Кишечная палочка окрашивание по граму

Кишечная палочка окрашивание по граму thumbnail
  • ИНВИТРО
  • Библиотека
  • Лабораторная диагностика
  • Микроскопическое (бактериоскопическое) исследование мазка (Bacterioscopic examination of different smears (vaginal, cervical, urethral, sputum, etc.)

Последнее изменение: январь 2021

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер.

Мазок на флору: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.

Показания к назначению исследования

Мазок на флору (бактериоскопия) – простой, недорогой, эффективный метод визуального анализа биологического материала под микроскопом, который позволяет получить представление о функциональном состоянии различных органов, оценить наличие или отсутствие воспалительного процесса и степень его выраженности. В лаборатории мазок окрашивают специальными реагентами. Различные микроорганизмы окрашиваются в разные цвета, что позволяет их идентифицировать. Такая процедура называется окрашиванием по Граму. Кроме изучения под микроскопом, собранный биологический материал может быть использован для бактериологического анализа-посева на микрофлору, что поможет максимально точно выявить возбудителей инфекций, их пропорциональное соотношение и даже чувствительность к тем или иным антибиотикам.

Бактерии делятся на грамположительные (Грам (+)) и грамотрицательные (Грам (-)). Хотя есть ряд бактерий, которые не имеют специфической окраски по Граму.

Спектр бактерий меняется в зависимости от локализации в организме (заселения тех или иных слизистых оболочек и органов). Это первичная диагностика, которая позволяет выявить заболевания на ранних стадиях, а также назначить лечение. Метод широко используется врачами разных специальностей при подозрении на инфекционный процесс и при наличии гнойно-воспалительных проявлений заболевания. Кроме того, мазок на флору применяют в рамках диспансерных обследований в гинекологической и акушерской практике.

Существует несколько видов лабораторного исследования мазка на флору.

Гинекологический мазок на микрофлору. Представляет собой общее исследование, которое позволяет проверить состояние слизистой влагалища. Дополнительно диагностируются патологии, которые нередко вызывают болезнетворные микроорганизмы, – кандидоз, вагиноз, цервицит. При выполнении такого бактериоскопического исследования можно диагностировать заболевания, которые передаются половым путем.

Мазок на микрофлору у мужчин (урологический мазок). Микроскопическое исследование позволяет определить состав микрофлоры мочеиспускательного канала (уретры) мужчины, выявить воспаление в уретре (уретрит), а также ряд специфических возбудителей, таких как трихомонады и гонококки.

Показания к анализу гинекологического или урологического мазка являются:

  • профилактический осмотр;
  • боль в процессе мочеиспускания;
  • дискомфорт или боли внизу живота;
  • патологические выделения;
  • зуд или раздражение половых органов.
  • подозрение на бесплодие;
  • любое заболевание, передающееся половым путем.

Врач может назначить этот анализ после длительных курсов антибиотиков для предупреждения нарушений бактериального баланса на слизистых оболочках половых органов.

Микроскопию обязательно проводят женщинам во время беременности, чтобы исключить воспалительные процессы и половые инфекции, что необходимо для нормального вынашивания и рождения здорового ребенка.

Мазок на микрофлору не назначается для выявления раковых заболеваний, он не информативен при диагностике таких инфекций, как хламидиоз, ВИЧ, герпес и некоторых заболеваний, передающихся половым путем.

Мазки другой локализации. Показаниями к исследованию являются инфекционно-воспалительные заболевания ЛОР-органов, легких, глаз (при подозрении на гонококковую инфекцию), кожи, мягких тканей и др. Мазок на микрофлору полости рта — это обязательный анализ при подозрении на дифтерию или коклюш.

Подготовка к процедуре

Проводить исследования и сбор материала следует до начала лечения антибиотиками, антисептиками, противогрибковыми препаратами, если врач не назначил иное.

Следует соблюдать ряд требований перед сдачей гинекологического или урологического мазка:

  • минимум за два дня до сдачи исключить половые контакты;
  • не принимать ванну за сутки до анализа, ограничиться душем, провести гигиеническую процедуру внешних половых органов без применения моющих средств.
  • в день сдачи анализа не выполняют гигиенические процедуры половых органов.
  • за 2-3 часа до взятия мазка не рекомендуется мочиться, так как можно смыть из уретры необходимый для исследования материал.
Читайте также:  Гемолитические свойства кишечной палочки

У женщин исследование производят в середине менструального цикла или в дни, когда нет кровянистых выделений; результат будет недостоверным в острой фазе болезни инфекционной природы (поэтому забор мазка проводят после курса терапии); интравагинальное введение любого рода медикаментов следует прекратить по согласованию с лечащим врачом не менее, чем за 2 дня до забора материала.

При взятии мазка из зева на микрофлору строго запрещено принимать пищу и напитки за 2 часа до анализа; не чистить зубы и не полоскать горло; нельзя использовать растворы для полоскания горла или спреи, содержащие противомикробные средства или антибиотики.

За несколько суток до исследования микрофлоры из носа следует исключить местное применение растворов и мазей, содержащих антибиотики.

Более детальные инструкции в каждом отдельном случае предоставляет врач, назначивший исследование.

Срок исполнения

До двух рабочих дней.

Мазок на флору

Биоматериалом для проведения гинекологической бактериоскопии служат отделяемое наружных половых органов, уретры, влагалища, шейки матки, полости матки.

Мазок.jpg
У мужчин исследуют соскоб из уретры, сперму, секрет предстательной железы (семенную жидкость).

При исследовании других органов материалом для исследования могут служить мазки из носа, зева, уха, исследование мокроты, плевральной жидкости, суставной жидкости, перитонеальной, гной и мазки из ран, отделяемое из уха, глаза и так далее.

Биоматериал наносится на предметные стекла и отправляется в лабораторию.

Что может повлиять на результаты

Проведение системной атибиотикотерапии может значительно повлиять на результат микроскопического исследования и снизить его диагностическую ценность.

На результаты исследования микрофлоры урогенитальной сферы может влиять местное применение антисептиков, антибактериальных, противогрибковых и противозачаточных препаратов.

Довольно часто мазок из зева на микрофлору дает ложный результат. Это связано с тем, что пациент нарушает правила подготовки к исследованию.

Сдать мазок на микрофлору

вы можете в ближайшем медицинском офисе ИНВИТРО. Список офисов, где принимается биоматериал для лабораторного исследования, представлен в разделе «Адреса».

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Нормальные показатели

При исследовании мазка обращают внимание:

  • на наличие и вид эпителиальных клеток, присутствующих в мазке;
  • наличие клеточного детрита и слизи; 
  • количество лейкоцитов, определяемых в поле зрения; 
  • наличие определенных морфологических типов (морфотипов) бактерий и элементов грибов, их отношение к красителям (при окраске по Граму), а также на их относительное количество.

Типы бактерий, которые встречаются в мазках:

  • грамположительные и грамотрицательные кокки, расположенные вне- и внутриклеточно, парами, группами, цепочками;
  • грамотрицательные колиформные бактерии;
  • лактоморфотипы (тип лактобактерий);
  • морфотипы дифтероидов или коринебактерий;
  • морфотипы строгих анаэробных бактерий (мобилункус, пептострептококки, фузобактерии, бактероиды).

Интерпретация микроскопической картины мазков:

  • оценивается общее количество материала на стекле.
  • оценивается состояние эпителия, присутствие ключевых клеток. Количество эпителиальных клеток не учитывается, т. к. не имеет диагностической значимости (справедливо для гинекологических мазков).

Оценка лейкоцитарной реакции

:

  • лейкоциты отсутствуют, единичные в поле зрения;
  • до 10 в поле зрения – небольшое количество;
  • 10 – 15 в поле зрения – умеренное количество;
  • 30 – 50 в поле зрения и более – большое количество;
  • умеренное и большое количество оцениваются как этиологически значимые для воспалительной реакции.

Количественная оценка микрофлоры

:

  • + или до 10 в поле зрения незначительное/скудное количество;
  • ++ или 11 – 100 в поле зрения умеренное количество;
  • +++ или 100 – 1000 в поле зрения большое количество/значительное;
  • ++++ или более 1000 в поле зрения массивное количество.
Читайте также:  Анализ кала на кишечную палочку как сдавать

Расшифровка показателей

При исследовании гинекологических мазков, нормальной флорой являются грамположительные палочки (лактоморфотипы). При возникновении инфекционного процесса данный тип бактерий, как правило, угнетается и активизируется рост условно-патогенной и патогенной микрофлоры. Снижение количества лактобактерий является одним из признаков бактериального вагиноза.

Вагиноз.jpg

Основные параметры результатов исследования

:

  • лейкоциты: не более 10 в обычном случае или не более 20 во время беременности. Повышение количества лейкоцитов говорит о присутствии воспалительного процесса;
  • эпителий: 5-10, Повышение отслаивающегося эпителия также свидетельствует о воспалительном процессе;
  • слизь: умеренное количество. Повышение количества слизи – показатель наличия мочеполовых инфекций;
  • гонококки: в норме отсутствуют. Их наличие диагностирует гонорею;
  • трихомонады: в норме не выявляются. Присутствие говорит о трихомониазе;
  • кандиды: в норме отсутствуют. Их наличие – свидетельство кандидоза (молочницы)

Также в результатах указывают степень чистоты влагалища. Всего их 4, первые 2 вписываются в вариант нормы, а 3-я и 4-я требуют лечения, по окончании которого сдается повторный мазок на флору.

Микрофлора уретры мужчин представлена главным образом эпидермальным стафилококком, некоторыми видами альфа-гемолитических стрептококков (преимущественно зеленящих), коринебактериями. Основной микроорганизм – эпидермальный стафилококк, который продуцирует вещества, подавляющие рост патогенной флоры. Нормальную микрофлору составляют палочки, других микроорганизмов быть не должно. В норме должны присутствовать лейкоциты до 15 единиц в поле зрения. Повышение лейкоцитов свидетельствует о воспалительном процессе, выявление дрожжевых грибов – о кандидозе. Гонококки и трихомонады говорят о наличии соответствующей инфекции, передающейся половым путем.

При исследовании мокроты обычно находят грамположительные кокки, морфологически сходные с пневмококками, либо мелкие неодинаковой формы палочки, грамотрицательные кокки.

В мазке из раны чаще всего встречаются грамположительные кокки.

Дополнительное обследование

Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму не является специфичным методом, и для полноценной идентификации возбудителя, а также определения его чувствительности к антибиотикам необходимо проведение бактериального посева.

В урогенитальном мазке у мужчин не определяются вирусы, хламидии, микоплазмы и уреаплазмы, поэтому для диагностики инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, используют полимеразно-цепную реакцию или иммуноферментный анализ.


Источники:

  1. Энциклопедия клинических лабораторных тестов под ред. Н.У. Тица. – М.: Изд. «Лабинформ». 1997:942.
  2. Gobernado M., et al. Bacterial identification methods. Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 2003;21(2):6-13.
  3. Кудрявцева Л. В. И соавт. Бактериальный вагиноз (Пособие для врачей) – М. 2001 – РМАПО. 61 с.

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Информация проверена экспертом

Кишечная палочка окрашивание по граму

Лишова Екатерина Александровна

Высшее медицинское образование, опыт работы – 19 лет

Поделитесь этой статьей сейчас

Похожие статьи

Прогестерон

Прогестерон: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.

Трещины на пятках

Трещины на пятках: причины появления, при каких заболеваниях возникают, диагностика и способы лечения.

Алопеция

Алопеция: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.

Зуд кожи головы

Зуд кожи головы: причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения.

Источник

Окрашивание по Граму широко распространено в микробиологии, так как это один из самых простых способов дифференциации бактерий в зависимости от состава их клеточной стенки. По Граму все бактерии можно разделить на грамположительные (Грам(+)) и грамотрицательные (Грам(-)). Метод окрашивания по Граму был разработан в 1884 году, и с того времени не утратил популярности, хотя и неоднократно модифицировался.

Читайте также:  Кишечная палочка как обнаружить какие анализы

Ганс Грам

Структура клеточной стенки

Окрашивание по Граму позволяет выявить, к грамположительным или грамотрицательным относится та или иная бактерия. Деление бактерий на Грам(+) и Грам(-) осуществляется в соответствие со строением их клеточной стенки.

Клеточная стенка в наибольшем количестве содержит пептидогликан (муреин) – сложное вещество, в состав которого входят пептапептид и гликан. Гликан состоит из чередующихся остатков N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных друг с другом β-1,4-гликозидными связями. Пептидогликан обеспечивает поддержание формы клетки, осмотическую защиту, а также антигенные функции.

Основные различия грамположительных и грамотрицательных бактерий

У различных бактерий толщина слоя пептидогликана не одинакова. У бактерий, которые относят к грамположительным, она составляет от 15 до 80 нм, в то время как у грамотрицательных – от 2 до 8 нм. В то же время у грамотрицательных бактерий под слоем пептидогликана есть особая структура, которой нет у грамположительных бактерий – периплазматическое пространство. Это пространство заполнено гидролитическими ферментами – β-лактамазой, рибонуклеазой 1, фосфатазой. Именно эти ферменты ответственны за резистентность грамотрицательных бактерий в отношении многих антибиотиков.

Слой пептидогликана Грам(-) бактерий связан с липополисахаридом – антигенной структурой, содержащей эндотоксин. У Грам(+) бактерий похожие функции выполняют тейхоевые кислоты.

Грамположительные бактерии

У грамотрицательных бактерий присутствует дополнительная структура – внешняя мембрана.

Суть метода окрашивания

Перед тем как начать окрашивание, готовят мазки исследуемых бактерий. Для этого на предметное стекло капают воду и бактериальной петлей добавляют туда культуру микроорганизмов. Затем, после полного высыхания воды, мазок фиксируют – предметное стекло проносят несколько раз над пламенем горелки. Окрашивание мазков по Граму более эффективно, чем окрашивание живых бактерий – с мертвыми клетками лучше связываются молекулы красителя.

Окрашивание производится в несколько этапов:

  1. На фиксированный мазок накладывают небольшие кусочки фильтровальной бумаги и наливают основной краситель – генцианвиолет или метиленовый синий.
  2. Спустя 3-5 минут снимают окрашенную фильтровальную бумагу и заливают мазок раствором Люголя на 1 минуту. При этом препарат темнеет.
  3. Сливают раствор Люголя и обрабатывают мазок чистым этиловым спиртом: капают несколько капель на препарат, спустя 20 секунд сливают. Процедуру повторяют 2-3 раза.
  4. Промывают стекло с исследуемым препаратом дистиллированной водой.
  5. Производят дополнительное окрашивание – докрашивают препарат фуксином. Спустя 1-2 минуты краситель смывают.
  6. После высыхания воды изучают мазок под микроскопом. Грамположительные бактерии будут иметь сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные – розовый или красный.

Лабораторные красители

Причины различного характера окрашивания

Как было описано выше, при окрашивании бактерий по Граму грамположительные бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в красный или розовый. Причина дифференциального окрашивания бактерий по этому методу состоит в том, что после попадания в клетку растворимой формы генцианвиолета краситель переходит в нерастворимую йодную форму. Во время обработки бактерии этиловым спиртом под действием этого неполярного растворителя из мембраны экстрагируются липиды. После этого мембрана становится пористой и больше не является существенным препятствием для вымывания красителя. Однако пептидогликан более устойчив к действию неполярных растворителей, в том числе и спирта. Именно он препятствует вымыванию красителя, поэтому бактерии с толстым муреиновым слоем окрашиваются в сине-фиолетовый цвет (грамположительно), и после обработки спиртом свой цвет не меняют.

Грамположительные палочки

Тонкий муреиновый слой грамотрицательных бактерий не может удержать в клетке молекулы красителя, поэтому после действия спирта они становятся бесцветными – окрашиваются грамотрицательно.

После воздействия на мазок фуксином при окрашивании по Граму грамположительные бактерии остаются сине-фиолетовыми, а грамотрицательные приобретают розово-красный оттенок.

Грамотрицательные бактерии

Примеры Грам(+) и Грам(-) бактерий

К грамотрицательным относятся цианобактерии, серобактерии, железобактерии, хламидии, риккетсии, уксусные бактерии, многие метилобактерии, тионовые бактерии, арсенитобактерии, карбоксидобактерии.

Грамположительными являются бифидобактерии, многие водные бактерии, стрептококки и стафилококки.

Источник