Кишечные инфекции методом пцр
[09-134]
Острые кишечные инфекции, скрининг (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus)
1920 руб.
Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.
Синонимы русские
ОКИ, ПЦР (кал).
Синонимы английские
Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Кал.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
- Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
Общая информация об исследовании
Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.
Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.
Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев “бактериологически неподтвержденной дизентерии”, особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.
Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.
Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).
В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является “золотым стандартом” в клинической диагностике норовирусных инфекций.
Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.
Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.
Для чего используется исследование?
- Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
- для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).
Когда назначается исследование?
- При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
- при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
- при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Причины положительного результата:
- присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus).
Причины отрицательного результата:
- отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus.
Важные замечания
- Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации.
- Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).
Также рекомендуется
- Yersinia pseudotuberculosis, ДНК [ПЦР]
- anti-Shigella flexneri 1-5, anti-Shigella flexneri 6, anti-Shigella sonnei
- Посев кала на патогенную флору (диз. группа и тифо-паратифозная группа)
- Посев кала на условно-патогенную флору с определением чувствительности к антибиотикам
- Анализ кала на цисты простейших
- Копрограмма
- Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
- Лейкоцитарная формула
- Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
Кто назначает исследование?
Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.
Литература
- Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2005. – 736 с.
- Gómez-Duarte O., Bai J., Newel E. Detection of E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1-9. PMCID: PMC2701628.
Источник
Рolymerase Сhain Reaction (PCR), иначе полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это прогрессивный метод лабораторной диагностики инфекционных заболеваний обнаружения генетических патологий, выявления неопластических клеток в начальной стадии рака.
ПЦР относится к генно-молекулярным исследованиям, что обеспечивает высокую точность показателей, минимизирует риск ложноположительных результатов. Для анализа используется биологический материал – кровь, моча, мазок, экскременты, ликвор (спинномозговая жидкость).
Специфика исследования методом ПЦР
Анализ кала на ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний и дифференцирует их разновидность на генно-молекулярном уровне. В ходе исследования оцениваются макромолекулы ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) бактерий, простейших паразитов, глистов или РНК (рибонуклеиновой кислоты) вирусов. Для идентификации достаточно небольшого фрагмента патогена, обнаруженного в экскрементах.
В задачи молекулярной диагностики входит:
- обнаружение инфекционного агента;
- идентификация разновидности микроорганизма (вирус, бактерия, простейший и т. д.);
- дифференциация типа, рода, семейства и т. д.;
- определение тактики лечения, в соответствии с диагностированным заболеванием.
Образец биоматериала помещают в реактор (амплификатор), добавляют реакционную смесь. При последовательной смене температурного режима разрываются водородные цепи дезоксирибонуклеиновой кислоты, образуются комплексы матрицы с праймерами – короткими генетическими фрагментами.
Реагенты достраивают матричную цепь и в ходе реакции амплификации формируют множественные копии возбудителя. При достаточном количестве копий амплификатор дает качественно-количественную оценку обнаруженному возбудителю.
Макромолекулы РНК и ДНК являются носителями уникальной информации, характерной для определенного вида, поэтому точность результатов ПЦР-диагностики максимально приближена к 100%.
Спектр инфекций, определяемых методом PCR по образцу кала
Полимеразную цепную реакцию используют для диагностики кишечных бактериальных и вирусных инфекций, различных видов гельминтозов, заражения организма простейшими паразитами.
Неполный перечень возбудителей и болезней, определяемых методом ПЦР
Бактерии | ||
Helicobacter pylori | хеликобактер пилори | язв желудка и двенадцатиперстной кишки, гастрит, дуоденит, рак желудка |
Salmonella species | сальмонелла | сальмонеллез |
Campylobacte | кампилобактерия | кампилобактериоз |
Escherichia coli | кишечная палочка (энтеротоксигенные штаммы) | коли-инфекция |
Shigella | шигелла | дизентерия |
V. cholerae, Ber | холерный вибрион | холера |
Yersinia pseudotuberculosis | иерсиния | псевдотуберкулез (кишечный иерсиниоз) |
Вирусы | ||
Rotavirus | ротавирус | ротавирусная инфекция |
Adenovirus | аденовирус | кишечный грипп |
Astrovirus | астровирус | астровирусная инфекция, гастроэнтерит |
Norovirus | норовирус | норовирусная инфекция |
Гельминты и простейшие паразиты | ||
Giardia lamblia | лямблии | лямблиоз |
Enterobius | острицы | энтеробиоз |
Ascaris lumbricoides | аскариды | аскаридоз |
Trichocephalus trichiurus | власоглав | трихоцефалез |
Opisthorchis felineus и Opisthorchis viverrini | описторхи (печеночные сосальщики) | описторхоз |
Taenia solium | свиной цепень | тениоз |
Taenia saginata | бычий цепень | тениаринхоз |
Echinococcus | эхинококки | эхинококкоз |
Entamoeba histolytica | амеба дизентерийная | амебиаз |
В большинстве случаев, анализ ПЦР кала назначают для выявления кишечных вирусов, бактерии хеликобактер пилори, лямблий и дизентерийных амеб. Определение глистной инвазии, как правило, проводят посредством обычного исследования экскрементов на яйца глистов. Бактериальные инфекции диагностируют с помощью анализа на дизгруппу.
Во многих клиниках существует стандартный ПЦР-скрининг на кишечные инфекции, вызванные бактериями и вирусами. Профиль включает определение восьми возбудителей (сальмонелла, шигелла, кампилобактерия, кишечная палочка, ротавирус, аденовирус, астровирус, норовирус).
Медицинские специалисты
ПЦР используют для уточнения спорных диагнозов, при получении ложноположительных и ложноотрицательных результатов других исследований. Анализ кала методом полимеразной цепной реакции могут назначить:
- гастроэнтеролог (взрослый или детский);
- инфекционист;
- гепатолог;
- педиатр;
- терапевт.
- проктолог;
- онколог;
- диетолог.
По желанию сдать анализ можно самостоятельно на возмездной основе в любом диагностическом центре Москвы и других городов РФ.
Ключевые достоинства PCR-диагностики
Метод полимеразной цепной реакции обладает значительными преимуществами, в сравнении с иными анализами:
- Подлинность идентификации возбудителей. Определение генно-молекулярной структуры патогенного микроорганизма обеспечивает высокую точность результата.
- Гиперчувствительность к инфекционным агентам. Для выявления патогена достаточно его молекулярного присутствия в образце кала.
- Оперативность проведения анализа. Исследование в условиях лаборатории занимает 1-3 дня.
- Комплексность. Одного образца кала достаточно для проведения анализа на несколько патогенных микроорганизмов.
- Универсальность. С помощью Рolymerase Сhain Reaction возможно определить практически любых инфекционных агентов. Кроме того, анализ обнаруживает не только активные патогены, но и неактивные (погибшие под воздействием лекарственных препаратов).
- Специфичность. В отличие от серологических методов, ПЦР не допускает перекрестных реакций иммуноглобулинов с близкородственными не комплементарными антигенами. Такая особенность исключает получение ложноположительных результатов анализа.
Важно! Проведение исследования методом ПЦР возможно только в специально оснащенных лабораториях при условии абсолютной стерильности и высокой профессиональной квалификации персонала. Присутствие любых посторонних ДНК в воздухе может повлиять на итоговые показатели анализа.
Ошибочные результаты PCR фиксируются при редком явлении генной мутации бактерий и вирусов.
Варианты контейнеров для сбора кала на анализы
Подготовка к сдаче биоматериала на анализ
Стандартные правила подготовки перед сбором экскрементов для ПЦР-диагностики включают:
- Отказ от приема любых медикаментов за 3-4 суток. Энтеросорбенты и антибиотики оказывают влияние на кишечную флору, слабительные лекарства – на моторику кишечника, препараты железа – на окрас экскрементов. Это может «смазать» картину итоговых результатов.
- Устранение из меню продуктов, провоцирующих интенсивное газообразование (блюда из бобовых, капусту, сдобу и ржаной хлеб), за 2-3 дня.
- Исключение ректальных суппозиториев и микроклизм.
- Отказ от употребления спиртных напитков за 2-3 дня.
При назначенной рентгенографии желудка с использованием бария обследование нельзя проходить до сдачи образца кала. Грудным детям за 3-4 дня не рекомендуется вводить новый прикорм.
Сбор биоматериала на анализ
Сбор и транспортировка биоматериала на исследование методом полимеразной цепной реакции допускается только в стерильном контейнере, который необходимо заранее приобрести в аптеке. Аптечный контейнер имеет герметичную крышку и снабжен специальной ложечкой. Сдать образец кала в лабораторию необходимо утром. Максимальный интервал доставки составляет 3 часа.
При сборе кала следует придерживаться алгоритма:
- Провести гигиену аноректальной зоны без использования мыла (геля).
- Опорожнить мочевой пузырь.
- Произвести дефекацию в судно (использовать бумагу или полиэтилен). Если собирать образец из унитаза, неизбежно попадание микробов.
- Заполнить аптечную емкость на 1/3 часть фрагментами фекалий (для этого использовать ложечку).
- Герметично закрыть крышку контейнера.
- Оперативно доставить биологический материал в лабораторию медицинского учреждения.
Важно! Запрещается пить слабительные лекарства (в том числе, травяные сборы и БАДы) и проводить процедуру клизмирования. Образец для исследования должен быть получен естественным способом.
Если незамедлительная транспортировка кала к месту исследования невозможна, плотно закрытый контейнер нужно поместить в холодильнике не более, чем на 12 часов. Хранение экскрементов в морозильной камере или при комнатной температуре делает их непригодными к молекулярному исследованию.
При сборе каловых масс с подгузника грудного ребенка важно следить, чтобы в контейнер не попали фрагменты гигиенической ткани. Женщинам не рекомендуется собирать кал для ПЦР-диагностики в первую неделю фолликулярной фазы менструального цикла.
Возможные примеси менструальной крови помешают исследованию. При необходимости проведения экстренного анализа влагалище необходимо закрыть гигиеническим тампоном. Молекулярная диагностика чувствительна к попаданию любых примесей.
Во время процедуры сбора биоматериала нельзя касаться внутренней стороны емкости, ложечки и крышки. Реакция амплификации может создать копии ДНК, случайно попавшей с рук. Итоговые данные будут ложными.
Результаты анализа
В указанное время пациент получает бланк с качественной интерпретацией результата. Варианты могут быть:
- «обнаружено» или «положительно» – наличие инфекционного заболевания;
- «не обнаружено» или «отрицательно» – отсутствие заражения.
Положительный результат при отсутствии выраженных проявлений болезни свидетельствует о латентном бессимптомном течении инфекции или пребывании возбудителя в стадии инкубации.
Пример бланка результатов молекулярного исследования кала
Итоги
ПЦР – один из самых информативных диагностических методов. Реакция амплификации базируется на определении ДНК и РНК возбудителей инфекционных заболеваний, что обеспечивает высокую точность результатов.
ПЦР анализ кала позволяет выявить вирусные и бактериальные кишечные инфекции, обнаружить инвазии простейших паразитов и гельминтов, а также на 100% идентифицировать патогенные микроорганизмы. Время выполнения исследования – 1-3 суток, в зависимости от загруженности лаборатории.
Источник
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
В конце статьи см. словарь
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).
В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.
Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.
Специфичность и применение
ПЦР – метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.
ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).
Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.
Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.
Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.
Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике – для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ – вирусов папилломы человека; в пульмонологии – для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии – для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний – в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии – для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.
Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами – короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 – 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.
После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.
Проведение ПЦР
Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:
- ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
- два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
- термостабильная ДНК-полимераза;
- дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
- ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
- буферный раствор.
ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.
Ход реакции
Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 – 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 – 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 – 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 – 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.
Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 – 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 – 2 минут.
ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 – 15 мин.
Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию
Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой – позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.
Словарь
ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота – биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.
РНК– рибонуклеиновая кислота – биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев – нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.
Нуклеоти́ды – основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию – адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) – гуанин, цитозиновый (C) – цитозин, тиминовый (Т) – тимин, урациловый (U) – урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов – A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа – A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК – рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.
Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.
Литература
- Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
- Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. — 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
- Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-X
- https://ru.wikipedia.org/wiki
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Информация проверена экспертом
Лишова Екатерина Александровна
Высшее медицинское образование, опыт работы – 19 лет
Поделитесь этой статьей сейчас
Похожие статьи
Холестерин
Холестерин: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.
Правила сбора волос
Волосы необходимо аккуратно отстричь (не выдергивать!) в непосредственной близости от корней в четырех-пяти местах на затылке ближе к области шеи.
Биохимический анализ крови
Биохимический анализ крови: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.
Источник