Микробиологический посев кала на кишечную микрофлору

Посев кала на дисбактериоз – бактериологическое исследование фекалий, позволяющее определить состояние кишечной микрофлоры. Это наиболее распространенный и доступный метод диагностики дисбактериоза кишечника у детей и взрослых.

Общее представление об исследовании

Образец кала, доставленный в лабораторию, разводят физиологическим раствором, обрабатывают на центрифуге и высевают на специальные питательные среды-агары. Затем чашки со средами ставят в термостат, где создаются благоприятные условия для роста и размножения микроорганизмов. Через 5-7 дней оценивают результат:

• определяют видовой состав микроорганизмов, выросших на питательных средах;
• подсчитывают количество колоний бактерий;
• при выявлении патогенной флоры проводят тест на чувствительность к бактериофагам и антибиотикам.

Как правильно сдавать анализ?

Для получения достоверного результата разработаны рекомендации по подготовке к процедуре, сбору и транспортировке биологического материала.

Подготовка к исследованию

Подготовку к сдаче анализа начинают за 72 часа:

• исключают из рациона острое, алкогольные напитки;
• по согласованию с врачом отменяют медикаменты, которые могут повлиять на результаты исследования: слабительные (таблетки и свечи), препараты железа и висмута, антибиотики, пробиотики;
• запрещено ставить клизмы;
• рентгенологические исследования кишечника с барием переносят на другое время.

Подготовка тары

Кал для бактериологического анализа собирают в стерильную ёмкость, которую нужно подготовить заранее:

• приобрести в аптеке специальный пластиковый контейнер с ложечкой для сбора фекалий;
• взять стеклянную баночку объемом 80-100 мл (например, от детского питания), простерилизовать ее в микроволновой печи примерно 3-5 минут, крышку прокипятить;
• в некоторых частных лабораториях выдают набор для анализа на дисбактериоз, в который входит ёмкость с питательной средой-консервантом, ложечка для сбора кала, перчатки.

Сбор материала

Кал на дисбактериоз собирают утром после пробуждения. Если не получается сходить в туалет после ночного сна, уточните в лаборатории время приёма анализов. Как правило, это первая половина дня.

1. Подготовьте место для сбора кала: возьмите судно, горшок или подкладную клеёнку, чисто вымойте и вытрите насухо. Запрещено собирать фекалии из унитаза. У маленьких детей допускается использовать пеленку или памперс.
2. Перед дефекацией помочитесь в унитаз. Кал не должен контактировать с мочой.
3. После дефекации возьмите подготовленную заранее тару, наденьте стерильные резиновые перчатки и ложечкой соберите материал из разных участков. Старайтесь, чтобы ложечка не касалась судна. Для проведения исследования требуется не менее 5 г фекалий – это комок размером с грецкий орех, в случае жидкого стула – уровень высотой 1,5-2 см.
4. Закройте крышку тары.
5. Подпишите на баночке свою фамилию, инициалы и дату рождения.

Сроки и условия хранения кала

Основные обитатели кишечника являются анаэробами, поэтому погибают под действием кислорода. Для получения достоверного результата собранный кал должен быть доставлен в лабораторию в течение 2 часов. Максимально допустимое время хранения биоматериала при температуре 4-8 °С составляет 6 часов. До отправки в лабораторию поставьте ёмкость в холодильник. Для транспортировки используйте хладагенты.

Расшифровка результатов

В кишечнике живёт более 400 видов бактерий. Примерно 20 из них имеют клиническое значение. В бланке результата анализа указывают основные микроорганизмы и их количество на 1 г биоматериала. Единица измерения – КОЕ/г.

Нормальные бактерии

Микроорганизмы этой группы составляют до 98% всех кишечных бактерий. Они участвуют в переваривании пищи, синтезе витаминов, сдерживают рост патогенной микрофлоры. Нормальные бактерии входят в состав препаратов-пробиотиков, которые назначают для коррекции дисбактериоза.

• бифидобактерии – 108 – 1010;
• лактобактерии – 106 – 108;
• типичные кишечные палочки – 106 – 108.

Условно-патогенные бактерии

Условно-патогенная флора присутствуют в каловых массах в небольшом количестве. Бактерии расщепляют компоненты пищи, стимулируют работу иммунной системы. Превышение допустимых норм нарушает работу пищеварительного тракта, провоцирует аллергические реакции.

• кишечные палочки лактозонегативные – не более 105;
• бактерии рода протей – не более 102;
• энтерококки – 106 – 107;
• дрожжеподобные грибы – не более 104.

Патогенные бактерии

Эти микроорганизмы вызывают инфекционные заболевания. У здоровых людей патогенные бактерии в каловых массах отсутствуют.

• сальмонеллы;
• шигеллы;
• золотистый стафилококк;
• синегнойная палочка;
• гемолитические кишечные палочки.

При выявлении патогенного микроорганизма указывают его вид и чувствительность к бактериофагам и антибиотикам.

Чтобы отличить истинный дисбактериоз от кратковременных дисбиотических реакций, посев кала назначают дважды с интервалом в 1 неделю. При стойких изменениях микробиоценоза кишечника результаты обоих анализов будут одинаковыми. Врач сопоставит полученные данные с клиническими проявлениями и определит дальнейшую тактику ведения пациента.

Бактериологический посев кала (бак посев) – это биологическое исследование испражнений, которое определяет состав и примерное количество микроорганизмов, обитающих в кишечнике человека. Для этого используется внесение частиц кала на разные питательные среды, на которых растут 3 группы микроорганизмов: нормальные (необходимы для переваривания пищи), условно-патогенные (изменяют свои свойства нормальных) и патогенные (болезнетворные). Одновременно можно установить чувствительность болезнетворных бактерий и к антибиотикам и бактериофагам.

Группы микроорганизмов кишечника:

• Нормальные бактерии – бифидобактерии, молочнокислые (лактобактерии) и кишечная палочка, имеющая типичные свойства, бактероиды;
• Условно патогенные бактерии – энтеробактерии, клостридии, анаэробные и неферментирующие бактерии;
• Патогенные бактерии – атипичная кишечная палочка, имеющая гемолитические или ферментативные свойства, стафилококки, грибки рода кандида (дрожжевые), шигеллы, патогенные сальмонеллы, протей, синегнойная палочка.

Что показывает анализ?

Бакпосев кала устанавливает состав и количество кишечной микрофлоры. Другое название исследования – кал на дисбиоз или кал на кишечную группу.

Анализ состоит из двух этапов. На первом специально приготовленный мазок рассматривают в микроскоп, при этом обнаруживаются бактерии. Их помещают в питательные среды, которые стандартизованы (проще говоря, давно известно, какие микроорганизмы в каких средах развиваются лучше всего).

Лабораторную посуду со средами и посевом помещают в термостат, имитирующий температуру и влажность человеческого тела. В термостате среды находятся до 7 дней. Время необходимо для того, чтобы все внесенные бактерии успели размножиться и образовать колонии (колония – потомки одной бактерии). По истечении этого срока подсчитывают количество выросших бактерий и колоний.

Некоторые среды изначально содержат антибиотики или бактериофаги. Сравнивая количество колоний, выросших на обычной питательной среде и содержащей антибиотики, можно узнать, какие лекарства способны существенно уменьшить рост бактерий. Так определяется чувствительность к антибиотикам.

По результату можно судить о том, бактерии какой группы преобладают в кишечнике конкретного человека и насколько изменена нормальная микрофлора.

Как правильно сдавать анализ?

От качества сбора материала зависит достоверность анализа, поэтому все пункты нужно тщательно выполнять. Смысл всех действий – стерильность, чтобы в материал не попали бактерии, всегда находящиеся во внешней среде и не имеющие отношения к человеку.

Подготовка к сдаче исследования

При подготовке требуется соблюдать такие условия:

• За 2-е суток прекратить прием препаратов, содержащих висмут (Де-нол, Викаир, Викалин, Вентрисол, Бисмофальк и подобных) и железо (Тардиферон, Ферроплект, Феррум-лек);
• дождаться естественного акта дефекации, при необходимости перенеся дату сдачи материала;
• если какие-то лекарства нужно принимать ежедневно, сообщить об этом врачу и лаборанту.

Чего делать ни в коем случае нельзя:

• использовать слабительные, их применение искажает результат;
• использовать свечи, даже глицериновые;
• ставить клизму, микроклизмы (Микролакс, Норгалакс) в том числе.

Подготовка тары

Для сбора кала в аптеках имеются разовые стерильные контейнеры с ложечкой. Самый дорогой стоит до 10 рублей, есть и намного дешевле. Контейнер не должен содержать ни жидкости, ни консерванта (провизору просто сказать, что для анализа на дисбиоз). Хорошие лаборатории выдают такие контейнеры при обращении, внося стоимость в цену анализа.

Использовать другую посуду – баночки из-под детского питания и прочее – нежелательно, так как даже кипячение не обеспечивает стерильность. В домашних условиях добиться стерильности, необходимой для лабораторной посуды, невозможно.

Сбор материала

1. Для сбора материала использовать чистое сухое судно – для лежачих. Для ходячих – поместить в унитаз новый полиэтиленовый пакет так, чтобы пакет закрывал всю поверхность. Для детей – подстелить чистую пеленку, с подгузника брать нельзя (подгузник и тем более памперс впитывает жидкость).
2. После дефекации открыть контейнер, достать ложечку (прикреплена к крышке), ничего не касаясь внутри контейнера.
3. Собрать ложечкой материал из середины, не касаясь краев.
4. Заполнить контейнер не больше чем на одну треть.
5. Завинтить крышку.
6. Нанести на контейнер четкую надпись: фамилия и инициалы, год рождения, дата и время сбора материала (некоторые лаборатории требуют номер направления).

Как долго можно хранить собранный материал?

Контейнер с материалом должен быть доставлен в лабораторию в течение 3-х часов. Если привезти позже, лаборатория просто не примет, поскольку анализ не может быть достоверным.

В пути желательно избегать попадания прямого солнечного света и перегревания. Лучше всего поместить контейнер, обернутый полиэтиленовым пакетом, в сумку или портфель. Нельзя ставить его на переднюю панель автомобиля, держать у печки или носить под шубой. Зимой достаточно той температуры, что есть в сумке или портфеле, укутывать не надо.

Некоторые лаборатории допускают прием материала через 8 часов, если он хранился в холодильнике. Это нужно уточнить в лаборатории.

Расшифровка показателей

Полную оценку дает врач, приведенные ниже данные – ориентировочные.

Бланк каждой лаборатории содержит нормальные средние или референсные значения, с ними сравнивают полученные показатели.

Референсные значения находятся в пределах:

• типичная кишечная палочка – от 107 до 108;
• палочки лактозонегативные – менее 105;
• кишечная палочка гемолитическая – отсутствует;
• протей – менее 102;
• энтеробактерии условно-патогенные – менее 104;
• бактерии неферментирующие – до 104;
• энтерококки – до 108;
• гемолитический стафилококк – отсутствует;
• стафилококки прочие (сапрофитные) – до 104;
• бифидобактерии – до 1010;
• лактобактерии – до 107;
• бактероиды (нормальные обитатели) – до 107;
• клостридии – не более 105;
• дрожжевые грибки – менее 103.

Гастроэнтерологи выделяют 3 степени тяжести дисбиоза:

• Первая степень. Снижение количества лакто- и бифидобактерий на 1-2 порядка в сочетании с появлением кишечной палочки измененных форм (гемолитические, лактозонегативные);
• Вторая степень. Значительное повышение количества условно-патогенных бактерий (до 105 колониеобразующих на грамм);
• Третья степень. Высокое содержание условно-патогенных и болезнетворных бактерий.

Принципы лечения нарушений кишечной микрофлоры

Конкретное лечение назначает врач в зависимости от клинической картины и результатов обследования. Общие принципы такие:

• удаление причины, вызывавшей дисбиоз – отмена антибиотиков или уничтожение инфекционного агента;
• дробное питание отварной протертой пищей;
• исключение алкоголя, жирного и жареного, копченостей и маринадов;
• ежедневное употребление кисломолочных продуктов;
• назначение лекарств для восстановления нормальной микрофлоры: пробиотиков (сухие или сорбированные штаммы бактерий), пребиотиков (питательные вещества для нормальной микрофлоры) и синбиотиков (содержат оба компонента).

Бакпосев кала быстро дает ответ на вопрос, почему нарушено пищеварение и как это исправить.

Определение этиологии ОКИЗ (острого кишечного инфекционного заболевания) и выбор рациональной антибиотикотерапии.

Рациональная терапия дизентерии основана на идентификации её возбудителя – бактерий рода Shigella.

Шигеллы (по имени японского учёного К. Шиги) грамотрицательные неподвижные неспороносные палочки длиной 23 мкм, шириной 0,6 мкм. По типу обмена аэробы и факультативные анаэробы.Они выделяют токсины, повреждающие эпителий кишечника, усиливают секрецию жидкости и солей в просвет кишки. Шигеллы быстро изменяют свою чувствительность к различным антибактериальным препаратам.

Заражение происходит фекально-оральным путём. Для возникновения заболевания достаточно инфицирование менее чем 100 микробными клетками шигелл. Инкубационный период от одних до 7 суток (в среднем 2 – 3 суток), но может сокращаться до 12 и даже до 2 часов. Заболевание начинается остро. Возникает общая интоксикация, повышается температура тела, появляются схваткообразные боли в животе (тенезмы), усиливающиеся перед дефекацией. В последние годы отмечается резкое увеличение количества больных тяжёлой дизентерией и её хроническими формами. Диагноз хронической дизентерии устанавливается в случае, если заболевание продолжается более 3 месяцев.

Лабораторное подтверждение дизентерии проводится бактериологическим и серологическим методами. Бактериологический метод (высев шигелл из испражнений) при 3-кратном исследовании обеспечивает подтверждение диагноза у большинства больных. Это обеспечивает дифференциальную диагностику с другими острыми диарейными заболеваниями – сальмонеллёзом, эшерихиозом, кишечным иерсиниозом, холерой, амёбиазом.

Сальмонеллы (по имени американского исследователя D. Salmon) – возбудители энтероколитов или пищевой токсикоинфекции, а также генерализованных тифопаратифозных инфекций. Мелкие грамотрицательные палочки, подвижны за счет жгутиков. По типу метаболизма – факультативные анаэробы. Факторы патогенности – термостабильные эндотоксины, термолабильный энтеротоксин, микрокапсулы, белки наружной мембраны клеточной стенки (способствуют адгезии на энтероцитах тонкой кишки). Сальмонеллезы – зоонозно-антропонозные инфекции, могут быть причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллы могут размножаться при 4-6 град. С и длительно сохраняться в замороженных продуктах. Брюшной тиф и др. сальмонеллезы являются инфекциями с фекально-оральным механизмом передачи, основной путь передачи – пищевой, главным образом через продукты животного происхождения. Заболевание протекает в форме гастроэнтерита, гастроэнтероколита, гастрита (без диареи), тифоподобной форме и септической форме. После перенесенного заболевания в 20% случаев возникает бактерионосительство, которое может продолжаться пожизненно. Лабораторная диагностика сальмонеллеза основана на выделении возбудителя при посеве различных видов биоматериала от больного (фекалии, рвотные массы, желчь, кровь при септических формах) при микробиологическом исследовании.

Выделяемые возбудители: шигеллы, сальмонеллы.

Обращаем внимание на необходимость предварительного приобретения стерильной пробирки с питательной средой, используемой при взятии биоматериала, в любом медицинском офисе ИНВИТРО.

Литература

1. Богомолов Г.И. Дифференциальная диагностика инфекционных болезней. М. 2000. 231 стр.
2. Энциклопедия клинических лабораторных тестов под ред. Н.У. Тица. Издательство “Лабинформ” – М. – 1997 – 942 с.
3. Руководство по медицинской микробиологии под.ред.А.С.Лабинской, Москва, 2010г.
4. Методики клинических лабораторных исследований под ред.В.В.Меньшикова, т.3, Москва, 2009г.
5. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, Л.Б.Борисов, Москва, 2005г.
6. Gorbach S. Et al./ Infectious Diseases (3rd edition)/2003/ Lippincott Williams & Wilkins/2700 ps.
7. Jacobs D. et al. Laboratory test handbook/ Lexi-Comp./2002 – 1534 p.