Методика посева испражнения на дисбактериоз
Посев кала на дисбактериоз – бактериологическое исследование фекалий, позволяющее определить состояние кишечной микрофлоры. Это наиболее распространенный и доступный метод диагностики дисбактериоза кишечника у детей и взрослых.
Общее представление об исследовании
Образец кала, доставленный в лабораторию, разводят физиологическим раствором, обрабатывают на центрифуге и высевают на специальные питательные среды-агары. Затем чашки со средами ставят в термостат, где создаются благоприятные условия для роста и размножения микроорганизмов. Через 5-7 дней оценивают результат:
- определяют видовой состав микроорганизмов, выросших на питательных средах;
- подсчитывают количество колоний бактерий;
- при выявлении патогенной флоры проводят тест на чувствительность к бактериофагам и антибиотикам.
Как правильно сдавать анализ?
Для получения достоверного результата разработаны рекомендации по подготовке к процедуре, сбору и транспортировке биологического материала.
Подготовка к исследованию
Подготовку к сдаче анализа начинают за 72 часа:
- исключают из рациона острое, алкогольные напитки;
- по согласованию с врачом отменяют медикаменты, которые могут повлиять на результаты исследования: слабительные (таблетки и свечи), препараты железа и висмута, антибиотики, пробиотики;
- запрещено ставить клизмы;
- рентгенологические исследования кишечника с барием переносят на другое время.
Подготовка тары
Кал для бактериологического анализа собирают в стерильную ёмкость, которую нужно подготовить заранее:
- приобрести в аптеке специальный пластиковый контейнер с ложечкой для сбора фекалий;
- взять стеклянную баночку объемом 80-100 мл (например, от детского питания), простерилизовать ее в микроволновой печи примерно 3-5 минут, крышку прокипятить;
- в некоторых частных лабораториях выдают набор для анализа на дисбактериоз, в который входит ёмкость с питательной средой-консервантом, ложечка для сбора кала, перчатки.
Сбор материала
Кал на дисбактериоз собирают утром после пробуждения. Если не получается сходить в туалет после ночного сна, уточните в лаборатории время приёма анализов. Как правило, это первая половина дня.
- Подготовьте место для сбора кала: возьмите судно, горшок или подкладную клеёнку, чисто вымойте и вытрите насухо. Запрещено собирать фекалии из унитаза. У маленьких детей допускается использовать пеленку или памперс.
- Перед дефекацией помочитесь в унитаз. Кал не должен контактировать с мочой.
- После дефекации возьмите подготовленную заранее тару, наденьте стерильные резиновые перчатки и ложечкой соберите материал из разных участков. Старайтесь, чтобы ложечка не касалась судна. Для проведения исследования требуется не менее 5 г фекалий – это комок размером с грецкий орех, в случае жидкого стула – уровень высотой 1,5-2 см.
- Закройте крышку тары.
- Подпишите на баночке свою фамилию, инициалы и дату рождения.
Сроки и условия хранения кала
Основные обитатели кишечника являются анаэробами, поэтому погибают под действием кислорода. Для получения достоверного результата собранный кал должен быть доставлен в лабораторию в течение 2 часов. Максимально допустимое время хранения биоматериала при температуре 4-8 °С составляет 6 часов. До отправки в лабораторию поставьте ёмкость в холодильник. Для транспортировки используйте хладагенты.
Расшифровка результатов
В кишечнике живёт более 400 видов бактерий. Примерно 20 из них имеют клиническое значение. В бланке результата анализа указывают основные микроорганизмы и их количество на 1 г биоматериала. Единица измерения – КОЕ/г.
Нормальные бактерии
Микроорганизмы этой группы составляют до 98% всех кишечных бактерий. Они участвуют в переваривании пищи, синтезе витаминов, сдерживают рост патогенной микрофлоры. Нормальные бактерии входят в состав препаратов-пробиотиков, которые назначают для коррекции дисбактериоза.
- бифидобактерии – 108 – 1010;
- лактобактерии – 106 – 108;
- типичные кишечные палочки – 106 – 108.
Условно-патогенные бактерии
Условно-патогенная флора присутствуют в каловых массах в небольшом количестве. Бактерии расщепляют компоненты пищи, стимулируют работу иммунной системы. Превышение допустимых норм нарушает работу пищеварительного тракта, провоцирует аллергические реакции.
- кишечные палочки лактозонегативные – не более 105;
- бактерии рода протей – не более 102;
- энтерококки – 106 – 107;
- дрожжеподобные грибы – не более 104.
Патогенные бактерии
Эти микроорганизмы вызывают инфекционные заболевания. У здоровых людей патогенные бактерии в каловых массах отсутствуют.
- сальмонеллы;
- шигеллы;
- золотистый стафилококк;
- синегнойная палочка;
- гемолитические кишечные палочки.
При выявлении патогенного микроорганизма указывают его вид и чувствительность к бактериофагам и антибиотикам.
Чтобы отличить истинный дисбактериоз от кратковременных дисбиотических реакций, посев кала назначают дважды с интервалом в 1 неделю. При стойких изменениях микробиоценоза кишечника результаты обоих анализов будут одинаковыми. Врач сопоставит полученные данные с клиническими проявлениями и определит дальнейшую тактику ведения пациента.
Источник
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Материал (кал) на кишечный дисбактериоз собирается до начала лечения антибактериальными и химиотерапевтическими препаратами. Для исследования собирают свежевыделенный кал.
За 3 – 4 дня до исследования отменить приём слабительных препаратов, касторового и вазелинового масла и прекратить введение ректальных свечей. Кал, полученный после клизмы, а также после приёма бария (при рентгеновском обследовании) для исследования непригоден.
До сбора анализа помочитесь в унитаз, далее путём естественной дефекации в подкладное судно соберите испражнения (следить, чтобы не попала моча). Подкладное судно предварительно обрабатывается любым дезинфицирующим средством, тщательно промывается проточной водой несколько раз и ополаскивается кипятком.
Кал собирается в чистый, одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой (его можно получить в любом медицинском офисе ИНВИТРО) в количестве не более 1/3 объёма контейнера.
Материал доставляется в лабораторию в течение 3 часов с момента сбора анализа. Желательно в течение указанного времени материал хранить в холоде (для этого можно использовать хладопакет или обложить контейнер кубиками льда, приготовленными заранее).
На контейнере необходимо указать вашу фамилию, инициалы, дату рождения, дату и время сбора материала, запись должна быть сделана разборчивым почерком. В направительном бланке обязательно должен быть указан диагноз и дата начала заболевания, сведения о приёме антибиотиков. При взятии материала необходимо соблюдать стерильность.
По возможности сбор материала на исследование должен осуществляться до назначения антибиотиков (если невозможно, то не ранее, чем через 12 часов после отмены препарата).
Условия, соблюдение которых обязательно:
- не допускается замораживание;
- не допускается длительное хранение (более 5 – 6 часов);
- не пригодны никакие транспортные среды, кроме указанной;
- не допускается неплотно закрытый контейнер;
- не подлежит исследованию биоматериал, собранный накануне.
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Информация проверена экспертом
Лишова Екатерина Александровна
Высшее медицинское образование, опыт работы – 19 лет
Поделитесь этой статьей сейчас
Похожие статьи
Ранняя биохимическая диагностика остеопороза
Остеопороз метаболическое заболевание скелета, протекающее длительно и поражающее значительную часть населения, особенно, старших возрастных групп. Помимо заболеваний сердца, инсульта, диабета и онкологических заболеваний, остеопороз одно из наиболее важных, с которыми приходится сталкиваться в клинической практике.
Общий анализ крови
Общий клинический анализ крови без лейкоцитарной формулы и СОЭ: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы
Как правильно подготовиться к лабораторному исследованию
Уважаемые пациенты! Обращаем внимание, что кровь для выполнения лабораторных исследований рекомендуется сдавать утром натощак, после 8 – 12 часового ночного периода голодания. Если у пациента нет возможности прийти в лабораторию утром, кровь следует сдавать после 6 часов голодания, исключив в утреннем приеме пищи жиры.
Источник
Диагноз дисбактериоза устанавливается на основании клинической картины, отсутствия эффекта или ухудшения состояния после применения антибиотиков. Для подтверждения диагноза дисбактериоза кишечника, помимо клинической картины, большое значение имеют данные лабораторных методов (бактериологических и серологических). При этом необходимо повторное обнаружение в посевах кала обильного роста условно-патогенных бактерий, таких как бактерий рода протея, стафилококков, дрожжеподобных грибов, лактозонегативных эшерихий и др.
Методика исследования кала на дисбактериоз. Исследуются испражнения больных (5-10 г), которые собирают в стерильные баночки. Консервант к испражнениям не добавляется. Для сбора испражнений используются горшки, судна и другая посуда, в которую кладется плотная стерильная бумага для защиты материала от возможных следов дезраствора. Собранный материал следует немедленно доставить в лабораторию и до посева хранить в холодильнике, но не более 4 ч. Особенно важно сбор материала проводить до начала антибактериального лечения.
Для выявления анаэробной микрофлоры рекомендуется разводить испражнения физиологическим раствором в 10 раз. Из этого основного разведения делают ряд последующих (1 : 100, 1 : 1000, 1 : 10000, 1 : 100000). Из последнего разведения делают посевы по 0,1 мл на среды Эндо, Левина, Сабуро, Плоскирева, кровяной агар и др. Количество кишечной палочки и других микробов в 1 г фекалий определяют по числу колоний, выросших на соответствующей питательной среде с пересчетом на количество посеянного материала и степень его разведения.
На 5% кровяном агаре учитывают процентные соотношения между колониями, обладающими и не обладающими гемолизирующими свойствами. Палочку протея легко обнаружить в посеве на агаре по Шукевичу (Н-форма) или среде Ресселя с мочевиной – окрашивание в фиолетово-коричневый цвет при индикаторе тимоловый синий с добавлением кислого фуксина. Чашки со средой Сабуро выдерживают в термостате в течение 3-5 дней, затем плотные колонии пересевают в среду с солодовым суслом и также помещают в термостат на 3-4 дня. При исследовании нативного препарата можно видеть длинные или короткие нити мицелия, характерные для патогенных дрожжеподобных грибов.
Для выявления анаэробных бифидобактерий необходимо делать посев на модифицированную среду Блаурококка. Посев фекалий делают в больших разведениях. На среду Блаурококка засевают 1 г фекалий в разведении от 106 до 1011. Посевы ставят в термостат при 37°С на 24 ч. Из посевов, в которых виден ст в виде помутнения всей среды или отдельных колоний, готовят мазки и Рашивают их по Граму. Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах в виде римской цифры V, с несколько утолнными концами подтверждает их принадлежность к бифидобактериям. Выделение чистой культуры бифидобактерий является очень трудоемким и не обязательным, так как определение разведения, в котором их обнаруживают является вполне достаточным для оценки нормального или пониженного содержания в фекалиях.
При описании кишечной микрофлоры обращают внимание на процентные соотношения следующих микроорганизмов:
лактозонегативных энтеробактерий по отношению к общему числу колоний, выросших на среде Эндо;
гемолизирующей кишечной палочки по отношению к общему числу колоний этого микроба на среде Эндо;
кокковых форм (стафилококков и энтерококков) по отношению ко всем выросшим на кровяном агаре колониям;
гемолизируюших кокковых форм к их общему числу на кровяном агаре.
Кроме этого, обязательно отмечается выделение протея, патогенного стафилококка, грибов Candida, синегнойной палочки и др.
Примеры ответов:
Выявлен незначительно выраженный дисбактериоз кишечника, характеризующийся преобладанием гемолитической кишечной палочки (35%) и наличием коагулазоположительного стафилококка.
Выявлен резко выраженный дисбактериоз кишечника, характеризующийся значительным процентом лактозонегативных эшерихий (70%), гемолизирующего энтерококка (63%), наличием патогенного стафилококка и грибов Candida.
При генерализованном дисбактериозе, когда в патологический процесс вовлекаются кроме кишечника другие органы и системы, следует производить бактериологическое исследование не только фекалий, но также крови и мочи. Кроме традиционного бактериологического исследования показана также микроскопия фекального мазка.
В случае подозрения на кандидамикоз лабораторные исследования состоят из следующих этапов:
микроскопическое исследование испражнений и мочи;
изучение культуральных и биохимических свойств выделенных грибов;
постановка серологических реакций и аллергических проб – реакция связывания комплемента с убитой дрожжеподобной вакциной и полисахаридной фракцией из культуры Candida albicans.
Реакция связывания комплемента считается положительной при разведении сыворотки 1:10 и выше. Реакция агглютинации со взвесью живой культуры дрожжеподобного гриба. Эта реакция считается положительной при разведении сыворотки 1:200 и выше. Обнаружение при микроскопическом исследовании нитей псевдомицелия или почкующихся клеток, а также обильный рост колоний гриба Candida на среде Сабуро дает основание предполагать грибковый дисбактериоз.
Содержание микрофлоры кишечника в норме
Наименование микроорганизмов | КОЕ/г фекалий |
Бифидобактерии | 108-1010 |
Лактобактерии | 106-109 |
Бактероиды | 107-109 |
Пептококки и псптострсптококки | 105- 106 |
Эшерихий | 106-108 |
Стафилококки (гемолитические, плазмокоагулируюшие) | Не более 103 |
Стафилококки (негемолитические, эпидермальные, коагулазоотрицательные) | 104-105 |
Стрептококки | 105-107 |
Клостридии | 103-105 |
Эубактерии | 109-10’° |
Дрожжеподобные грибы | Не более 103 |
Условно-патогенные энтеробактерий и нефермеитирующие грамотрицательные палочки | Не более 103-104 |
Состав микрофлоры кишечника здорового человека представлено в таблице в колониеобразующих единицах (КОЕ) на 1 г фекалий.
У большинства больных при дисбактериозе кишечника возникают как количественные, так и качественные изменения нормальной микрофлоры. Дисбактериоз кишечника проявляется повышенным количеством кишечной палочки со слабо выраженными ферментативными свойствами (> 10%), появлением лактозонегативных энтеробактерий (> 5%), гемолизируюших эшерихий и др.
Весьма показательным признаком дисбактериоза также считают снижение способности микрофлоры инактивировать кишечные ферменты – энтерокиназу и щелочную фосфатазу. Обычно в фекалиях здорового человека они присутствуют в весьма незначительных количествах, а у больных с гастроэнтерологической патологией, особенно с заболеваниями кишечника с сопутствующим дисбактериозом, концентрация их резко возрастает.
Исследование индола, летучих фенолов, желчных и карбоновых кислот позволяет косвенно оценить биохимическую активность кишечной микрофлоры.
Дисбактериоз является динамичным процессом, в котором можно условно выделить отдельные этапы развития.
При преобладании в кишечнике бродильных процессов обращают на себя внимание резко кислый запах испражнений, значительное количество крахмальных зерен и переваренной клетчатки. Кал обычно жидкий с примесью пены, реакция кислая. При микроскопическом исследовании мазков кала, окрашенных раствором Люголя, выявляют большое количество клеток крахмала и обильную йодофильную флору.
Для гнилостной диспепсии характерен жидкий или кашицеобразный стул коричневого цвета со зловонным запахом. Кал имеет щелочную реакцию. При микроскопии в испражнениях обнаруживают остатки непереваренных мышечных волокон.
При копрологическом исследовании для слизистой колики типична примесь к испражнениям трубкообразной или лентообразной слизи, что обусловлено ее гиперсекрецией и спастическим состоянием толстой кишки. В слизи большое количество эозинофилов, кристаллов Шарко-Лейдена, в ряде случаев – много кристаллов кислого кальция фосфата.
Жидкие испражнения отражают гиперсекрецию в толстой кишке. При ложном поносе стул всегда водянистый или кашицеобразный, обычно с признаками бродильной диспепсии. Копрограмма при кишечном дисбактериозе нередко характеризуется повышенным содержанием лейкоцитов, часто одновременно с эритроцитами. Реакция на белок может быть положительной (определяется методом Гауфона).
Для запора типично исчезновение клетчатки или крахмала и вместе с тем отсутствие йодофильной флоры. При нарушениях пищеварения в илеоцекальном отделе кишки, обусловленных дисбактериозом, кал чаще не оформлен, золотисто-желтого цвета, запах кислый, реакция слабокислая. При копрологическом исследовании обнаруживается в большом количестве перевариваемая клетчатка и внутриклеточный крахмал, обильная йодофильная флора, в незначительном числе измененные мышечные волокна и расщепленный жир.
При дистальном колите кал не оформлен, содержит слизь, нередко в большом количестве, в нем много лейкоцитов, клеток кишечного эпителия.
Дискинетический синдром характеризуется фрагментами кала, окутанными слизью.
Синдром недостаточности всасывания (синдром мальабсорбции) – клинический симптомокомплекс, обусловленный нарушением питания организма вследствие расстройств процессов абсорбции в тонкой кишке. Чаще развивается при патологии тонкой кишки, в том числе и при дисбактериозе. Кроме того, синдром может быть связан с нарушением гидролиза пищевых веществ в результате снижения продукции пищеварительных ферментов в желудке и поджелудочной железе с уменьшением всасывательной поверхности кишки при ее резекции, лимфогранулематозе и других патологических процессах в ней. Синдром мальабсорбции характеризуется расстройством обмена веществ – жирового, углеводного, белкового, водно-солевого, а также нарушением обмена витаминов.
Источник