Количество кишечной палочки в 1 л водопроводной воды

Коли-индекс – количество кишечных палочек в 1 л воды.

Установив коли-титр, можно произвести пересчет на коли-индекс. В отличие от других микроорганизмов, кишечная палочка может размножаться при температуре до 45°С, легко сбраживать углеводы с образованием кислоты и газа. Это свойство микроба положено в основу определения коли-титра.

Существует несколько методов определения ОКБ, ТКБ и коли-титра.

Метод мембранных фильтров. Сущность этого метода заключается в концентрировании микробов из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на фильтрах на среде Эндо и дифференцированием выросших колоний.

Мембранные фильтры № 3 кипятят в дистиллированной воде, кладут на асбестовый фильтр Зейтца и фильтруют через него определенное соответствующей методикой количество воды (например, питьевой воды – 333 см3, воду открытых источников – в нескольких объемах: 100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3). После окончания фильтрации фильтр захватывают стерильным пинцетом и кладут на поверхность среды Эндо в чашках Петри. Инкубируют в термостате 18-24 ч. При обнаружении на фильтре колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском или без него), готовят мазки, окрашивают по Граму, ставят оксидазную пробу. Оксидазной пробой дифференцируют кишечную палочку от других грамотрицательных водных сапрофитов, которые в отличие от кишечной палочки обладают ферментом оксидазой (например, Pseudomonas sp.)

Подсчитывают лактозоположительные оксидазоотрицательные колонии грамотрицательных микробов, что характерно для кишечной палочки, и вычисляют коли-индекс.

Пример: профильтровано три объема воды по 100 см3. На первом фильтре выросло 3 колонии кишечной палочки, на втором – 5 колоний, на третьем – 4 колонии. Среднее арифметическое (3+5+4) : 3=4 колонии при посеве 100 мл воды, соответственно в 1000 мл – 40 кишечных палочек. Значит коли-индекс равен 40, коли-титр равен 25 (1000 : 40).

Бродильный метод. Сущность этого метода заключается в посеве определенных объемов воды в дифференциально-диагностические среды. При наличии изменений сред, характерных для роста кишечной палочки, пересевают культуру на среду Эндо и проводят ее идентификацию.

В зависимости от водоисточника, проводят посев различных объемов воды. Например, при исследовании воды открытых водоемов – 100 см3,
10 см3, 1 см3, 0,1 см3. Объемы 100 см3 и 10 см3 высевают в колбы или флаконы, 1 см3 и 0,1 см3 — в пробирки.

Для исследования воды бродильным методом используют дифференциально-диагностические среды Кода (с лактозой и индикатором бромтимоловым синим), Хейфеца (с маннитом, розоловой кислотой и метиленовым синим), Кесслера (с лактозой и генцианом фиолетовым), Булира (с маннитом и нейтральным красным с поплавком). Посевы воды культивируют в термостате при 37°С или при 44°С в течение суток. Из пробирок и флаконов, в которых отмечено помутнение среды, образование кислоты или газа при расщеплении углевода, производят пересев на среду Эндо бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. При обнаружении темно-красных колоний с металлическим блеском или без него проводят микроскопию с окраской по Граму и дальнейшую идентификацию кишечной палочки по общепринятой методике.

Результат анализа выражают в виде коли-индекса, который определяют по специальным таблицам. Так, например, при отсутствии роста кишечной палочки во всех объемах воды (100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3) коли-индекс будет менее 9, коли-титр — более 111.

По ГОСТу коли-титр водопроводной воды в городах должен быть не менее 300 (коли-индекс не более 3), в многомиллионных городах коли-титр не менее 500 (коли-индекс не более 2). Вода открытых водоемов считается хорошей при коли-титре 100, коли-индексе 10.

В настоящее время наряду с определением коли-титра в воде проводят также определение титра Enterococcus faecalis. Для этого цельную воду и ее разведения в объеме 1 см3 засевают в одну из жидких элективных сред для энтерококков (щелочно-полимиксиновая энтерококковая среда и др.), а затем проводят идентификацию данных микроорганизмов.

В качестве СПМО воды используют также бактериофаги кишечной палочки – коли-фаги, а также фаги сальмонелл и шигелл. Их обнаруживают там, где есть соответствующие бактерии, к которым эти фаги адаптированы. Фаги выживают во внешней среде более 9 мес. Они ценны как показатель фекального загрязнения, особенно энтеровирусами, так как фаги выделяются из сточных вод с той же частотой, что и энтеровирусы (например, возбудитель гепатита А человека). По устойчивости к хлору фаги сравнимы с энтеровирусами, поэтому их считают одним из показателей качества очистки сточных вод.

Коли-фаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при температуре 370С через 18 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки, негативные колонии) на питательном агаре.

Метод определения коли-фагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении их в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре. Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.

В разделе: Вода
2018-05-2424.05.2018

Вода является неотъемлемой составляющей всех живых систем. В среднем, человек потребляет 2,5 литра воды в день. Наряду с полезным кальцием, магнием и калием вода несет в себе и вредные для здоровья человека элементы, такие как нитраты, нитриты, кадмий и тому подобное. Характеристики употребляемой нами жидкости определяют качество и продолжительность жизни. Согласно докладу Всемирной организации здравоохранения (WHO, 2007), около 1,1 миллиарда человек не имеют доступа к безопасным источникам водоснабжения, а около 2 миллиона человек ежегодно умирают от заболеваний, передающихся через питьевую воду. Тошнота и диарея – не самое опасное, что вызывают микроорганизмы. Бактерии и вирусы в прямом смысле могут отравлять нашу жизнь, вызывая болезни с летальным исходом (например, Clostridium botulinum – возбудитель ботулизма) или опосредовано приводя к смертельным случаям (Helicobacter pylori – возможная причина рака ЖКТ). В Российской Федерации состояние воды регламентируются несколькими нормативами в зависимости от предназначения (смотреть таблицу).

Требования к микробиологическим показателям качества воды в Российской Федерации в зависимости от хозяйственной деятельности человека

1. СанПиН 2.1.5.980-00 «Гигиенические требования к охране поверхностных вод»
2. СанПиН 2.1.2.1188-03 «Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества»
3. СанПиН 2.1.4.1175-02 «Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников»
4. СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества»
5. СанПиН 2.1.4.1116-02 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества»

Оценка качества по микробиологическим показателям сводится к определению в объекте доли микроорганизмов, связанных с человеком и его продуктами жизнедеятельности.

Прежде всего, определим единицы измерения количества микробов. КОЕ/мл (колониеобразующие единицы) – количество жизнеспособных микробных клеток в миллилитре. Если производится оценка вирусных частиц в среде, то указывается БОЕ/мл (бляшкообразующие единицы) – количество вирусных частиц в миллилитре.

Общие показатели

Общая микробная численность бактерий (ОМЧ) базовый показатель

Выявляет бактерии, потенциально способные причинить вред здоровью. Этот показатель достаточно информативен, так как высокая ОМЧ является индикатором загрязнения органическими соединениями (например, содержащихся в фекалиях) и различными формами азота. С другой стороны, в ОМЧ входят как опасные бактерии (например, высокопатогенный штамм кишечной палочки Escherіchіa colі), так и практически безвредные и повсеместно встречаемые сенные палочки (Bacillus subtillis).

Общие колиформные бактерии (ОКБ) колодцы, скважины, родники

Группу ОКБ формируют бактерии семейства Enterobacteriacea (Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella). Многие представители этой группы относятся к нормальной микрофлоре желудка, поэтому превышение ОКБ может говорить о возможном фекальном загрязнении, связанном с деятельностью человека. Однако в данной группе могут встречаться и свободноживущие микробы, которые не представляют опасности для здоровья.

Термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ) колодцы, скважины, родники

ТКБ – более достоверный индикатор загрязнения продуктами жизнедеятельности. Этот показатель свидетельствует о свежем фекальном загрязнении. В большинстве случаев в этой группе обнаруживается кишечная палочка Escherіchіa colі.

Колифаги колодцы, открытые источники

Колифаги являются вирусами палочки Escherichia coli и рассматриваются эпидемиологами как более чувствительный метод определения загрязнения жидкости микроорганизмами группы кишечной палочки. Вирусные частицы более устойчивы к окружающей среде, чем бактерии, в которых они обитают, поэтому этот показатель качества служит достоверной меткой давнего фекального загрязнения. Содержание колифагов свидетельствует о наличии опасных для человека энтеровирусов в воде.

Рекомендуется проводить исследование этой характеристики в случае, если ранее источник не был проверен, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения воды.

Споры сульфитредукторов бытовые нужды

Спорообразующие клостридии (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani) являются дополнительным микробиологическим показателем фекального загрязнения. Клостридии встречаются в кишечнике, однако при попадании в организм в большом количестве могут вызывать пищевые отравления и смертельные заболевания, в том числе, ботулизм. В отличие от относительно неустойчивых ОКБ и ТКБ, споры клостридий могут сохраняться долгое время, поэтому этот микробиологический показатель, как и колифаги, свидетельствует о наличии давнего загрязнения. Относительно высокая устойчивость позволяет использовать споры в качестве индикатора эффективности проведения водоподготовки (хлорирования, озонирования и т.п.).

Определение этого микробиологического показателя качества воды рекомендуется проводить при наличии посторонних запахов и образовании чёрного налёта на трубах, а также для оценки эффективности методов дезинфекции источников и систем подачи-распределения жидкости.

Синегнойная палочка бассейны, колодцы, родники

Pseudomonas aeruginosa – распространённый организм, который встречается практически во всех средах, в т. ч. входит в состав микрофлоры кожи. Однако при снижении иммунитета человека и высоком содержании в воде синегнойная палочка может вызывать серьёзные заболевания, поражая лёгкие и почки и приводя к сепсису. Присутствие Pseudomonas aeruginosa в бассейне или ванне является основанием для полной замены содержимого резервуара. Особенность синегнойной палочки – её чрезвычайная устойчивость к нагреванию, дезинфицирующим средствам и антибиотикам.

Золотистый стафилококк бассейны, колодцы, кулеры, родники

Staphylococcus aureus – тесно связанная с человеком бактерия, которая в основном образует колонии на коже, половых органах, респираторном и желудочно-кишечном трактах. Как и синегнойная палочка, золотистый стафилококк встречается у здоровых людей, однако может вызвать развитие болезни при ослаблении иммунитета.

Возбудители кишечных инфекций специфические показатели

В действующих нормативных документах не прописаны конкретные возбудители кишечных инфекций. В эту группу входят микроорганизмы, заражение которыми происходит через жидкие среды (Escherichia, Shigella, Vibrio, Salmonella). Процесс определения этого параметра трудоёмок и требует специальной квалификации микробиолога.

Микробиологические показатели качества воды, не регулируемые СанПиН

Развитие и удешевление технологий и новых методов приводит, с одной стороны, к расширению контролируемых параметров, с другой, к выбору более конкретных микроорганизмов-показателей. Например, руководство ВОЗ рекомендует использовать в качестве индикатора фекального загрязнения наличие кишечной палочки (Escherіchіa colі), а не ОКБ и ТКБ. В странах ЕС помимо палочки определяют наличие энтерококков – специфичной группы микроорганизмов обитателей кишечника человека. Ниже приведены группы микроорганизмов, которые имеют индикаторное значение при оценке микробиологического качества воды.

Энтерококки колодцы, скважины, родники

Enterococcus spp. – широкая группа микроорганизмов, проживающая в кишечнике человека. Наряду с золотистым стафилококком энтерококки являются причиной внутрибольничных инфекций, вызывают у человека (менингит, эндокардит). Ввиду более высокой устойчивости этих микроорганизмов к засолению и температуре, по сравнению с ТКБ, энтерококки – более надежный индикатор фекального загрязнения морей и солёных озёр. Согласно нормативу ЕС, эта группа не должна обнаруживаться в 250 мл. Согласно законодательству США, при превышении содержания Enterococcus spp. 35 КОЕ / 100 мл вводится запрет на купание людей.

Условно-патогенные дрожжи и микромицеты колодцы, родники, поверхностные воды

К условно-патогенным дрожжам и микромицетам (плесени) относят большую неоднородную группу грибных организмов. В неё входят Candida albicans и Cryptococcus neoformans, которые вызывают оппортунистические заболевания, в т. ч. грибковые заболевания кожи и молочницу. Другие организмы-микромицеты (Cladosporium cladosporioides, Aspergillus niger) усиливают аллергические реакции, а иногда вызывают их. Особенно опасны плесневые грибы (Penicillium spp., Aspergillus spp., Fusariam spp., Alternaria spp. and Claviceps spp), образующие канцерогенные микотоксины (патулин, афлотоксин). Исследователи из Европейского союза пришли к выводу, что водопроводная вода не является распространителем микотоксинов, однако в стоячих источниках (например, накопительных резервуарах) могут создаться условия для благоприятного развития грибов. В некоторых странах ЕС содержание грибов строго регламентируется, например, в Швеции в питьевой воде их не может быть более 100 КОЕ / 100 мл.

Сине-зелёные водоросли (цианобактерии) бытовые нужды, воды для купания, кормление животных

Микроорганизмы, содержащие зелёный пигмент хлорофилл – обитатели богатых питательными элементами стоячих водоемов. Сами микроорганизмы не заражают человека, но синтезируют и выделяют в среду цианотоксины, вызывающие поражение внутренних органов млекопитающих: гепатотоксины (Microcystis, Anabaena, Oscillatoria, Nodularia, Nostoc, Cylindrospermopsis и Umezakia), нейротоксины (Aphanizomenon и Oscilatoria), почечные токсины (Cylindroapermopsis raciborski).

Таким образом, микробиологические показатели качества воды отражают несколько важных показателей:

1. Общее загрязнение микроорганизмами источника воды (ОМЧ).
2. Наличие фекального загрязнения и продуктов жизнедеятельности (ОКБ, ТКБ, колифаги, сульфитредукторы, энтерококки).
3. Возможное наличие энтеровирусов (колифаги).
4. Наличие потенциально опасных микроорганизмов (золотистый стафилококк, синегнойная палочка, условно-патогенные дрожжи, энтерококки, сульфитредукторы).
5. Наличие потенциальных продуцентов микотоксинов и цианотоксинов (грибы и цианобактерии).
6. Наличие патогенных микроорганизмов (Shigella, Vibrio, Salmonella).