Мясо пептонный агар для кишечной палочки
Для выращивания микроорганизмов, использующих органические формы азота, часто употребляют мясо-пеп-тонные среды мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар и мясо-пептонную желатину. [c.58]
Культуральные и физиологические признаки характер роста на мясо-пептонном бульоне, рост на косом мясо-пептонном агаре и специальном агаре, рост на мясо-пептонной желатине при посеве уколом на молочных и картофельных средах способность образовывать индол тип колоний (окраска, контуры, строение края и др.) отнощение бактерий к различным источникам углерода (глюкозе, лактозе, мальтозе, сахарозе, манниту, крахмалу, фенолу, различным альдегидам, спиртам и другим органическим соединениям), к различным источникам азота (пептону, аспарагину, мочевине, азоту аммонийному, нитратному) определяется также денитрифицирующая активность (восстановление нитратов до нитритов или молекулярного азота) отнощение к кислороду. [c.66]
Определение общего числа бактерий производится путем счета колоний на мясо-пептонном агаре после выращивания в течение 48 ч при 20 —22° С. Подсчет колоний на твердой питательной среде [c.286]
В лабораториях часто применяют природные питательные среды. Для культивирования некоторых микроорганизмов используют мясной отвар в виде мясо-пептонного бульона или мясо-пептонного агара, солодовое сусло, молоко и т. п. [c.53]
Культуральные признаки характер роста культуры на мясо-пептонном бульоне (или другой жидкой среде) характер роста колоний на мясо-.пептонном агаре и других плотных средах (сусло-агаре и агаризованной синтетической среде). [c.81]
Мясо-пептонный агар с глюкозой (5— 10 г глюкозы на 1 л МПА). [c.180]
Определение общего количества бактерий в молоке. Вначале готовят разведения (10 — Ю ), для чего из отобранной пробы стерильной пинеткой берут 1 мл молока и переносят в пробирку, содержащую 9 мл стерильной водопроводной воды пипетку неоднократно споласкивают водой, находящейся в пробирке, и больше не используют. Пробирку взбалтывают 1 мин и таким образом получают разведение 10 Ч Затем готовят последующие разведения. При обесцвечивании молока до 20 мин делают глубинный посев из разведений 10 , 10 и 10 . Для этого берут отдельной стерильной пипеткой по 1 мл суспензии и вносят в стерильные чашки Петри (в двух- или трехкратной повторности). При обесцвечивании молока после 20 минут посев делают из разведений 10 , 10 , 10 . В чашки с суспензией вносят расплавленный и охлажденный до 45—50°С мясо-пептонный агар. После перемешивания суспензии с агаром чашки Петри с посевом помещают в термостат при 28—30°С. После трехдневной инкубации проводят подсчет колоний бактерий в чашках. Количество дрожжей и плесеней подсчитывают на 4-й день. Число колоний умножают на степень разведения и выводят среднее арифметическое из трех чашек. Таким образом определяют численность бактерий в 1 мл молока. [c.206]
Петри. На крышке чашки восковым карандашом отмечают разведения. Затем в каждую чашку с суспензией вливают расплавленный столбик мясо-пептонного агара, заранее приготовленный и разлитый в пробирки (2/з объема их) из расчета один столбик на чашку. Температура расплавленного агара должна быть примерно 45°С. Ее устанавливают следующим образом пробирку с расплавленным агаром прикладывают к щеке, если щека выдерживает температуру, столбик агара можно вылить в чашку Петри, Осторожным круговым вращением чашки агар перемешивают с суспензией. Чашки с застывшим агаром переворачивают вверх дном (чтобы избежать попадания на поверхность агара конденсационной воды с крышки), и помещают в термостат при 28—30°С. [c.68]
Чистоту культуры проверяют также посевом на ряд питательных сред, в том числе на мясо- пептонный агар. Однородность характера роста колонии свидетельству- ет о чистоте выделенной культуры микроорганизмов. Набор сред определяется особенностями выделяемых микроорганизмов и их возможных спутников. [c.80]
Среда 8. Мясо-пептонный агар и сусло-агар 1 1. Стерилизуют при. 0,5 атм в течение 30 мин. [c.199]
Одновременно с определением клубеньковых бактерий устанавливают количество посторонних микроорганизмов посевом на мясо-пептонный агар. [c.189]
Мясо-пептонный агар [c.66]
Для учета посторонних микробов в культурах быстрорастущих клубеньковых бактерий берут по 1 мл суспензии из разведения 10 , в культурах медленнорастущих — из разведения 10″ переносят в две параллельные чашки Петри и заливают мясо-пептонным агаром (как и в предыдущем случае). После двух суток инкубации при температуре 28—30°С подсчитывают число выросших колоний по приведенной выше формуле. [c.189]
Численность посторонней микрофлоры в азотобактерине устанавливают микроскопированием исходной суспензии и посевом ее по I мл в три параллельные чашки на мясо-пептонном агаре. Колонии посторонних микроорганизмов определяют через двое суток. [c.190]
При микробиологическом анализе молока определяют общую численность бактерий, учитываемых на агаре с гидролизованным молоком, на мясо-пептонном агаре, титр кишечной палочки (соИ-титр) и проводят пробу на редуктазу. [c.205]
Мясо-пептонный агар для учета аэробных сапрофитов Мясо-пептонная желатина для учета аэробных сапрофитов Среда для дифференцировки видов спорообразующих бактерий [c.82]
Состав среды мясо-пептонный агар — 500 мл. [c.82]
Основная (простая, универсальная) Мясо-пептонный бульон Мясо-пептонный агар [c.27]
Оба вида могут расти на мясо-пептонном агаре, но кишечная палочка в этом случае использует вторичный метаболит пеницилла Третий пример — ассоциация аэробных и анаэробных микроорганизмов Представители второй группы начинают расти на среде лишь тогда, когда аэробы снизят концентрацию кислорода до необходимой им величины Следовательно, вторые живут за счет функциональной активности первых, не принося им вреда [c.237]
Последующие посевы производят в зависимости от хода процесса с интервалом через сутки и более. Количество сапрофитных бактерий определяется счетом колоний в посевах на мясо-пептонный агар через 2 суток инкубации при температуре 20°С. [c.67]
Форма колоний в виде чечевичек, лодочек, угловатые и т. п. Штрих на косом мясо-пептонном агаре. Рост отсутствует, слабый, умеренный, обильный. [c.67]
Мясо-пептонный агар (МПА) [c.78]
Приготовляют мясо-пептонный агар с теми отличиями, что содержание агара доводят до 20 г/л (2%) и устанавливают реакцию рН=7,4-н7,6. Мясо-пептонный агар разливают перед стерилизацией в колбы вместимостью по 50 или 100 мл. [c.79]
Мясо-пептонный агар с жиром [c.86]
Из подозрительных колоний делают отсевы (в возможно большем количестве) на скошенный мясо-пептонный агар и короткий пестрый ряд (пробирки с лактозой и глюкозой). Короткий пестрый ряд с успехом можно заменить средой Ресселя, средой с мочевиной или розоловым агаром. Одновременно те же колонии изучают микроскопически (мазок окрашивают по Граму). При наличии материала ставят пробную агглютинацию на предметном стекле со смесью агглютинирующих сывороток в разведении 1 10. [c.151]
Метод агаровых слоев. При исследовании методом агаровых слоев необходимо заранее заготовить 1,5 и 0,7% мясо-пептонный агар. Для подавления воздушной микрофлоры перед разливкой к 1,5% МПА добавляют 0,04% спиртовый раствор генцианвиолета (0,1 мл на 100 мл среды) и разливают ее в чашки по 25—30 мл. [c.161]
Лгар из солодовой вытяжки, лиофилизированный Агар мясо-пептонный Агар соево-триптоновый Агар Чапека [c.642]
Мясо-пептонный агар (МПА). К 1 л мясо-пептонпого бульона прибавляют 15 г агара в волокнах или порошке, нагревают до полного растворения агара, доводят pH до 7,2—7,4, осветляют, фильтруют в горячем виде через ватно-марлевый фильтр н разливают во флаконы или пробирки в количествах, необходимых для испытания, закрывают пробирки ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при температуре 120+2° С (давление 0,11 МПа) в течение 20 мин. [c.282]
Коллекцию культур следует пересевать каждые 2— 3 месяца на свежие питательные среды бактерии и актиномицеты на мясо-пептонный агар, дрожжевые и плесневые грибы на сусло-агар. За 2—3 дня до занятий культуры пересевают в пробирки (бактерии и актиномицеты) или чашки Петри (грибы) из расчета две пробирки каждой культуры и 1—2 чашки Петри на группу студентов в 10—15 челввек. [c.41]
Мясо-пептонный агар (МПА). К 1 л мясо-пептонного бульона добавляют 15—20 г мелко нарезанного агар-агара. Среду нагревают до растворения агара (температура плавления его 100°С, застывания —40°С),уста навливают слабощелочную реакцию среды 20%-ным раствором КагСОз и через воронки разливают в пробирки ( по 10 мл для разливок в чашри — агар столбиком и по 5 мл для получения скошенного, наклонного агара). При разливе агара необходимо следить затем, чтобы края пробирки были сухими, иначе пробки прилипают к стеклу. [c.60]
Мясо-пептонный агар готовят обычным способом, сусло-агар — из 7-баллингового сусла (pH 7,0) и 2% агара. Смешивают МПА и сусло-агар перед посевом и разливают в чашки Петри. [c.142]
Материалы и оборудование. При постановке опыта разные (по качеству) пробы молока, высокие пробирки, цилиндры, метиленовая синь, редуктазник с водой, нагретой до 38—40° С, пробирки со стерильной водопроводной водой, по 9 мл в каждой, стерильные пипетки Мора на 1 мл, пробирки со стерильнйй средой Булира с поплавками, расплавленный мясо-пептонный агар (МПА). [c.208]
Перед исследованием масло в банке расплавляют на водяной бане, нагретой до 40—50°С. Из расплавленного масла, после тщательного перемешивания, стерильной пипеткой берут 1 мл и вносят в пробирку с 9 мл стерильной воды, подогретой до 40°С. Из полученного таким образом разведения 10 готовят все последующие (10-2, 10- , 10-, 10- ). Из соответствующих разведений делают высев на элективные среды для учета общего количества бактерий — на агар с гидролизованным молоком или мясо-пептонный агар, для учета протеолити-ческих бактерий на молочный агар, для учета молочнокислых бактерий — на агар с гидролизованным обратом и мелом, для учета количества дрожжей — на сусловый агар со стрептомицином, для учета бродильного титра — на среду Кесслера. [c.212]
Кроме химического анализа сточных вод проводят бактериологический (общее число бактерий сапрофи-тов, растуших на мясо-пептонном агаре, число бактерий oli на среде ЭНДО, некоторые (Ьормы патогенных микроорганизмов), радиологический (определение радиоактивного фона воды и осадков) и гельминтологический (определение количества яиц гельминтов в воде и осадках на разных стадиях очистки) анализы. [c.75]
Непосредственно перед приготовлением среды в стерильную пробирку вносят 0,5 мл фильтрованного 10%-ного раствора фуксина, к которому прибавляют из пипетки 10%-ный водный раствор сернистокислого натрия (безводного КагЗОз) или 20% -ный раствор На250з-7Н20 кристаллической соли до получения ярко-розового окрашивания. Затем 0,5 г химически чистой лактозы растворяют в 2—3 мл стерильной воды и прогревают на кипящей водяной бане, примерно около 5 мин. На 100 мл предварительно расплавленного мясо-пептонного агара добавляют сначала раствор лактозы и все количество фуксина с сульфитом натрия тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Готовый фуксинсульфитный агар по застывании в чашке должен иметь кремовый со слабо-красноватым оттенком цвет. Сульфитную среду следует готовить по мере надобности. [c.79]
Сусловый агар готовится на неохмеленном сусле 7° Баллинга и смешивается в горячем состоянии с равным объемом расплавленного мясо-пептонного агара. Реакцию среды доводят до рН=7,1-ь7,2. Среду разливают небольшими порциями и стерилизуют. [c.82]
Бактериальная взвесь приготовляется тем же способом., что и при прямом методе, затем взвесь тщательно взбалтывают и высеивают на мясо-пептонном агаре или спецагаре в разведении 10 , 10 , 10 . Для каждого разведения берут по две чашки. Инкубацию посевов производят в термостате при температуре 20—22° С. [c.96]
Общее количество микробов в воде ( микробное число ) устанавливается ь млио количеству колоний, вырастающих на 1,5% мясо-пептонном агаре (при глубинном посеве) при температуре 37°С в течение 24 часов. Если исследуется вода открытых [c.120]
Для определения общего количества микробов эасе аются такие объемы воды, которые давали бы рост на мясо-пептонном агаре в чашке не менее 30 и не более 300 колоний. Эти объемы могут быть установлены предваритёльно лишь опытным rIyteм. [c.123]
Источник
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
(для просмотра изображений в полном размере, щелкните по ним правой кнопкой мыши и выберите пункт “ОТКРЫТЬ ИЗОБРАЖЕНИЕ В НОВОЙ ВКЛАДКЕ”)
ПИТАТЕЛЬНЫЙ АГАР используют для выращивания бактерий, содержит гидролизат кильки, экстракт дрожжей, агар, хлорид натрия и дистиллированную воду. Растворяют ингредиенты, кипятят, фильтруют, стерилизуют (120 гр. С 20 минут). Затем разливают в стерильные пробирки или чашки Петри. На чашке с агаром видны разнообразные колонии микробов, выросшие в при посеве воздуха.
СМЕСЬ БАКТЕРИЙ
На чашке с МПА видны различные колонии бактерий, отличающиеся по цвету, форме, размерам, прозрачности…. Культуральные свойства Escherichia coli: круглые с ровными краями, гладкие, влажные, слизистые, полупрозрачные колонии.
ЖЕЛТОЧНО-СОЛЕВОЙ АГАР ЧИСТОВИЧА – селективная среда, предназначенная для культивирования стафилококков. Содержит питательный агар, желток куриного яйца, повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков и обеспечивают элективность среды для данных микробов. Среда позволяет дифференцировать лецитиназопозитивные стафилококки, вокруг колоний которых образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком.
КРОВЯНОЙ АГАР питательная среда для выявления гемолитических свойств бактерий. К расплавленному остуженному (до 45-50 гр С) питательному агару асептически добавляют 5-10% дефибринированной крови, хорошо перемешивают и сразу же разливают в чашки Петри. Вокруг выросших колоний отчетливо видны прозрачные зоны гемолиза.
СРЕДА ПЛОСКИРЕВА – дифференциально-диагностическая и селективная, способствует лучшему росту некоторых бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерий) и подавляет рост других (кишечная палочка и пр.). Содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Лактозонегативные колонии вырастают бесцветными, лактозопозитивные – красными. На некоторых модификациях среды Плоскирева выявляется еще и способность сальмонелл выделять сероводород: выросшие колонии чернеют.
СРЕДА ЭНДО предназначена для выделения энтеробактерий, обнаружения эшерихий. Состоит из питательного агара, 1% лактозы и индикатора – основного фуксина, обесцвеченного сульфитом натрия. Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте лактозоположительных бактерий их колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные кишечные палочки образуют бесцветные колонии.
СРЕДА ОЛЬКЕНИЦКОГО (ТРЕХСАХРНЫЙ АГАР) предназначена для дифференциации энтеробактерий по способности сбраживать углеводы в присутствии индикатора.
Рост на трехсахарном железосодержащем агаре:
1. Контроль (незасеянная среда)
2. Salmonella серовара Typhimurium
3. Escherichia coli
4. Shigella flexneri
5. Salmonella серовара Typhi
Пептический перевар животной ткани, гидролизат казеина, дрожжевой и мясной экстракты являются источником азотистых веществ, серы, микроэлементов, витаминов группы В и др. Лактоза, сахароза и глюкоза – ферментируемые субстраты. Тиосульфат натрия в сочетании с ионами железа являются индикатором на сероводород, феноловый красный – индикатор рН.
Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу, способствуют образованию многих кислот, изменяющих цвет среды с красного на желтый. Большее количество кислот освобождается в столбике (при ферментации), по сравнению со скошенной частью (окисление). Бактерии образуют также щелочные продукты (в ходе окислительного декарбоксилирования пептона). Принципиальное значение имеет соотношение глюкоза/лактоза(сахароза) = 1:10. Индикатор феноловый красный становится желтым при значениях рН менее 6,8. При исходном значении рН=7,4 требуется относительно небольшое количество кислот для развития желтого окрашивания среды. Щелочные продукты могут нейтрализовать небольшое количество кислоты, образуемое в скошенной части при ферментации глюкозы. Таким образом, щелочной (красный) скос и кислый (желтый) столбик указывают, что микроорганизм ферментирует глюкозу, но не ферментирует лактозу и/или сахарозу. Бактерии, ферментирующие помимо глюкозы лактозу и/или сахарозу, образуют большое количество кислот, которое не может быть нейтрализовано аминами, поэтому скос и столбик будут кислыми (желтыми). Если в ходе ферментации образуется газ, его можно определить по пузырькам и характерным разрывам среды. Некоторые виды бактерий восстанавливают тиосульфат до сероводорода, который, взаимодействуя с ионами железа, образует нерастворимый черный преципитат сульфида железа. Восстановление тиосульфата происходит только в кислой среде и почернение обычно бывает в зоне столбика.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ МЕТОД ДИСКОВ
Бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар, после чего на его поверхность пинцетом помещают на равномерном расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 0 С в течение суток. По диаметру зон задержки роста культуры судят о ее чувствительности к соответствующим антибиотикам. При зоне задержки роста до 15 мм культура расценивается как нечувствительная или низко чувствительная, 15 – 24 мм – средняя чувствительность, 25 мм и более – высокочувствительная.
СРЕДА ВИЛЬСОНА-БЛЕРА
(ЖЕЛЕЗО-СУЛЬФИТНЫЙ АГАР) используется для выделения анаэробных бактерий. Готовится из питательного агара, к которому добавляют 1% глюкозы, хлорид железа и сульфит натрия. Анаэробные клостридии (Clostridium perfringens) образуют на среде колонии черного цвета за счет образования соединений железа с серой.
ВИСМУТ-СУЛЬФИТНЫЙ АГАР селективная среда для выделения сальмонелл. Готовая среда непрозрачна, зеленоватого цвета. Содержит глюкозу, неорганические соли, бриллиантовый зеленый, питательный агар. Бриллиантовый зеленый и висмут подавляют рост грамположительной флоры и многих энтеробактерий, в том числе шигелл, эшерихий. Сальмонеллы при росте на среде выделяют сероводород, который взаимодействует с солями висмута. В результате образуются колонии черного цвета с металлическим оттенком на зеленоватом фоне среды.
СРЕДЫ ГИССА дифференциально-диагностические питательные среды для выявления ферментативной активности бактерий (кишечной группы). Содержат 1% пептонную воду, 0,5% раствор определенного углевода (глюкоза, лактоза, мальтоза, манит, сахароза и др.) и индикатор Андреде (кислый фуксин в растворе NaOH). Среда при рН 7,2-7,4 – бесцветна, при ферментации углеводов приобретает красный цвет . В пробирки со средой помещают поплавок (небольшая трубочка, один конец которой запаян) для улавливания газообразных продуктов, образующихся при расщеплении углеводов.
СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ обеспечивает рост многих спорообразующих и строгих аспорогенных анаэробов. Ее используют для культивирования и хранения клостридий. Состоит из питательного бульона, 2% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода. Перед посевом среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 10-15 минут для удаления воздуха. После посева среду заливают небольшим слоем вазелинового масла. Выросшие анаэробы вызывают помутнение питательной среды.
ФАГОИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ОТТО (МЕТОД СТЕКАЮЩЕЙ КАПЛИ)
На чашку с МПА шпателем выполняется посев суточной бульонной культуры бактерий. Затем наносят каплю известного бактериофага и, наклонив чашку, дают капле несколько растечься по поверхности питательной среды. Через сутки наблюдают полную задержку роста в месте внесения диагностического фага.
ФАГОТИПИРОВАНИЕ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ФИШЕРА
Испытуемую суточную бульонную культуру засевают на МПА, затем условно делят чашку на квадраты. В каждый квадрат наносят по одной капле различных фагов. После суточной инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых отмечается лизис бактерий. Фаготип бактериальной культуры определяется типом лизирующего ее фага.
СОВМЕСТНОЕ КУЛЬТИВИРОВАНИЕ АЭРОБОВ И АНАЭРОБОВ (МЕТОД ФОРТНЕРА)
В чашке с сахарным агаром вырезается «траншея» («ров») для невозможности миграции, смешивания разных культур бактерий. С одной стороны выполняется посев культуры аэробных бактерий, с другой – умеренно строгих анаэробов. Чашка закрывается, ее края запаиваются парафином (с целью не допустить попадания воздуха, кислорода внутрь чашки). Сначала вырастают в присутствии кислорода аэробы, а затем – анаэробы.
ФАГОИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ПО МЕТОДУ ФЮРТА
В расплавленный и остуженный МПА (45-50 гр. С) добавляют определенный бактериофаг и выливают в чашку Петри. Чашка с полученным агаром делится на несколько секторов, в каждый из которых засеваются неизвестные культуры, выделенные от больных. Там, где культура соответствует бактериофагу, наблюдается отсутствие роста (лизис) бактерий.
ТИТРОВАНИЕ БАКТЕРИОФАГА ПО МЕТОДУ ГРАЦИА
1,0 мл фага смешивают в пробирке с 0,5 мл бактериальной культуры и добавляют в эту же пробирку расплавленный МПА. Все содержимое выливают в чашку с МПА. Дают застыть верхнему тонкому слою и ставят в термостат. При встрече фага с бактерией, происходит лизис последней и образуется негативная колония фага. Такие негативные колонии затем подсчитывают для определения титра. Титром фага называют количество фаговых частиц в 1 мл препарата фага.
ОПЫТ ВЫЯВЛЕНИЯ ФИТОНЦИДОВ ЧЕСНОКА
Чашку с МПА равномерно засевают шпателем суточной бульонной культурой бактерий (например, стафилококка). В центр посева помещают дольку чеснока, предварительно измельченного. Инкубируют в термостате. Через сутки отчетливо видна зона отсутствия роста вокруг измельченного чеснока (стерильная зона).
Источник