Кишечная палочка о 157

Кишечная палочка о 157 thumbnail

Escherіchіa colі O157:H7 (STEC O157) — энтерогеморрагический штамм бактерии Escherichia coli; частая причина пищевых отравлений[1].

По оценкам, каждый год происходит около 73 тыс. случаев заражений этой инфекцией и 61 смерти только в США, хотя такие отравления более часты в менее развитых странах. Инфекция часто приводит к кровавой диарее и иногда к почечной недостаточности. Большинство случаев болезни связаны с недожаренной или неправильно приготовленной пищей, особенно загрязненной говядины. Болезнь передается также от человека к человеку при контакте, особенно при использовании той же посуды, при потреблении непастеризованного молока или зараженной воды. Вспышка болезни в 2006 году в США была связана с заражением большого количества шпината этим штаммом. Энтерогеморрагический штамм Escherichia coli 0157:H7 в 1993 году вызвал гибель нескольких детей в США.

Клиника[править | править код]

Пища, вызывающая заражение штаммом: недостаточно термически обработанное мясо, непастеризованное молоко и соки, сырые фрукты и овощи (напр., спаржа), салями, приправы к салату, загрязнённая вода.

Инкубационный период длится 1—8 дней.

Инфекция проявляется в виде геморрагического поноса (возможен и обычный), приступобразными острыми резями в животе, при повышенной или нормальной температуре. В некоторых случаях болезнь может протекать без симптомов. Длительность болезни 5—10 дней.

Лабораторные исследования[править | править код]

Диагностика E. coli O157:H7 при посеве кала требует проведения специального анализа. Основная сложность заключается в том, чтобы выделить именно этот штамм на фоне огромного количества E. coli безвредных серотипов, в норме присутствующих в фекалиях. Для дифференциальной диагностики была использована неспособность E. coli O157:H7 ферментировать сорбитол, и была разработана специальная среда для роста (CT-SMAC), на которой колонии обычных серотипов E. coli имеют ярко выраженный красный цвет, в то время как колонии O157 — прозрачные. Положительные изоляты нужно направить в лаборатории санэпиднадзора РФ для подтверждения и типирования методами ПЦР.

Лечение[править | править код]

Поддерживающие меры, тщательно наблюдайте за почечной функцией, гемоглобином и тромбоцитами. Исследования указывают, что антибиотики могут быть вредными. Инфекция E. coli O157:H7 также ассоциируется с гемолитикоуремическим синдромом, который может причинить пожизненные осложнения.

Всего с 2000 года по 2006 год в США было зарегистрировано 3464 случая инфекции, вызванной STEC O157; у 218 человек (6,3 %) развился гемолитико-уремический синдром (ГУС). Наиболее часто развитие гемолитико-уремического синдрома отмечалось на фоне STEC O157-инфекции у детей до 5 лет (15,3 %).

Уровень летальности составил 0,6 % у всех пациентов с инфекцией, вызванной STEC O157, и 4,6 % у пациентов, у которых развился ГУС. Независимо от того, развился гемолитико-уремический синдром у пациента или нет, наибольший уровень летальности от инфекции, вызванной штаммами Escherichia coli O157:H7, был зарегистрирован у пациентов в возрасте 60 лет и старше.

Так, 12 пациентов (3,1 %) из 390 человек в возрасте 60 лет и старше погибли от инфекции, вызванной STEC O157, включая 5 пациентов (33,3 %) из 15 человек с ГУС и 7 пациентов (1,9 %) без ГУС. В группе детей в возрасте до 5 лет случаи летального исхода были зарегистрированы у 4 пациентов (3,0 %) среди больных, у которых развился ГУС, и у 2 пациентов (0,3 %) без ГУС. Как оказалось, повышенный риск развития ГУС после инфекции, вызванной штаммами E. coli O157:H7, отмечался у детей младшего возраста и у женщин.

Таким образом, проведённое эпидемиологическое исследование подтверждает рекомендации по ранней и максимально активной тактике ведения детей младшего возраста и пожилых пациентов при возникновении у них инфекции, вызванной штаммами Escherichia coli O157:H7.

См. также[править | править код]

  • Escherichia coli O104:H4

Примечания[править | править код]

  1. Karch H, Tarr P, Bіelaszewska M. Enterohaemorrhagіc Escherіchіa colі іn human medіcіne. // Іnt J Med Mіcrobіol. — Vol. 295. — Вып. 6-7. — P. 405-18.

Ссылки[править | править код]

  • briandeer.com/e-coli-o157.htm — Репортаж Sunday Tіmes of London о вспышке пищевых отравлений в Британии 17 мая 1998 года.

Литература[править | править код]

Р. П. Корнелаева, ПП. Степаненко, Е. В. Павлова Санитарная микробиология сырья и продуктов животного происхождения. 2006, с.15-18

Источник


МУК 4.2.992-00

Дата введения 2001-02-04

1. РАЗРАБОТАНЫ
Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России
(Л.Г.Подунова, Н.С.Кривопалова, Р.С.Сорокина), Центром
госсанэпиднадзора в Тульской области (Л.И.Шишкина, Т.А.Попова,
А.Я.Сыпченко, Н.М.Корнеева), Государственным научным центром
прикладной микробиологии (М.В.Храмов).

2. УТВЕРЖДЕНЫ Главным
государственным санитарным врачом Российской Федерации – Первым
заместителем министра здравоохранения Российской Федерации
Г.Г.Онищенко 4 ноября 2000 г.

Читайте также:  Кишечная палочка фото картинки

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1.
Область применения

1. Настоящие методические
указания предназначены для бактериологических лабораторий центров
государственного санитарно-эпидемиологического надзора, других
учреждений системы здравоохранения Российской Федерации,
осуществляющих бактериологическую диагностику острых кишечных
инфекций с гемоколитом и развитием гемолитико-уремического
синдрома, а также обследование контактных в очагах заболевания и
контроль за качеством продовольственного сырья и пищевых
продуктов.

2. Методические указания
определяют методы обнаружения, выделения и идентификации
энтерогеморрагической кишечной палочки Е. coli О157:Н7 и
разработаны в связи с отсутствием в настоящее время нормативных
документов по данному разделу бактериологических исследований.

3. Методические указания
являются обязательными при контроле продуктов детского питания,
молочных и мясных продуктов в ходе проведения противоэпидемических
мероприятий при возникновении вспышек, а также осуществления
санитарно-эпидемиологического надзора.

4. Настоящие методические
указания созданы с целью унификации и дальнейшего совершенствования
бактериологических методов выделения и идентификации
энтерогеморрагической кишечной палочки Е. coli О157:Н7 в связи с
регистрацией данной патологии на территории Российской Федерации, а
также роста заболеваемости вспышечного характера и спорадической за
рубежом.

2.
Сущность метода


Методические указания
содержат описание микробиологического исследования с целью
выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки Е.
coli О157:Н7 из биоматериала от больных неосложненными диареями,
острыми кишечными инфекциями с гемоколитом и развитием
гемолитико-уремического синдрома, от контактных в очаге, а также
пищевых продуктов, сырья.

Предлагаемый
дифференциально-диагностический метод основан на использовании
некоторых особенностей биохимических свойств данного
микроорганизма: отсутствии фермента -D-глюкуронидазы и способности
ферментировать сорбитол, а также на наличии у Е. coli О157:Н7
такого “маркера”, как продукция веротоксинов (VT1, VT2).

Для осуществления
возможности практического использования данной методики в течение
короткого периода времени разработана отечественная питательная
среда “Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар” (ФС 42-0027-00) для выделения
Е. coli О157:Н7 из клинического материала, объектов окружающей
среды (разработчик – Государственный научный центр прикладной
микробиологии, отделение “Питательные среды”, г.Оболенск
Серпуховского района Московской области), а также созданы
диагностические сыворотки для реакции агглютинации и методика
определения веротоксинов в клиническом материале.

Огромный интерес,
проявляемый к острым кишечным инфекциям с гемолитико-уремическим
синдромом (ГУС) со стороны научных центров и практического
здравоохранения за рубежом и в нашей стране, закономерен.

Количество регистрируемых
заболеваний острыми кишечными инфекциями с гемолитико-уремическим
синдромом, как вспышечного характера, так и спорадических, ежегодно
возрастает (США, Канада, Финляндия, Япония, Европа).

Этиологическим фактором
этих заболеваний являются энтерогеморрагические кишечные палочки,
продуцирующие веротоксины (шигаподобные токсины). Они представлены
довольно большим разнообразием серологических вариантов, из которых
Е. coil О157:Н7 имеет наибольшее эпидемиологическое значение в
качестве причин неосложненных диарей и кровавого поноса с
последующим развитием ГУС.

К
настоящему времени биология эшерихии Е. соli О157:Н7,
эпидемиология, патогенез и диагностика связанных с ней заболеваний
достаточно изучены.

Первые сведения о
выделении Е. coli О157:Н7 и регистрация данной патологии в нашей
стране имели место в Тульской области, где диагностика острых
кишечных инфекций с гемолитико-уремическим синдромом начата с конца
1996 года.

Результаты выделения Е.
coli О157:Н7 из клинического материала от детей, больных ОКИ,
сырья, пищевых продуктов (сырого мяса, молока) получены в 1997-99
гг.: установление этиологического фактора (Е. coli О157:Н7) случаев
острых кишечных инфекций, осложненных гемолитико-уремическим
синдромом, составило в Тульской области 43%, высеваемость Е. coli
О157:Н7 из пищевых продуктов и сырья 1,96%; высеваемость культур от
животноводов и доярок ферм – 9%.

Наибольшему риску
подвержены дети до 5 лет и пожилые люди.

Естественным резервуаром
бактерий Е. coli О157:Н7, патогенных для человека, служит крупный
рогатый скот, овцы. Наиболее частый путь распространения этой
инфекции – пищевой. Основным фактором передачи является сырая
говядина, особенно мясной фарш, мясные полуфабрикаты, прошедшие
недостаточную термическую обработку, сырое молоко. Отмечены случаи
передачи возбудителя через воду.

3.
Нормативные ссылки

3.1. “Основы
законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан”
от 22.07.93 г.N 5487-1.

3.2. Федеральный
закон “О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения” от 30
марта 1999 г. N 52-ФЗ.

3.3. СанПиН
2.3.2.560-96 “Гигиенические требования к качеству и безопасности
продовольственного сырья и пищевых продуктов”*.
___________________
*
Действуют СанПиН
2.3.2.1078-01. – Примечание “КОДЕКС”.

3.4. ГОСТ
26668-85 “Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для
микробиологических исследований”.

3.5. ГОСТ
26669-85 “Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для
микробиологических анализов”.

Читайте также:  Кишечная палочка в уретре мочевом

3.6. ГОСТ
26670-91 “Продукты пищевые. Методы культивирования
микроорганизмов”.

3.7. ГОСТ
10444.1-84 “Консервы. Приготовление растворов, красок, индикаторов,
питательных сред, применяемых в микробиологическом
анализе”.

3.8. ГОСТ Р 50474-93 “Продукты пищевые. Методы
выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек
(колиформных бактерий)”.

3.9. ГОСТ Р 50480-93 “Продукты пищевые. Методы
выявления бактерий рода Salmonella”.

3.10. ГОСТ
9225-84 “Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического
анализа”.

3.11. ГОСТ
9792-73 “Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины,
говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила
приемки и методы отбора проб”.

3.12. ГОСТ
9958-81 “Изделия колбасные и продукты из мяса. Методы
бактериологического анализа”.

3.13. ГОСТ
21237-75 “Мясо. Методы микробиологического анализа”.

3.14. ГОСТ
4288-76 “Изделия кулинарные и полуфабрикаты из рубленого мяса.
Правила приемки и методы испытания”.

3.15. ГОСТ Р 50396.0-92 “Мясо птицы, субпродукты и
полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к
микробиологическим исследованиям”.

3.16. ГОСТ
7702.2.2-93 “Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы
выявления и определения количества бактерий группы кишечных
палочек”.

3.17. ГОСТ
7702.2.3-93 “Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы
выявления сальмонелл”.

3.18. МУ
04-723/3 от 17.12.84 г. Методические указания по
микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых
энтеробактериями.

3.19. Инструкция к
применению “Набора реагентов для выявления веротоксина у эшерихий”
(фирма “Seiken”, Япония).

4.
Методы забора, доставки проб клинического материала от больных и
контактных


Важным условием выделения
эшерихий Е. coli О157:Н7 из клинического материала является отбор и
доставка его в лабораторию в возможно ранние сроки: оптимальными
сроками являются 1-3 день от момента заболевания.

У
больных интенсивность выделения возбудителя снижается, достигая 50%
и более низкого уровня через 5-8 дней от начала заболевания.
Гемолитико-уремический синдром обычно развивается спустя, как
минимум, одну неделю после первых признаков диареи, и вероятность
обнаружения возбудителя к этому времени существенно
уменьшается.

Материалом для
бактериологического исследования служат в первую очередь
испражнения, моча.

Испражнения собирают в
консервант, в качестве которого можно использовать
фосфатно-буферную или глицериновую смеси. В случае доставки
материала в течение 2 часов с момента забора нативные испражнения
отбирают в стерильные флаконы.

При обследовании
контактных лиц с целью выявления бактерионосителей возможно взятие
материала ректальными тампонами, проволочными петлями.

Мочу после туалета
наружных половых органов собирают в стерильную посуду. Перед
посевом мочу центрифугируют и засевают осадок. В случае небольшого
количества осадка засевают нативную мочу в среду обогащения двойной
концентрации в равных объемах (приложение 1).

5.
Методы подготовки пищевых продуктов для бактериологического
исследования и схемы посева на питательные среды


Методы отбора проб,
хранение и подготовка их к анализу регламентированы в действующих
нормативных документах на конкретный вид продукта (раздел 3
“Нормативные ссылки”).

Проведение испытаний
различных пищевых продуктов устанавливает единый метод выявления в
определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий в
соответствии с ГОСТ Р 50474-93
“Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества
бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)”. По
классификации кишечных палочек Е. coli 0157:Н7 относится к
энтерогеморрагическим, энтеропатогенным кишечным палочкам, поэтому
выявление ее как патогена необходимо проводить в 25 г продукта.
Возможно выявление Е. coli О157:Н7 в других объемах,
регламентированных нормативной документацией на конкретный вид
продукта, а также СанПиН
2.3.2.560-96 “Гигиенические требования к качеству и
безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов”
(приложения 2, 3).

6.
Проведение анализа


Принципы
бактериологического исследования с целью выделения Е. coli О157:Н7
не отличаются от общепринятых для возбудителей острых кишечных
инфекций и включают методы классического бактериологического
исследования, основанные на выделении чистой культуры
микроорганизма и последующей его идентификации по
культурально-морфологическим, биохимическим, антигенным свойствам.
Основным критерием отнесения штамма к группе энтерогеморрагических
эшерихий являются данные, подтверждающие продукцию веротоксинов.
Штаммы, не продуцирующие токсинов, не могут считаться возбудителями
эшерихиозов у людей.

6.1. Посев клинического
материала с целью выделения Е. coli О157:Н7 проводится на
питательную среду Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар (прямой посев) и в
соотношении 1:5 в среды накопления, которыми могут служить бульон
лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью (ГОСТ Р 50474-93), GN Enrichment Broth
асс. to HAJNA (Cat. N 10756, фирма “MERCK”, Германия). При
отсутствии нативного материала испражнения, забранные в консервант,
засевают в среду обогащения двойной концентрации (приложение
1).

Читайте также:  Кишечная палочка когда проявляется

6.2. Посев пищевых
продуктов для выявления БГКП (колиформных бактерий) в определенной
навеске продукта проводится в соответствии с ГОСТ Р 50474-93. Дополнительной
питательной средой для выявления Е. coli О157:Н7 является Сорбитол
E. coli О157:Н7 агар (приложение 2), потому что плотная питательная
среда, используемая для выделения колиформных бактерий (Эндо), не
может быть использована для целенаправленного поиска E. coli
О151:Н7, т.к. данный микроорганизм разлагает лактозу подобно другим
эшерихиям.

6.3. Подготовку пищевых
продуктов для выявления E. coli О157:Н7 с применением сред
обогащения осуществляют в соответствии с ГОСТ Р 50480-93 “Продукты пищевые.
Методы выявления бактерий рода Salmonella”, но в качестве сред
обогащения могут быть использованы среда Кесслера, трипказо-соевый
бульон, бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью,
Грам-негативный бульон (GN-бульон). После термостатирования посевов
при 37 °С в течение 18-24 ч проводят высев на плотную среду
Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар, обладающую дифференциальными и
селективными свойствами (приложение 3).

Отличительным
биохимическим свойством Е. coli О157:Н7 является отсутствие
способности ферментировать сорбитол. Для выделения штаммов Е. coli
О157:Н7 необходимо использовать Сорбитол Е. coli О157:Н7 агар или
среды зарубежного производства: Fluorocult Е. coli О157:Н7 Agar (Cat. N 1.04036);
Sorbitol MacConkey Agar (SMAC-agar) Cat. N 1.09207;
Fluorocult HC Agar acс. to SZABO Cat. N 1.09206 (фирма
“MERCK”, Германия).

Характеристика роста Е.
coli О157:Н7 на плотных питательных средах представлена в
табл.1.

Таблица
1

Характеристика роста Е. coli О157:Н7 на плотных
питательных средах

Питательная
среда

Характер
колоний

Среда ЭНДО

Колонии
средней величины, выпуклые, круглые, влажные, темно-красные,
Lac

Сорбитол Е. coli О157:Н7
агар

Колония
средней величины, выпуклые, круглые, влажные, бесцветные,
прозрачные. Могут быть бледно-розовые со светлым ореолом,
мутноватые

Fluorocult Е. coli О157:Н7
Agar

Прозрачные или
полупрозрачные колонии, бесцветные, размером 1,5-2 мм

Простой питательный
агар

Колонии
средней величины, выпуклые, круглые, влажные, блестящие, прозрачные
в проходящем свете

Агар Плоскирева,
Висмут-сульфит агар, ЖСА, среда Сабуро

Роста нет.
Иногда на среде Плоскирева – мелкие выпуклые колонии красноватого
цвета, Lac

Кровяной агар

Колонии
средней величины, выпуклые, круглые, влажные, бледноватые, иногда
сероватые. Гемолиз отсутствует

Если на чашке с Сорбитол
Е. coli О157:Н7 агаром выросли 1-2 сорбитол-отрицательных колонии,
то серологические исследования проводят после посева на одну из
сред для первичной дифференциации: агар Клиглера, Олькеницкого,
Ресселя. В случае роста на чашке Петри однотипной культуры с 3-5
колониями проводят серологическую идентификацию на стекле с “О”- и
“Н”-сыворотками к антигенам Е. coli О157:Н7, либо с латексным
антительным диагностикумом.

Не менее 5
сорбитол-отрицательных колоний пересевают на среду для первичной
идентификации. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С 18-24 часа.
При получении на следующий день результатов, подтверждающих
принадлежность культуры к роду эшерихий (ферментация глюкозы и
лактозы с образованием кислоты и газа, отсутствие HS), проводят дальнейшую биохимическую и
серологическую идентификацию (приложения 2, 3).

7.
Биохимические свойства и серологическая идентификация Е. соli
O157:Н7


Серологическая
идентификация предусматривает выявление “О”- и “Н”-антигенов у
эшерихий Е. coli О157:Н7.

Определение “О”- и
“Н”-антигенов проводится в обычной реакции агглютинации на стекле с
эшерихиозными сыворотками к Е. соli O157:Н7, выпускаемыми АООТ
“Биомед” имени И.И.Мечникова (Московская область, Красногорский
район, с.Петрово-Дальнее) или латексным антительным диагностикумом
производства ГНЦ ПМ (Московская область, Серпуховской район,
г.Оболенск). Реакция агглютинации осуществляется в соответствии с
наставлениями по применению данных сывороток.

Необходимо отметить, что
Е. coli О157:Н7 имеет антигенные связи с другими эшерихиями
(табл.2).

Таблица
2

Антигенные связи Е. соli О157:Н7 и других эшерихий

Е. coli

Наименование
сывороток

О157

Н7

О2-О17

О19-О49

О51-О54

О56-О115

О117-О164

О50

О116

+

О1; О18; О55

+

О157:Н7

+

+

Все штаммы, дающие
положительную реакцию агглютинации, подлежат обязательной
биохимической идентификации для подтверждения видовой
принадлежности. Биохимические свойства Е. coli О157:Н7 отражены в
табл.3.

Таблица
3

Основные биохимические свойства Е. coli О157:Н7

N

Тест или
субстрат

Наименование
штаммов

Е. соli
O157:Н7

Е. coli

1

Сорбитол

+

2

-D-глюкуронидаза

+

3

Цитрат Симмонса

4

Мочевина

5

Малонат натрия

6

Сероводород

7

Фенилаланиндезаминаза

Источник