Кишечная палочка окраска по граму
Текущая версия страницы пока не проверялась опытными участниками и может значительно отличаться от версии, проверенной 16 июля 2019; проверки требуют 4 правки.
У этого термина существуют и другие значения, см. Метод (значения).
Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Гансом Кристианом Грамом.
По Граму бактерии окрашивают анилиновыми красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором иода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными в синий цвет и имеющие толстую клеточную стенку, называют грамположительными бактериями, обозначаются Грам (+), — в отличие от грамотрицательных (тонкая клеточная стенка), Грам (−), которые при промывке обесцвечиваются.
После промывания растворителем при окрашивании по Граму добавляется контрастный красный краситель, который окрашивает все грамотрицательные бактерии в красный или розовый цвет. Это происходит из-за наличия внешней мембраны, препятствующей проникновению красителя внутрь клетки. Тест классифицирует бактерии, разделяя их на две группы относительно строения их клеточной стенки.
Использование в диагностике[править | править код]
Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
Грамположительны кокковые (кроме представителей рода Neisseria) и спороносные (за исключением Coxiella burnetii) формы бактерий, они окрашиваются в сине-чёрный (тёмно-синий) цвет.
Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный или розовый цвет.
Техника проведения окраски[править | править код]
Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.
Для окраски по Граму чаще используют анилиновые красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином грамположительные микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.
Грамотрицательные микроорганизмы образуют с основными красителями и иодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, а затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.
Подготовка материала для окраски[править | править код]
- Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла.
- Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют.
- Гистологические срезы готовят по стандартной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.
Фиксация[править | править код]
При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.
Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.
Физический способ фиксации[править | править код]
Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.
Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80°C).
Химический способ фиксации[править | править код]
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (96-процентного этилового спирта — 60 %, хлороформа — 30 %, ледяной уксусной кислоты — 10 %), спирт-формол (40-процентного формалина — 5 мл, 96-процентного этилового спирта — 95 мл). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе. Применяется также фиксация в парах 40-процентного формалина в течение нескольких секунд.
Процесс окрашивания мазков[править | править код]
- На фиксированный мазок наливают один из осно́вных красителей на 2—3 минуты. Во избежание осадков окрашивают через фильтровальную бумагу.
- Сливают краску, аккуратно удаляют фильтровальную бумагу. Мазок заливают раствором Люголя или йодистым раствором по Граму (водный раствор йодида калия и кристаллического йода в соотношении 2:1) на 1—2 минуты до почернения препарата.
- Раствор сливают, мазок прополаскивают 96° этиловым спиртом или ацетоном, наливая и сливая его, пока мазок не обесцветится и стекающая жидкость не станет чистой (приблизительно 20—40—60 секунд).
- Тщательно промывают стекла в проточной или дистиллированной воде 1—2 мин.
- Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают фуксином или сафранином (2—5 мин).
- Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.
Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту[править | править код]
- Депарафинированные срезы доводят до воды.
- Окрашивают 20 мин в 1 % растворе парарозанилина или основного фуксина в 1 % уксусной кислоте (раствор красителя нагревают до кипения, охлаждают и фильтруют).
- Промывают в 3 сменах дистиллированной воды.
- Окрашивают 5 мин в 1 % кристаллического фиолетового в дистиллированной воде.
- Быстро ополаскивают в 1 % растворе хлорида натрия.
- Обрабатывают 30 с в смеси: 1 часть иода + 2 части йодида калия + 100 частей дистиллированной воды.
- Промокают фильтровальной бумагой.
- Дифференцируют, нанося на срез смесь равных объёмов анилина и ксилола (1 — 2 мл); растворы сливают до тех пор, пока облачка красителя не перестанут отходить от среза.
- Проводят через 3 смены ксилола.
- Заключают в бальзам или любую смолу, растворённую в ксилоле.
Результат: грамположительные бактерии — сине-чёрные, фибрин — фиолетовый, ядра — красные.
См. также[править | править код]
- Окраска микроорганизмов
- Анилиновые красители
Литература[править | править код]
- Грама метод // Гоголь — Дебит. — М. : Советская энциклопедия, 1972. — (Большая советская энциклопедия : [в 30 т.] / гл. ред. А. М. Прохоров ; 1969—1978, т. 7).
На немецком языке
- Gram, HC (англ.)русск.. Über die isolierte Färbung der Schizomyceten in Schnitt- und Trockenpräparaten (нем.) // Fortschritte der Medizin : magazin. — 1884. — Bd. 2. — S. 185—189.
На английском языке
- Bergey, David H.; John G. Holt; Noel R. Krieg; Peter H.A. Sneath. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (англ.). — 9th ed.. — Lippincott Williams & Wilkins (англ.)русск., 1994.
- Madigan, MT; Martinko J; Parker J. Brock Biology of Microorganisms (неопр.). — 10th Edition. — Lippincott Williams & Wilkins (англ.)русск., 2004.
- Ryan, KJ; Ray, C. G. Sherris Medical Microbiology (неопр.). — 4th ed.. — McGraw Hill., 2004.
- Application of stains in clinical microbiology // Biotechnic & Histochemistry, Volume 76, Number 3, May 01, 2001, pp. 119—125(7)
Источник
- ИНВИТРО
- Библиотека
- Лабораторная диагностика
- Микроскопическое (бактериоскопическое) исследование мазка (Bacterioscopic examination of different smears (vaginal, cervical, urethral, sputum, etc.)
Последнее изменение: январь 2021
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер.
Мазок на флору: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.
Показания к назначению исследования
Мазок на флору (бактериоскопия) – простой, недорогой, эффективный метод визуального анализа биологического материала под микроскопом, который позволяет получить представление о функциональном состоянии различных органов, оценить наличие или отсутствие воспалительного процесса и степень его выраженности. В лаборатории мазок окрашивают специальными реагентами. Различные микроорганизмы окрашиваются в разные цвета, что позволяет их идентифицировать. Такая процедура называется окрашиванием по Граму. Кроме изучения под микроскопом, собранный биологический материал может быть использован для бактериологического анализа-посева на микрофлору, что поможет максимально точно выявить возбудителей инфекций, их пропорциональное соотношение и даже чувствительность к тем или иным антибиотикам.
Бактерии делятся на грамположительные (Грам (+)) и грамотрицательные (Грам (-)). Хотя есть ряд бактерий, которые не имеют специфической окраски по Граму.
Спектр бактерий меняется в зависимости от локализации в организме (заселения тех или иных слизистых оболочек и органов). Это первичная диагностика, которая позволяет выявить заболевания на ранних стадиях, а также назначить лечение. Метод широко используется врачами разных специальностей при подозрении на инфекционный процесс и при наличии гнойно-воспалительных проявлений заболевания. Кроме того, мазок на флору применяют в рамках диспансерных обследований в гинекологической и акушерской практике.
Существует несколько видов лабораторного исследования мазка на флору.
Гинекологический мазок на микрофлору. Представляет собой общее исследование, которое позволяет проверить состояние слизистой влагалища. Дополнительно диагностируются патологии, которые нередко вызывают болезнетворные микроорганизмы, – кандидоз, вагиноз, цервицит. При выполнении такого бактериоскопического исследования можно диагностировать заболевания, которые передаются половым путем.
Мазок на микрофлору у мужчин (урологический мазок). Микроскопическое исследование позволяет определить состав микрофлоры мочеиспускательного канала (уретры) мужчины, выявить воспаление в уретре (уретрит), а также ряд специфических возбудителей, таких как трихомонады и гонококки.
Показания к анализу гинекологического или урологического мазка являются:
- профилактический осмотр;
- боль в процессе мочеиспускания;
- дискомфорт или боли внизу живота;
- патологические выделения;
- зуд или раздражение половых органов.
- подозрение на бесплодие;
- любое заболевание, передающееся половым путем.
Врач может назначить этот анализ после длительных курсов антибиотиков для предупреждения нарушений бактериального баланса на слизистых оболочках половых органов.
Микроскопию обязательно проводят женщинам во время беременности, чтобы исключить воспалительные процессы и половые инфекции, что необходимо для нормального вынашивания и рождения здорового ребенка.
Мазок на микрофлору не назначается для выявления раковых заболеваний, он не информативен при диагностике таких инфекций, как хламидиоз, ВИЧ, герпес и некоторых заболеваний, передающихся половым путем.
Мазки другой локализации. Показаниями к исследованию являются инфекционно-воспалительные заболевания ЛОР-органов, легких, глаз (при подозрении на гонококковую инфекцию), кожи, мягких тканей и др. Мазок на микрофлору полости рта — это обязательный анализ при подозрении на дифтерию или коклюш.
Подготовка к процедуре
Проводить исследования и сбор материала следует до начала лечения антибиотиками, антисептиками, противогрибковыми препаратами, если врач не назначил иное.
Следует соблюдать ряд требований перед сдачей гинекологического или урологического мазка:
- минимум за два дня до сдачи исключить половые контакты;
- не принимать ванну за сутки до анализа, ограничиться душем, провести гигиеническую процедуру внешних половых органов без применения моющих средств.
- в день сдачи анализа не выполняют гигиенические процедуры половых органов.
- за 2-3 часа до взятия мазка не рекомендуется мочиться, так как можно смыть из уретры необходимый для исследования материал.
У женщин исследование производят в середине менструального цикла или в дни, когда нет кровянистых выделений; результат будет недостоверным в острой фазе болезни инфекционной природы (поэтому забор мазка проводят после курса терапии); интравагинальное введение любого рода медикаментов следует прекратить по согласованию с лечащим врачом не менее, чем за 2 дня до забора материала.
При взятии мазка из зева на микрофлору строго запрещено принимать пищу и напитки за 2 часа до анализа; не чистить зубы и не полоскать горло; нельзя использовать растворы для полоскания горла или спреи, содержащие противомикробные средства или антибиотики.
За несколько суток до исследования микрофлоры из носа следует исключить местное применение растворов и мазей, содержащих антибиотики.
Более детальные инструкции в каждом отдельном случае предоставляет врач, назначивший исследование.
Срок исполнения
До двух рабочих дней.
Мазок на флору
Биоматериалом для проведения гинекологической бактериоскопии служат отделяемое наружных половых органов, уретры, влагалища, шейки матки, полости матки.
У мужчин исследуют соскоб из уретры, сперму, секрет предстательной железы (семенную жидкость).
При исследовании других органов материалом для исследования могут служить мазки из носа, зева, уха, исследование мокроты, плевральной жидкости, суставной жидкости, перитонеальной, гной и мазки из ран, отделяемое из уха, глаза и так далее.
Биоматериал наносится на предметные стекла и отправляется в лабораторию.
Что может повлиять на результаты
Проведение системной атибиотикотерапии может значительно повлиять на результат микроскопического исследования и снизить его диагностическую ценность.
На результаты исследования микрофлоры урогенитальной сферы может влиять местное применение антисептиков, антибактериальных, противогрибковых и противозачаточных препаратов.
Довольно часто мазок из зева на микрофлору дает ложный результат. Это связано с тем, что пациент нарушает правила подготовки к исследованию.
Сдать мазок на микрофлору
вы можете в ближайшем медицинском офисе ИНВИТРО. Список офисов, где принимается биоматериал для лабораторного исследования, представлен в разделе «Адреса».
Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Нормальные показатели
При исследовании мазка обращают внимание:
- на наличие и вид эпителиальных клеток, присутствующих в мазке;
- наличие клеточного детрита и слизи;
- количество лейкоцитов, определяемых в поле зрения;
- наличие определенных морфологических типов (морфотипов) бактерий и элементов грибов, их отношение к красителям (при окраске по Граму), а также на их относительное количество.
Типы бактерий, которые встречаются в мазках:
- грамположительные и грамотрицательные кокки, расположенные вне- и внутриклеточно, парами, группами, цепочками;
- грамотрицательные колиформные бактерии;
- лактоморфотипы (тип лактобактерий);
- морфотипы дифтероидов или коринебактерий;
- морфотипы строгих анаэробных бактерий (мобилункус, пептострептококки, фузобактерии, бактероиды).
Интерпретация микроскопической картины мазков:
- оценивается общее количество материала на стекле.
- оценивается состояние эпителия, присутствие ключевых клеток. Количество эпителиальных клеток не учитывается, т. к. не имеет диагностической значимости (справедливо для гинекологических мазков).
Оценка лейкоцитарной реакции
:
- лейкоциты отсутствуют, единичные в поле зрения;
- до 10 в поле зрения – небольшое количество;
- 10 – 15 в поле зрения – умеренное количество;
- 30 – 50 в поле зрения и более – большое количество;
- умеренное и большое количество оцениваются как этиологически значимые для воспалительной реакции.
Количественная оценка микрофлоры
:
- + или до 10 в поле зрения незначительное/скудное количество;
- ++ или 11 – 100 в поле зрения умеренное количество;
- +++ или 100 – 1000 в поле зрения большое количество/значительное;
- ++++ или более 1000 в поле зрения массивное количество.
Расшифровка показателей
При исследовании гинекологических мазков, нормальной флорой являются грамположительные палочки (лактоморфотипы). При возникновении инфекционного процесса данный тип бактерий, как правило, угнетается и активизируется рост условно-патогенной и патогенной микрофлоры. Снижение количества лактобактерий является одним из признаков бактериального вагиноза.
Основные параметры результатов исследования
:
- лейкоциты: не более 10 в обычном случае или не более 20 во время беременности. Повышение количества лейкоцитов говорит о присутствии воспалительного процесса;
- эпителий: 5-10, Повышение отслаивающегося эпителия также свидетельствует о воспалительном процессе;
- слизь: умеренное количество. Повышение количества слизи – показатель наличия мочеполовых инфекций;
- гонококки: в норме отсутствуют. Их наличие диагностирует гонорею;
- трихомонады: в норме не выявляются. Присутствие говорит о трихомониазе;
- кандиды: в норме отсутствуют. Их наличие – свидетельство кандидоза (молочницы)
Также в результатах указывают степень чистоты влагалища. Всего их 4, первые 2 вписываются в вариант нормы, а 3-я и 4-я требуют лечения, по окончании которого сдается повторный мазок на флору.
Микрофлора уретры мужчин представлена главным образом эпидермальным стафилококком, некоторыми видами альфа-гемолитических стрептококков (преимущественно зеленящих), коринебактериями. Основной микроорганизм – эпидермальный стафилококк, который продуцирует вещества, подавляющие рост патогенной флоры. Нормальную микрофлору составляют палочки, других микроорганизмов быть не должно. В норме должны присутствовать лейкоциты до 15 единиц в поле зрения. Повышение лейкоцитов свидетельствует о воспалительном процессе, выявление дрожжевых грибов – о кандидозе. Гонококки и трихомонады говорят о наличии соответствующей инфекции, передающейся половым путем.
При исследовании мокроты обычно находят грамположительные кокки, морфологически сходные с пневмококками, либо мелкие неодинаковой формы палочки, грамотрицательные кокки.
В мазке из раны чаще всего встречаются грамположительные кокки.
Дополнительное обследование
Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму не является специфичным методом, и для полноценной идентификации возбудителя, а также определения его чувствительности к антибиотикам необходимо проведение бактериального посева.
В урогенитальном мазке у мужчин не определяются вирусы, хламидии, микоплазмы и уреаплазмы, поэтому для диагностики инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, используют полимеразно-цепную реакцию или иммуноферментный анализ.
Источники:
- Энциклопедия клинических лабораторных тестов под ред. Н.У. Тица. – М.: Изд. «Лабинформ». 1997:942.
- Gobernado M., et al. Bacterial identification methods. Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 2003;21(2):6-13.
- Кудрявцева Л. В. И соавт. Бактериальный вагиноз (Пособие для врачей) – М. 2001 – РМАПО. 61 с.
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Информация проверена экспертом
Лишова Екатерина Александровна
Высшее медицинское образование, опыт работы – 19 лет
Поделитесь этой статьей сейчас
Похожие статьи
Прогестерон
Прогестерон: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.
Частое мочеиспускание
Частое мочеиспускание: причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения.
Стоматит
Стоматит: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.
Конъюнктивит
Конъюнктивит: причины появления, классификация, симптомы, диагностика и способы лечения.
Источник