%_ного спиртового раствора бромкрезола пурпурного. Среду разливают в стерильные пробирки по 7–8 мл.

Среда Кесслера.К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании в течение 20–30 мин, фильтруют через вату, добавляют 2,5 г лактозы, доводят объем дистиллированной воды до 1000 мл, устанавливают рН 7,4–7,6, добавляют 2 мл 1%_ного водного раствора генцианвиолета, разливают в пробирки с поплавками по 8–10 мл и стерилизуют при температуре +121_С в течение 10 мин. Готовая среда имеет темно-фиолетовый цвет.

Индикация сальмонелл.Навесок колбасы массой 25 г от объединенной пробы, тщательно измельченный ножницами, вносят во флакон, содержащий 100 мл среды обогащения (Мюллера, Кауфмана, хлористо-магниевой) или 225 мл селенитового бульона. Флакон встряхивают и помещают в термостат при температуре +37_С, через 24 ч петлей или пастеровской пипеткой проводят высев из среды обогащения в чашки Петри со средой Эндо, Плоскирева, Левина или ВСА. Посевы помещают в термостат при температуре +37_С на 16–24 ч. На среде Эндо, Плоскирева и Левина бактерии из рода сальмонелл образуют бесцветные колонии. На ВСА сальмонеллы образуют черные или коричневые колонии с металлическим блеском, при этом участок среды под агаром чернеет. Не менее 5 изолированных колоний, характерных для сальмонелл, пересевают на трехсахарный агар Крумвиде–Олькеницкого в модификации Ковальчука штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик и инкубируют при температуре +37_С в течение 12–16 ч.

При росте сальмонелл на трехсахарном агаре цвет скошенной поверхности среды розовый, столбик — желто-бурый. Газообразование устанавливают по наличию трещин и разрыву столбика агара, при образовании сероводорода питательная среда чернеет.

Другие грамотрицательные бактерии семейства энтеробактерий дают следующие изменения цвета трехсахарного агара:

-БГКП окрашивает среду в синий или сине-зеленый цвет с образованием газа или без него;

-палочка протея окрашивает среды в ярко-красный цвет (вследствие расщепления мочевины), в случае выделения Н2S может появиться черный осадок с возможным разрывом агара.

Для дальнейшей идентификации бактерий готовят мазки, которые окрашивают по Граму, микроскопируют, а также изучают антигенные свойства путем постановки РА на предметном стекле с поливалентной (или комплексной) сальмонеллезной агглютинирующей сывороткой. Далее проводят идентификацию с помощью монорецепторных О- и Н-агглютинирующих сальмонеллезных сывороток.

Обнаружение подвижных (кроме S. gallinarum и S. pullorum) грамотрицательных палочек, дающих характерный рост на элективных средах, не ферментирующих лактозу и сахарозу, сбраживающих глюкозу и маннит до кислоты и газа (S. typhisuis маннит не ферментирует), образующих Н2S и не образующих индол, дающих положительную реакцию агглютинации с комплексными, монорецепторными О- и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками, указывает на выделение бактерий из рода сальмонелл.

Индикация протеяв Н_форме проводится внесением исследуемого продукта в конденсат свежескошенного МПА (метод Щукевича). Посевы помещают в термостат на 18–24 ч при температуре +37_С. При наличии в исследуемом продукте протея подвижная палочка поднимается вверх по скошенной поверхности агара, образуя вуалеобразный голубоватый налет. Культура издает характерный гнилостный запах.

Элективные среды на кишечную группу

Обнаружение полиморфных грамотрицательных палочек, подвижных, сбраживающих глюкозу и мочевину, не ферментирующих лактозу и маннит, указывает на наличие в продукте бактерий из рода протея.

Индикация стафилококкав исследуемом продукте основана на изучении морфологии, культуральных свойств и способности некоторых стафилококков ферментировать лецитиназу и коагулировать цитратную плазму крови кролика под воздействием фермента коагулазы.

Вначале исследуемый продукт разводят 1 : 10, вносят в МПБ, содержащий 6,5% натрия хлорида. Через сутки после инкубирования в термостате проводят пересев на молочно-солевой агар для изучения наличия пигмента и на желточно-солевой агар для выявления лецитиназной активности.

Посевы выдерживают 24 ч в термостате и сутки при комнатной температуре, затем учитывают результат: на поверхности питательной среды стафилококки образуют слегка выпуклые круглые колонии с ровными краями, т. е. S-формы; на желточно-солевом агаре вокруг колоний стафилококков появляется «радужный венчик», что является одним из признаков их патогенности (лецитовителазная активность).

Не менее чем из 5 типичных колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии стафилококков обнаруживают грамположительные кокки, располагающиеся в виде беспорядочных кучек и гроздьев винограда. Для подтверждения патогенности выделенных стафилококков ставят реакцию плазмокоагуляции по следующей методике: в пробирку с 0,5 мл цитратной плазмы крови кролика, разведенной физраствором (1 : 5), вносят петлю чистой суточной культуры стафилококка и помещают в термостат при температуре +37_С. Реакцию плазмокоагуляции предварительно учитывают через 3–4 ч (осторожно наклоняя, не встряхивая пробирку). В сомнительных случаях пробирки оставляют в термостате для окончательного учета через 24 ч. Реакцию считают положительной, если плазма коагулирует в сгусток (реакцию подвижная палочка поднимается вверх по скошенной поверхности агара, образуя вуалеобразный голубоватый налет. Культура издает характерный гнилостный запах.

Для подтверждения патогенности выделенных стафилококков ставят реакцию плазмокоагуляции по следующей методике: в пробирку с 0,5 мл цитратной плазмы крови кролика, разведенной физраствором (1 : 5), вносят петлю чистой суточной культуры стафилококка и помещают в термостат при температуре +37_С. Реакцию плазмокоагуляции предварительно учитывают через 3–4 ч (осторожно наклоняя, не встряхивая пробирку). В сомнительных случаях пробирки оставляют в термостате для окончательного учета через 24 ч. Реакцию считают положительной, если плазма коагулирует в сгусток (реакцию оценивают по степени плотности сгустка от одного до четырех плюсов).

Индикация сульфитредуцирующих клостридий (СРК)в колбасе основана на учете специфического роста клостридий в железосульфитсодержащих средах. При взаимодействии натрия сульфита с хлоридом железа образуется сульфат железа, который вызывает почернение питательной среды.

Для выявления СРК 1 мл исследуемой взвеси стерильной пипеткой вносят в пробирку с 9 мл жидкой сульфит-циклосериновой среды или среды Вильсон–Блера. Затем проводят последовательные пересевы на аналогичные объемы среды и получают возрастающие 10_кратные разведения суспензии. Посевы выдерживают 18–20 ч при температуре +37_С, при наличии СРК среда чернеет.

Для подтверждения принадлежности выделенных культур к клостридиям проводят пересев на поверхность агаризованной плотной среды Вильсон–Блера и инкубируют в анаэробных условиях при температуре +37_С в течение 24–48 ч. Отбирают типичные колонии и изучают микроорганизмы по морфологическим и некоторым культурально-ферментативным свойствам, в частности, по отрицательной реакции на каталазу.

Если в посевах (в 4 колониях из 5) обнаружены СРК, спорообразующие палочки, грамположительные, каталаза-отрицательные, способные расти в анаэробных условиях, то делают заключение о наличии в продукте СРК по максимальному разведению суспензии, в посеве которого наблюдается почернение среды. Например, если характерные изменения наблюдаются в пробирках с разведением 10–1, то считают, что в 1 г исследуемого продукта содержится 10 клеток, при аналогичных изменениях в пробирках с разведением 10–2 — 100 клеток.

При получении неудовлетворительных результатов микробиологического анализа готовой продукции по требованию контролирующих организаций проводят исследование вспомогательных материалов при постоянном входном контроле.

Источник

Элективные среды на кишечную группу

Мы поможем в написании ваших работ!

ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Сахарный бульон и сахарный агар готовят путем прибавления к обычному бульону или расплавленному простому агару того или иного углевода в количестве от 0,5 до 1%. Углевод растворяют в небольшом количестве воды, а затем прибавляют к питательной среде. Стерилизацию сахарного бульона и агара производят в аппарате Коха 3 дня подряд по 1 часу.
Агар с кровью, сывороткой или с асцитической жидкостью готовят при соблюдении строгой асептики. К готовому слабо-щелочному расплавленному и вновь охлажденному до 45° агару, разлитому в пробирки или флаконы, прибавляют 20—25% стерильной сыворотки или асцитической жидкости или 5—25% стерильной дефибринированной крови. После тщательного перемешивания (избегать образования пузырей и пены) агар в пробирках скашивают, а содержимое флаконов разливают по чашкам Гейденрейха. Бульон с сывороткой, асцитической жидкостью или кровью готовят таким же способом, как агар, но без нагревания. Для контроля стерильности бульон ставят в термостат на 48 часов при 37°.

Дифференциально-диагностические питательные среды. Состав и назначение.

Среда Эндо. Готовится непосредственно перед употреблением. К 100 мл мясо-пептонного агара или агара на бульоне Хоттингера (pH 7,6) стерильно добавляют 1 г химически чистой лактозы, растворенной в 5 мл стерильной воды, охлаждают до 70° и добавляют смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина и 1,25 мл свежеприготовленного 10% раствора сернистокислого натрия, взбалтывают и разливают по чашкам. Для подсушивания открытые чашки помещают на 30 минут в термостат при 37°.

На среде Эндо кишечная палочка дает колонии красного цвета с металлическим оттенком, а бактерии тифозно-паратифозной и дизентерийной группы — бесцветные колонии.

Пестрый ряд углеводов (среда Гисса). К 100 мл воды прибавляют 1 г пептона, 0,5 г поваренной соли. Пептон и соль растворяют в горячей воде в течение нескольких минут и фильтруют через бумажный фильтр (раствор должен быть совершенно прозрачным). Устанавливают pH 7,0. В указанной среде растворяют 1% одного из применяемых углеводов, на дно пробирок опускают поплавки для улавливания газа (свидетельствующего о глубоком расщеплении сахаров) и прибавляют индикатор. В качестве индикатора употребляют:

а) лакмусовую настойку — 5 мл на 100 мл среды. В кислой среде лакмусовая настойка показывает покраснение, в щелочной — посинение;

б) азолитмин, который представляет собой очищенный препарат лакмуса, его калийную соль (на 1 л среды добавляют 0,25 г азолитмина);

в) бромтимол блау — на 1 л среды 1 мл 1,6% спиртового раствора индикатора (среда приобретает зеленый цвет, синеет при образовании щелочи, желтеет при образовании кислоты);

г) индикатор Андреде, который состоит из 1 г кислого фуксина, 400 мл дистиллированной воды и 64 мл нормального раствора едкого натра. К питательной среде добавляют 1% индикатора. Среда в пробирке должна приобрести соломенно-желтый цвет без розового оттенка. В кислой среде цвет среды меняется на красный.

Индикатор добавляют для того, чтобы определить изменения реакции питательной среды, происходящей под влиянием ферментации углеводов, т. е. для выявления биохимической активности микробов. Последнее имеет большое значение для микробиологической диагностики ряда инфекционных заболеваний (брюшной тиф, дизентерия, холера и др.). Среды с углеводами и индикатором разливают в стерильные пробирки и стерилизуют дробно при 100° в течение 3 дней.

Короткий пёстрый ряд. Изменение при росте E. coli, S. typhi.

Методы выделения чистых культур аэробов.

Метод Дригальского

Выделение чистой культуры анаэробов.

См. пракнавыки

Вирусологические методы. Назначение, принцип.

Вирусологический метод

Основные этапы:

1. Забор исследуемого материала.

2.Выбор по принципу цитотропизма и получение чувствительной тест-системы, определение ее жизнеспособности.

3. Заражение выбранной системы.

4.Индикация вируса на основании обнаружения его нуклеиновой кислоты, антигенов, гемагглютинина, ЦПД, включений.

5. Идентификация и титрование вируса проводится на основании:

а) определения антигенов вируса с помощью иммунологических реакций (РИФ, ИФА, РПГА, РСК, РН, ВИЭФ и др.); б) патогистологического исследования органов и тканей; в) ЦПД; г) клинических симптомов, биологических проб (кератоконьюнктивальная и др.).

Методы индикации вирусов

При заражении вирусами клеточных культур можно получать различные видимые проявления действия вируса:

1. Цитопатическое действие вируса на культуру клеток (ЦПД) – возникновение в ней видимых морфологических дегенеративных изменений;

2. Приобретение заражённой культурой клеток способностик гемадсорбции – к адсорбции эритроцитов на поверхности клеточного слоя;

3. Образование в заражённой клеточной культуре под плотным слоем специального агарового покрытия характерных бляшек, являющихся «негативными колониями» вирусов;

4. Внутриклеточные включения

5. РГА

Источник

18 Октября, 2019
Анализы и диагностика
Вера Васильева

Одни из важнейших методов при проведении медицинского обследования — это лабораторные исследования. Зачастую эти данные играют решающую роль при постановке диагноза. Кал — это выделяемое при дефекации из дистального окончания кишечника. В норме кал состоит приблизительно на 80% из воды, а 20% — это остатки жизнедеятельности, непереваренных частей пищи и микроорганизмов.

Микробиом кишечника

Известно, что в кишечнике человека содержится около 500 видов различных микробов. Их разделяют на три группы:

Полезные. К ним относятся бактероиды, бифидобактерии, лактобактерии и другие.
Условно-патогенные. При хорошем иммунитете и отсутствии патологий ЖКТ их наличие никак не проявляется. Однако, при ухудшении здоровья и различных негативных факторах, они могут причинить значительный урон организму. Это – клостридии, стафилококки, энтерококки, грибки Кандида, кишечная палочка и другие.
Патогенные. Это возбудители множества инфекционных заболеваний, которые в норме у человека должны отсутствовать. К ним относятся: амеба дизентерийная, сальмонелла, трихомонада кишечника, холерный вибрион, балантидий и другие.

Что входит в анализ кала на кишечную группу и какие микроорганизмы выявляются наиболее часто?

Среди наиболее выявляемых бактерий можно выделить следующие:

Бактерии дизентерийной группы, вызывающие шигеллез (дизентерию) – протекающее в острой форме инфекционное заболевание, имеющее фекально-оральный способ заражения. Поражает толстую кишку, проявляется такими симптомами, как диарея, боли в животе, повышение температуры, кровь и гной в кале.
Не менее опасными являются бактерии тифо-паратифозной группы. К ним относят возбудитель брюшного тифа — Salmonella typhi и возбудитель паратифов — Salmonella paratyphi A, B, C, а также возбудители других сальмонеллезов. Возбудитель передаются фекально-орально, поражает по большей части желудочно-кишечный тракт. Наблюдаемые симптомы: рвота, тошнота, спазмы, нарушение стула, повышение температуры. При брюшном тифе может наблюдаться поражение ЦНС в виде заторможенности и нарушения сознания.

Патогенные кишечные палочки являются причиной эшерихиозов – острых инфекционный кишечных заболеваний, которым в основном подвержены дети. Среди патогенных кишечных палочек выделяют приводящих к холероподобной диарее, вызывающие диарею главным образом у детей, приводящие к дизентериеподобной диарее и наличию крови в кале.

Определить наличие болезнетворных микроорганизмов и их чувствительность к антибактериальной терапии можно с помощью такого метода микробиологии, как культивирование на питательных средах.

Показания к сдаче анализа

Основной причиной для сдачи посева кала на кишечную группу является подозрение на присутствие в кишечнике патогенных или условно-патогенных микроорганизмов в активной форме. Кроме этого, анализ назначают во время плановых проверок и при поиске скрытых бессимптомных инфекций при прохождении различных медкомиссий, в том числе, для получения санитарной книжки лицами с большим риском быть распространителями кишечных заболеваний (к примеру, сотрудники сферы общественного питания). При выявление патологических процессов большую роль играет анализ кала на кишечную группу. В случае обнаружения вредоносных микроорганизмов определяется их чувствительность к антибиотикам, а врачам анализ дает возможность осуществить эффективное лечение. Анализ на кишечную группу, что это такое? Данный анализ — важнейшая часть лабораторного исследования фекалий. Анализ кала способствует выявлению разнообразных патологических процессы, протекающих в организме. Анализ кала на кишечную группу дает возможность отслеживать эффективность проводимого лечения. Кроме того, анализ кала играет решающее значение при обследовании на наличие паразитов (гельминты, лямблии и другие).

Как сдавать кал на кишечную группу?

Перед осуществлением забора биоматериала для анализа необходимо провести соответствующую подготовку. Важные моменты при подготовке к сдаче анализа:

Питание. За 3-5 суток до анализа исключить пищу, содержащую рыбу и мясо в любом виде. Кроме того, перед тем как сдавать анализ кала на кишечную группу следует воздержаться от употребления алкоголя. Также из рациона питания стоит исключить мучные и хлебобулочные изделия, продукцию из молока, а также картофель и блюда на его основе. Также будет не лишним существенно ограничить употребление различных соусов, маринадов и блюд, содержащих бобовые культуры, грибы, зеленые овощи, помидоры, фрукты.
Медицинские препараты. За трое суток до проведения процедуры забора анализа на кишечную группу следует перестать принимать лекарства, способные оказывать существенное влияние на характеристики кала. К подобным средствам относятся антибактериальные препараты, медикаменты, влияющие на перистальтику (слабительные средства), а также препараты, содержащие железо и висмут. Кроме того, из средств местного применения следует исключить ректальные суппозитории (свечи).
Привычки. При проведении анализа фекалий на кишечную группу не обязательны ограничения относительно курения. Помимо этого, сам забор материала может быть осуществлен не натощак, следовательно, можно придерживаться обычного суточного рациона питания и питьевого режима с учетом перечисленных выше ограничений.

Забор кала на анализ на кишечную группу может проводиться как в больничном учреждении, так и в домашних условиях. При сдаче анализа в медицинском учреждении пациент приходит в отделение, где укладывается на кушетку и поворачивается на бок. Лаборант осуществляет стандартный мазок, применяя обычный стерильный тампон, вводимый в прямую кишку пациента на несколько сантиметров, в то же время прокручивая его с целью лучшего сбора биологического материала. Далее тампон должен быть извлечен и помещен в специальную пробирку с подготовленной средой. Затем биоматериал подвергается анализу в соответствии с существующими протоколами. Для того чтобы собрать фекалии на анализ кишечной группы в домашних условиях, необходимо приобрести в аптеке стерильный, герметично закрывающийся контейнер с крышкой. В случае, когда кал требуется собрать у маленького ребенка, использующего одноразовые подгузники, необходимые фекалии разрешается брать непосредственно с них сразу же после опорожнения кишечника (слой биоматериала, который не соприкасался с абсорбирующей поверхностью подгузников).

Правила сбора кала для анализа

Фекалии, требуемые для анализа, собираются утром во время первого акта опорожнения кишечника. Перед проведением процедуры необходимо тщательно вымыть унитаз, особенно его внутреннюю поверхность без применения средств дезинфекции, например, водой и специальным ершиком. После дефекации следует собрать каловую массу специальной мерной ложкой из стерилизованного контейнера для сбора экскрементов, которая зачастую идет в комплекте с контейнером, либо ее можно приобрести дополнительно в любой аптеке. В фекалии не должны попасть дополнительные примеси, такие как моча или кровь (во время менструации у женщин).

Собранный данным методом биологический материал следует незамедлительно отнести в лабораторию для проведения анализа кала на кишечную группу.

Сколько времени может храниться биоматериал?

Согласно рекомендации профильных специалистов, доставить собранные каловые массы следует не позже двух часов для проведения наиболее достоверного анализа на кишечную группу. При отсутствии возможности транспортировать собранный биологический материал в указанный срок, стерильный и герметично закрытый контейнер можно поместить в холодильник, с целью увеличения указанного временного интервала, но не более чем на четыре часа. Если же после сбора каловых масс прошло уже больше шести часов, то точность анализа на кишечную группу значительно снижается, возможен ложноположительный или ложноотрицательный результат, даже при соблюдении всех правил сбора и транспортировки биологического материала.

Методы исследования

Процедура анализа проводится в несколько этапов:

микроскопическая диагностика, позволяющая исследовать микроорганизмы под микроскопом;
бактериологический диагностика — посев исследуемого материала на питательные среды (через шесть дней оценивается вид и активность микробов, регистрируется их количество);
анализ восприимчивости кишечных микроорганизмов к антибиотикам.

Перечисленные выше методы относятся к диагностике in vitro, что значит «на стекле» или «в пробирке».

Специалисты бактериологической лаборатории могут определить патогенных микроорганизмов, опираясь на их внешний вид, активность, наблюдаемую с помощью микроскопа. Этот метод называется бактериоскопическим исследованием.

Сроки выполнения

Для получения результата исследований требуется около недели. Этот срок не связан с организационными моментами, он необходим для обеспечения возможности максимального роста и последующего выявления возбудителей.

Для ускорения диагностики в некоторых диагностических лабораториях при анализе на кишечную группу применяют экспресс-методы. Но они зачастую имеют меньшую достоверность.

Расшифровка анализа

При анализе кала на кишечную группу «негативный результат» означает отсутствие болезнетворных кишечных микроорганизмов и наличие условно-патогенных бактерий в пределах нормы. В таком случае в антибиотикограмме нет необходимости.

«Положительный результат» анализа говорит о:

присутствии патогенных бактерий (сальмонелл, шигелл, золотистого стафилококка, патогенных эшерихий, гемолизирующей кишечной палочки);
активном росте колоний условно-патогенной микрофлоры (клебсиелл, серраций, синегнойных палочек, протей, цитро-бактерий).

В данном случае выдаются также результаты антибиотикограммы. Острый инфекционный период характеризуется резким нарушением состава кишечной микрофлоры — вытеснением нормальных микроорганизмов патогенными. Дефицит и отсутствие роста нормальных облигатных микробов косвенно может свидетельствовать о наличии кишечной инфекции, в таком случае специалисты рекомендуют сделать повторный анализ.

Положительный анализ, то есть выявление возбудителей дизентерии, сальмонеллезов или эшерихиозов при наличии клинической картины означает протекание данных заболеваний в острой форме. Отсутствие клинически значимых признаков свидетельствует о бессимптомном бактерионосительстве, в том числе, хроническом – в случае регулярных положительных результатах анализа. При получении сомнительного результата рекомендуется проведение повторного обследования. При отрицательных результатах анализа вероятность заболевания низка.

Что может влиять на результат?

Ложноотрицательные результаты может вызвать проводимая незадолго до анализа терапия антибиотиками либо химиотерапия.

Кто назначает обследования?

На анализ направляют врачи инфекционисты, терапевты, специалисты общей практики, педиатры и гастроэнтерологи.

Источник