Окраска по граму кишечная палочка

ИНВИТРО
Библиотека
Лабораторная диагностика
Микроскопическое (бактериоскопическое) исследование мазка (Bacterioscopic examination of different smears (vaginal, cervical, urethral, sputum, etc.)

Последнее изменение: январь 2021

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер.

Мазок на флору: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.

Показания к назначению исследования

Мазок на флору (бактериоскопия) – простой, недорогой, эффективный метод визуального анализа биологического материала под микроскопом, который позволяет получить представление о функциональном состоянии различных органов, оценить наличие или отсутствие воспалительного процесса и степень его выраженности. В лаборатории мазок окрашивают специальными реагентами. Различные микроорганизмы окрашиваются в разные цвета, что позволяет их идентифицировать. Такая процедура называется окрашиванием по Граму. Кроме изучения под микроскопом, собранный биологический материал может быть использован для бактериологического анализа-посева на микрофлору, что поможет максимально точно выявить возбудителей инфекций, их пропорциональное соотношение и даже чувствительность к тем или иным антибиотикам.

Бактерии делятся на грамположительные (Грам (+)) и грамотрицательные (Грам (-)). Хотя есть ряд бактерий, которые не имеют специфической окраски по Граму.

Спектр бактерий меняется в зависимости от локализации в организме (заселения тех или иных слизистых оболочек и органов). Это первичная диагностика, которая позволяет выявить заболевания на ранних стадиях, а также назначить лечение. Метод широко используется врачами разных специальностей при подозрении на инфекционный процесс и при наличии гнойно-воспалительных проявлений заболевания. Кроме того, мазок на флору применяют в рамках диспансерных обследований в гинекологической и акушерской практике.

Существует несколько видов лабораторного исследования мазка на флору.

Гинекологический мазок на микрофлору. Представляет собой общее исследование, которое позволяет проверить состояние слизистой влагалища. Дополнительно диагностируются патологии, которые нередко вызывают болезнетворные микроорганизмы, – кандидоз, вагиноз, цервицит. При выполнении такого бактериоскопического исследования можно диагностировать заболевания, которые передаются половым путем.

Мазок на микрофлору у мужчин (урологический мазок). Микроскопическое исследование позволяет определить состав микрофлоры мочеиспускательного канала (уретры) мужчины, выявить воспаление в уретре (уретрит), а также ряд специфических возбудителей, таких как трихомонады и гонококки.

Показания к анализу гинекологического или урологического мазка являются:

профилактический осмотр;
боль в процессе мочеиспускания;
дискомфорт или боли внизу живота;
патологические выделения;
зуд или раздражение половых органов.
подозрение на бесплодие;
любое заболевание, передающееся половым путем.

Врач может назначить этот анализ после длительных курсов антибиотиков для предупреждения нарушений бактериального баланса на слизистых оболочках половых органов.

Микроскопию обязательно проводят женщинам во время беременности, чтобы исключить воспалительные процессы и половые инфекции, что необходимо для нормального вынашивания и рождения здорового ребенка.

Мазок на микрофлору не назначается для выявления раковых заболеваний, он не информативен при диагностике таких инфекций, как хламидиоз, ВИЧ, герпес и некоторых заболеваний, передающихся половым путем.

Мазки другой локализации. Показаниями к исследованию являются инфекционно-воспалительные заболевания ЛОР-органов, легких, глаз (при подозрении на гонококковую инфекцию), кожи, мягких тканей и др. Мазок на микрофлору полости рта — это обязательный анализ при подозрении на дифтерию или коклюш.

Подготовка к процедуре

Проводить исследования и сбор материала следует до начала лечения антибиотиками, антисептиками, противогрибковыми препаратами, если врач не назначил иное.

Следует соблюдать ряд требований перед сдачей гинекологического или урологического мазка:

минимум за два дня до сдачи исключить половые контакты;
не принимать ванну за сутки до анализа, ограничиться душем, провести гигиеническую процедуру внешних половых органов без применения моющих средств.
в день сдачи анализа не выполняют гигиенические процедуры половых органов.
за 2-3 часа до взятия мазка не рекомендуется мочиться, так как можно смыть из уретры необходимый для исследования материал.

У женщин исследование производят в середине менструального цикла или в дни, когда нет кровянистых выделений; результат будет недостоверным в острой фазе болезни инфекционной природы (поэтому забор мазка проводят после курса терапии); интравагинальное введение любого рода медикаментов следует прекратить по согласованию с лечащим врачом не менее, чем за 2 дня до забора материала.

При взятии мазка из зева на микрофлору строго запрещено принимать пищу и напитки за 2 часа до анализа; не чистить зубы и не полоскать горло; нельзя использовать растворы для полоскания горла или спреи, содержащие противомикробные средства или антибиотики.

За несколько суток до исследования микрофлоры из носа следует исключить местное применение растворов и мазей, содержащих антибиотики.

Более детальные инструкции в каждом отдельном случае предоставляет врач, назначивший исследование.

Срок исполнения

До двух рабочих дней.

Мазок на флору

Биоматериалом для проведения гинекологической бактериоскопии служат отделяемое наружных половых органов, уретры, влагалища, шейки матки, полости матки.

Мазок.jpg
У мужчин исследуют соскоб из уретры, сперму, секрет предстательной железы (семенную жидкость).

При исследовании других органов материалом для исследования могут служить мазки из носа, зева, уха, исследование мокроты, плевральной жидкости, суставной жидкости, перитонеальной, гной и мазки из ран, отделяемое из уха, глаза и так далее.

Биоматериал наносится на предметные стекла и отправляется в лабораторию.

Что может повлиять на результаты

Проведение системной атибиотикотерапии может значительно повлиять на результат микроскопического исследования и снизить его диагностическую ценность.

На результаты исследования микрофлоры урогенитальной сферы может влиять местное применение антисептиков, антибактериальных, противогрибковых и противозачаточных препаратов.

Довольно часто мазок из зева на микрофлору дает ложный результат. Это связано с тем, что пациент нарушает правила подготовки к исследованию.

Сдать мазок на микрофлору

вы можете в ближайшем медицинском офисе ИНВИТРО. Список офисов, где принимается биоматериал для лабораторного исследования, представлен в разделе «Адреса».

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Нормальные показатели

При исследовании мазка обращают внимание:

на наличие и вид эпителиальных клеток, присутствующих в мазке;
наличие клеточного детрита и слизи;
количество лейкоцитов, определяемых в поле зрения;
наличие определенных морфологических типов (морфотипов) бактерий и элементов грибов, их отношение к красителям (при окраске по Граму), а также на их относительное количество.

Типы бактерий, которые встречаются в мазках:

грамположительные и грамотрицательные кокки, расположенные вне- и внутриклеточно, парами, группами, цепочками;
грамотрицательные колиформные бактерии;
лактоморфотипы (тип лактобактерий);
морфотипы дифтероидов или коринебактерий;
морфотипы строгих анаэробных бактерий (мобилункус, пептострептококки, фузобактерии, бактероиды).

Интерпретация микроскопической картины мазков:

оценивается общее количество материала на стекле.
оценивается состояние эпителия, присутствие ключевых клеток. Количество эпителиальных клеток не учитывается, т. к. не имеет диагностической значимости (справедливо для гинекологических мазков).

Оценка лейкоцитарной реакции

лейкоциты отсутствуют, единичные в поле зрения;
до 10 в поле зрения – небольшое количество;
10 – 15 в поле зрения – умеренное количество;
30 – 50 в поле зрения и более – большое количество;
умеренное и большое количество оцениваются как этиологически значимые для воспалительной реакции.

Количественная оценка микрофлоры

+ или до 10 в поле зрения незначительное/скудное количество;
++ или 11 – 100 в поле зрения умеренное количество;
+++ или 100 – 1000 в поле зрения большое количество/значительное;
++++ или более 1000 в поле зрения массивное количество.

Расшифровка показателей

При исследовании гинекологических мазков, нормальной флорой являются грамположительные палочки (лактоморфотипы). При возникновении инфекционного процесса данный тип бактерий, как правило, угнетается и активизируется рост условно-патогенной и патогенной микрофлоры. Снижение количества лактобактерий является одним из признаков бактериального вагиноза.

Вагиноз.jpg

Основные параметры результатов исследования

лейкоциты: не более 10 в обычном случае или не более 20 во время беременности. Повышение количества лейкоцитов говорит о присутствии воспалительного процесса;
эпителий: 5-10, Повышение отслаивающегося эпителия также свидетельствует о воспалительном процессе;
слизь: умеренное количество. Повышение количества слизи – показатель наличия мочеполовых инфекций;
гонококки: в норме отсутствуют. Их наличие диагностирует гонорею;
трихомонады: в норме не выявляются. Присутствие говорит о трихомониазе;
кандиды: в норме отсутствуют. Их наличие – свидетельство кандидоза (молочницы)

Также в результатах указывают степень чистоты влагалища. Всего их 4, первые 2 вписываются в вариант нормы, а 3-я и 4-я требуют лечения, по окончании которого сдается повторный мазок на флору.

Микрофлора уретры мужчин представлена главным образом эпидермальным стафилококком, некоторыми видами альфа-гемолитических стрептококков (преимущественно зеленящих), коринебактериями. Основной микроорганизм – эпидермальный стафилококк, который продуцирует вещества, подавляющие рост патогенной флоры. Нормальную микрофлору составляют палочки, других микроорганизмов быть не должно. В норме должны присутствовать лейкоциты до 15 единиц в поле зрения. Повышение лейкоцитов свидетельствует о воспалительном процессе, выявление дрожжевых грибов – о кандидозе. Гонококки и трихомонады говорят о наличии соответствующей инфекции, передающейся половым путем.

При исследовании мокроты обычно находят грамположительные кокки, морфологически сходные с пневмококками, либо мелкие неодинаковой формы палочки, грамотрицательные кокки.

В мазке из раны чаще всего встречаются грамположительные кокки.

Дополнительное обследование

Бактериоскопическое исследование окрашенного мазка по Граму не является специфичным методом, и для полноценной идентификации возбудителя, а также определения его чувствительности к антибиотикам необходимо проведение бактериального посева.

В урогенитальном мазке у мужчин не определяются вирусы, хламидии, микоплазмы и уреаплазмы, поэтому для диагностики инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, используют полимеразно-цепную реакцию или иммуноферментный анализ.

Источники:

Энциклопедия клинических лабораторных тестов под ред. Н.У. Тица. – М.: Изд. «Лабинформ». 1997:942.
Gobernado M., et al. Bacterial identification methods. Enferm. Infecc. Microbiol. Clin. 2003;21(2):6-13.
Кудрявцева Л. В. И соавт. Бактериальный вагиноз (Пособие для врачей) – М. 2001 – РМАПО. 61 с.

ВАЖНО!

Информация проверена экспертом

Окраска по граму кишечная палочка

Лишова Екатерина Александровна

Высшее медицинское образование, опыт работы – 19 лет

Поделитесь этой статьей сейчас

Похожие статьи

Прогестерон

Прогестерон: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.

Зуд кожи головы

Зуд кожи головы: причины появления, при каких заболеваниях возникает, диагностика и способы лечения.

Кольпит

Кольпит: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.

Источник

Данный метод окраски является базовым в микробиологии, т.к. на его основе бактерии классифицируются на две большие группы – грамположительные и грамотрицательные. Основой данного подразделения бактерий является их отношение к даннной окраске. Изначально бактерии не имеют цвета, т.е. прозрачны. Но за счет различного строения своих оболочек они по-разному воспринимают тот или иной краситель. И данное свойство воспринимать окраску – строго врожденное, видовое и практически неизменное. Поэтому такое свойсво бактерий (свойство восприятия краски) и легло в основу их классификации. Деление бактерий на грамположительных и грамотрицательных можно встретить, например, в любой инструкции к антибиотикам.

При классической окраске по Граму чаще применяются такие компоненты: карболовый раствор генцианового фиолетового, карболовый раствор фуксина, раствор Люголя, спирт этиловый. Концентрированный карболовый фуксин называется еще фуксин Циля, разведенный водой – фуксин Пфейфера. Все наименования компонентов по фамилиям ученых (как и собственно само название метода: по Граму).

Методика проведения окрашивания.

Предметное стекло перед исследованием обезжиривают и делают на нем мазки исследуемых культур. Мазки следует делать тонкими, чтобы клетки равномерно распределялись на поверхности стекла и не образовывали скоплений. Препарат высушивают при температуре 20-22 0C, фиксируют над пламенем горелки (спиртовки).

1. На фиксированный мазок нанести раствор генцианового фиолетового на 1-2 мин.

2. Не промывая водой, нанести на препарат раствор Люголя и выдержать 1 мин – до полного почернения мазка.

3. Раствор Люголя слить и обесцветить мазок 70% спиртом этиловым, несколько раз наливая его на предметное стекло и покачивая стекло. Процесс обесцвечивания считается завершенным, когда от мазка перестают отделяться окрашенные в фиолетовый цвет струйки жидкости (но не более 30 сек.).

4. Препарат промыть водой.

5. На препарат нанести на 1-2 мин раствор карболового фуксина, разведенного 1:9 водой (фуксин Пфейфера).

6. Краску слить, препарат промыть водой, осушить фильтрованной бумагой или высушить на воздухе, и микроскопировать с иммерсионной системой.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в красный. Поэтому основополагающим здесь является результат окраски – цвет. По инструкции все бактерии красятся одними и теми же красителями, а в итоге получается разный цвет. Почему? Все заключается в строении клеточной стенки. У одних бактерий она толстая, и поэтому глубоко прокрашивается фиолетовым красителем, не воспринимая уже последующий краситель. Это будут грамположительные бактерии. А у других клеточная стенка тонкая. Первым красителем она так же окрашивается, но потом вымывается спиртом и докрашивается вторым красителем.

Набор для классической окраски по Граму

Читайте также: Кишечный миаз у кошек

Если схематично описать метод, то происходит следующее:

– окраска бактерий в фиолетовый цвет (генциановым фиолетовым) – все бактрии становятся фиолетовыми;

– прочная связь красителя в толще оболочки с молекулами йода (при добавлении раствора Люголя) – мазок приобретает бурый цвет;

– обесцвечивание тонкостенных бактерий этиловым спиртом (вымывание красителя из оболочки) – толстостенные бактерии остаются фиолетовыми, тонкостенные становятся бесцветными;

– докрашивание в красный цвет – толстостенные бактерии остаются фиолетовыми, тонкостенные перекрашиваются в красный цвет.

Грамположительные кокковые колонии. Увеличение 1000х.

Помимо классической методики существует и множество модификаций: модификация по Эткинсу, по Калине, по Синеву, по Николля и др. Суть практически везде сохраняется, но немного изменена сама методика окрашивания, либо заменены красители на другие. Например, фуксин часто заменяется на 2% раствор сафранина. Это вносит определенное удобство в работу, т.к. разведенный водой фуксин (фуксин Пфейфера) не очень стоек (хранится 1-2 суток), и приходится каждый раз готовить свежий раствор, а раствор сафранина не требует разведения и используется без подготовки.

Примечательна методика окраски по Граму в модификации по Синеву. Специфика окраски заключается в том, что вместо растворов красителей используются кусочки фильтровальной бумаги, которые заранее пропитываются данными расворами и высушиваются. Окраска происходит при наложении сухой окрашенной бумажки на мазок и нанесении капли воды на бумажку. Бумага мгновенно пропитывается и краситель вымывается на мазок.

Набор для окраски по Граму в модификации по Синеву

Какие возможные ошибки бывают при окраске по Граму и как с ними не столкнуться?

Чаще это ошибки технического характера.

1. Все бактерии в итоге грамположительные. Такое действительно бывает, когда, например, в мазок попали колонии стрептококков, стафилококков и др. (они по природе практически все грамположительные). Но если рассматривать с позиции ошибки, то это случается, когда мазок недостаточно контактировал со спиртом, т.е. не обесцветились тонкостенные бактерии. В итоге все остались фиолетовыми.

2. Все бактерии в итоге грамотрицательные. Если опять отмести возможность присутствия только действительно грамотрицательных бактерий, то ошибка заключается в обратном. Т.е. в переобесцвечивании спиртом. В итоге все обесцвечиваются, и все перекрашиваются в красный цвет. Поэтому при нанесении спирта очень важно соблюдать время контакта с мазком.

3. Отсутствие бактерий в мазке. Это из-за неправильного забора материала, или неправильной фиксации материала (все бактерии смываются при первой же отмывке).

4. Мазок не побурел при нанесении раствора Люголя. Причина – испорченный раствор. Раствор Люголя предпочтительно хранить в стеклянной емкости, из пластиковой емкости со временем йод улетучивается, а сам раствор становится светло-коричневым. Как итог – все бакетрии могут получиться грамотрицательными.

5. Большие фиолетовые образования правильной круглой формы, видимые в микроскоп. Это не кокки – это несмытые капельки генцианового фиолетового после некачественной промывки спиртом.

6. Бактерии в виде объемных нагромождений. Причина в недостаточном распределении бактерий по стеклу на начальном этапе. Мазок нужно равномерно распределять тонким слоем.

7. Другие ошибки. Это может быть несоблюдение времени окраски (недокрашивание, перекрашивание), несоответствие концентрации спирта, чрезмерная тепловая фиксация мазка и т.п.

Небольшие хитрости в вопросах-ответах.

Можно ли использовать аптечный раствор Люголя? Нет! Он другого состава.

Можно ли использовать аптечный этиловый спирт? Да. Но главное чтобы был без добавок типа хлоргексидина, муравьиной кислоты и т.п.

А водку вместо спирта? Нет, в ней недостаточная концентрация спирта, надо 70%.

Можно ли заменить этиловый спирт на изопропиловый? При необходимости можно. Но немного сократить время контакта с мазком.

Можно ли использовать химическую фиксацию вместо тепловой? Да, но это немного сложнее. (Об этом в другой статье).

Как использовать мазок многократно? Очень удачный препарат можно еще несколько раз в дальнейшем просматривать, не смотря на то, что на мазке находится иммерсионное масло. Удалить его никак не получится. Но можно стекло с мазком защитить от пыли помещением в футляр. А в дальнейшем наносить новую каплю масла и вновь микроскопировать.

Подводя итог сказанному, главное – придерживаться методики. Методика сама по себе не строгая, но ошибки на начальных этапах случаются. После нескольких окрашиваний всегда можно понять недочеты и в дальнейшем их легко предотвращать, получая очень красивые и качественные результаты.

Источник