Пцр диагностика кишечных паразитов

По анализу кала можно заподозрить множество патологий, связанных с пищеварительной системой и не только. Опираясь на полученные данные, врач назначает соответствующее лечение. Анализ кала на ПЦР один из наиболее информативных способов получения информации о состоянии здоровья пациента.

Анализ кала на ПЦР позволяет определить с высокой степенью точности большую часть микроорганизмов, обитающих в кишечнике, как патогенных, так и условно-патогенных. Этот отдел пищеварительной системы наиболее заселен бактериями, вирусами, простейшими.

Показания к анализу

Причин, по которым может потребоваться анализ кала на ПЦР достаточно много. Это и некоторые виды наследственных заболеваний, и наличие кишечных инфекций и последствия приема некоторых медикаментозных средств, соблюдение диет, отрицательно влияющих на организм, наличие вредных привычек.

Все эти факторы создают условия для возникновения различных видов заболевания кишечника, в том числе и сопровождающихся нарушением микрофлоры. В этом случае полезные микроорганизмы вытесняются заменяющей их патогенной флорой.

Данный тип обследования врачи назначают пациентам, которые жалуются на:

• Приступы тошноты.
• Сильные боли в области живота.
• Отрыжка.
• Диарея.
• Частые запоры.
• Метеоризм.

Помимо этого, может повышаться температура, появляться сыпь на кожных покровах, или будет изменяться оттенок кожи и склер глазных яблок.

Все эти симптомы являются общими для многих кишечных заболеваний. Например, боли в животе при разных кишечных заболеваниях всегда присутствуют, но носят различный характер, локализацию и время возникновения, поэтому без анализа кала не обойтись при постановке диагноза, иначе вероятность ошибки будет высока.

Подготовка к процедуре

К сдаче кала необходимо соответствующим образом подготовиться.

• За семь дней до исследования необходимо прекратить прием всех медикаментов, особенно тех, которые влияют на перистальтику кишечника.
• Накануне сбора материала нельзя использовать ректальные свечи и ставить клизму.
• Полностью исключаются из рациона питания продукты, окрашивающие кал.
• Биологический материал собирают в стерильный контейнер.
• На образец для исследования не должна попасть моча и выделяемое из половых органов.

Наиболее информативными будут те фрагменты кала где будут посторонние включения, имеется кровь и слизь.

Причины ложных результатов

Не всегда полученные результаты будут отражать истинную картину процессов, происходящих в кишечнике. Это происходит в следующих случаях:

• При нарушении правил сбора материала, особенно если пациент продолжал принимать антибиотики и противовоспалительные препараты до момента сдачи кала.
• При несоблюдении требований к употребляемым продуктам.
• Результат исследования будет ложноположительным в том случае, если инфекции нет, а полученные данные свидетельствуют об обратном. Такое становится возможным, если в кишечнике имеются микроорганизмы, находящиеся в близком родстве с возбудителем.

Положительное значение может быть получено по вине лаборанта, в материал попадет ДНК микроорганизмов, оставшееся после предыдущего материала.

Изменение полученных данных может произойти, если будут использованы просроченные реагенты.

Как проводится анализ

Используя метод ПЦР, в кале можно выявить хеликобактер пилори, лямблии, присутствие простейших, грибов и глистов. Данный способ выявления инфекций существует не так давно, около тридцати лет. В его основу положена способность обнаружения в материале участков ДНК возбудителей.

Для этого структуры образца многократно увеличивают с помощью создания специальных условий, при которых из одной молекулы ДНК получается две. На образование одной цепочки уходит до трех минут. После того как образуется достаточно число молекул, проводят их визуальное опознание.

Нормы и расшифровка результата

В ходе исследования проводится прямое определение возбудителя, в то время как другие виды диагностики имеют дело лишь с продуктами их жизнедеятельности, которые только косвенно свидетельствуют о присутствии патогенного микроорганизма.

ПЦР анализ имеет высокий уровень специфичности, так как каждый организм имеет ДНК, свойственное только его виду. Исследование обладает высокой степенью чувствительности, так как позволяет найти даже единичные клетки возбудителя в материале.

Так как РНК И ДНК у организмов состоят из одинаковых наборов белков, то подобный принцип исследования универсален и обнаруживает практически все виды возбудителей.

С помощью ПЦР метода удается определить микроорганизмы, которые не поддаются культивации и поэтому не идентифицируются с помощью других, уже ставших традиционными методов.

У этого метода существуют и недостатки. С его помощью невозможно изучать возбудителей, чьё ДНК еще не было обнаружено и исследовано. Так как возбудители под действием различных факторов часто мутируют, результат анализ становится ложноположительным.

Анализ кала на ПЦР в Москве – цены

Комплексное лабораторное обследование для выявления основных гельминтозов и протозойных инфекций человека, включающее общеклинические и специфические тесты.

Синонимы русские

Анализы для диагностики гельминтозов и протозойных инфекций.

Синонимы английские

Laboratory diagnosis of protozoal and helminthic infections; CBC, Stool Ova and Parasites test, Cellulose tape test, Protozoal and Helminthic Serology.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, кал, отпечаток с перианальной области.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
• Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
• Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 30 минут до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.
• Сбор биоматериала на исследование проводится только утром (до 10:00), до дефекации. Накануне взятия биоматериала не проводить туалет кожных покровов в области ануса и ягодиц.

Общая информация об исследовании

Гельминтозы и протозойные инфекции наблюдаются повсеместно и особенно распространены среди детей и людей, по роду деятельности контактирующих с домашними и дикими животными. Как правило, инфицирование человека является одним из этапов развития гельминтов или простейших. Многие из паразитов имеют фекально-оральный механизм передачи инфекции и по крайней мере на одном этапе жизненного цикла поражают различные отделы пищеварительного тракта. Несмотря на то что некоторые гельминтозы и паразитозы человека имеют специфические клинические признаки, в целом дифференцировать эти заболевания на основании клинической картины очень сложно. Основную роль в диагностике этих заболеваний играют лабораторные тесты. С учетом того, что у одного и того же человека может наблюдаться сочетание нескольких гельминтозов и паразитозов, рекомендуется выполнение сразу нескольких тестов или, что более удобно для врача и пациента, комплексного анализа на распространенные гельминтозы и паразитозы.

Комплексное лабораторное обследование включает общеклинические и специфические анализы на самые распространенные и важные в клиническом плане гельминтозы и протозойные инфекции. Общеклинические тесты: общий анализ крови, лейкоцитарная формула, анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших.

Общий анализ крови и лейкоцитарная формула используются для того, чтобы определить, является ли гельминтоз или паразитоз инвазивным, и также позволяет выявить возможные осложнения, связанные с инфекцией (анемию). Об инвазивности гельминтозов и паразитозов свидетельствует эозинофилия. Она характерна для амебиаза, эхинококкоза, описторхоза, токсокароза, трихинеллеза и аскаридоза (в фазу миграции личинок). Эозинофилия не характерна для кишечного аскаридоза, энтеробиоза и лямблиоза. Любая длительно текущая инфекция может приводить к развитию анемии (анемии хронического заболевания). Гельминтозы и паразитозы, протекающие с изъязвлением слизистой оболочки пищеварительного тракта (например, амебиаз), приводят к развитию железодефицитной анемии.

Анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших включают макроскопическую оценку кала (цвет, консистенция, наличие крови, избытка слизи, макроскопически определяемых паразитов), микроскопию нативного образца кала (наличие цист простейших – трофозоитов, личинок и взрослых особей гельминтов) и микроскопию окрашенного мазка кала (наличие цист и трофозоитов). Анализ кала на яйца гельминтов позволяет выявить большинство кишечных нематод, цестод и трематод. Анализ кала на цисты простейших позволяет выявить Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Balantidium coli и других простейших. Учитывая, что поступление яиц гельминтов или цист простейших в кал может носить непостоянный характер, однократное исследование кала малоинформативно – рекомендуется исследование трех образцов кала. Следует учитывать, что при некоторых гельминтозах (например, описторхоз) появление яиц в кале начинается только через 2-4 недели после возникновения симптомов заболевания. Отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.

К специфическим тестам для диагностики гельминтозов и паразитозов относятся серологические тесты и анализ на энтеробоз.

Echinococcus, IgG – определение специфических антител IgG к возбудителю эхинококкоза (Echinococcus granulosus или Echinococcus multilocularis). Чувствительность серологических тестов в отношении E. granulosus при поражении печени (самая частая локализация) составляет около 80 %, при поражении других органов (легкие, головной мозг, кости скелета) – несколько ниже.

Opistorchis, IgG – определение специфических антител IgG к возбудителю описторхоза (Opistorchis felineus или Opistorchis viverrini). Из-за невысокой специфичности серологические тесты являются дополнительным способом диагностики описторхоза (главный тест – анализ кала на яйца гельминта).

Toxocara, IgG, титр – количественное определение специфических антител IgG к возбудителю токсокароза (Тохосаra canis). Серологические тесты обладают достаточно высокой чувствительностью (78 %) и специфичностью (92 %) и могут служить хорошим дополнением или даже альтернативой “золотому стандарту” диагностики данного заболевания – микроскопическому исследованию биопсии ткани, содержащей личинки гельминта (частая локализация – печень и легкие), учитывая, что многие пациенты с токсокарозом – маленькие дети.

Учитывая системный характер таких инфекций, как эхинококкоз, описторхоз и токсокароз, при подозрении на эти заболевания проводят дополнительные обследования, в том числе оценку функции печени.

Trichinella, IgG – определение специфических антител IgG к возбудителю трихинеллеза (Trichinella spiralis и родственные виды). Серологические тесты становятся положительными через 3 недели после инфицирования. Учитывая, что личинки гельминта поражают мышечную ткань, при данном заболевании также могут быть повышены следующие клинико-лабораторные маркеры: креатинкиназа (КК), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) и аспартатаминотрансфераза (АСТ).

Ascaris lumbricoides, IgG – определение специфических антител IgG к возбудителю аскаридоза. Аскаридоз – это самый распространенный гельминтоз человека. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики аскаридоза (главный тест – выявление взрослых особей в области рта и ануса, а также анализ кала на яйца гельминта).

Giardia lamblia, антитела – определение специфических антител к возбудителю лямблиоза. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики лямблиоза (главный тест – анализ кала на цисты паразита). Серологический тест становится отрицательным через 1 год после перенесенной инфекции. Также может быть использован тест на антиген G. lamblia в кале.

Энтеробиоз – распространенный гельминтоз, вызываемый Enterobius vermicularis (острица). Яйца остриц не выделяются с калом, поэтому микроскопическое или любые другие исследования кала не применяются. Лабораторная диагностика энтеробиоза осуществляется с помощью специального метода – микроскопического исследования мазков-отпечатков с кожи перианальной области. Микроскопическое исследование позволяет произвести дифференциальную диагностику энтеробиоза с аскаридозом, а также другими неинфекционными заболеваниями, сопровождающимися зудом перианальной области (контактным дерматитом, сахарным диабетом). Учитывая повышенную активность самки в ночные часы, оптимально производить мазок-отпечаток с утра, до совершения утреннего туалета.

Комбинация общеклинических и специфических тестов позволяет достичь наибольшей точности при диагностике гельминтозов и паразитозов. При эффективном лечении изменения, выявленные в общеклинических тестах, нормализуются, а яйца/личинки/взрослые особи гельминтов или цисты простейших перестают определяться, но серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики кишечных гельминтозов и протозойных инфекций.

Когда назначается исследование?

• При обследовании детей и людей из группы риска заражения гельминтами и простейшими (ветеринары, фермеры, работники, занятые в санитарно-гигиентической сфере);
• при наличии признаков глистной инвазии или протозойной инфекции: хронической диареи, мальабсорбции, тошноты, потери веса, а также признаков реакции гиперчувствительности (крапивницы и других сыпей);
• при оформлении ребенка в детский сад, лагерь, бассейн, при госпитализации.

Что означают результаты?

Референсные значения

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

• [02-005] Клинический анализ крови (c лейкоцитарной формулой)
• [02-010] Анализ кала на яйца гельминтов
• [02-012] Анализ кала на цисты простейших
• [02-013] Энтеробиоз (метод Рабиновича)
• [07-019] Echinococcus, IgG
• [07-023] Giardia lamblia, суммарные антитела
• [07-037] Opisthorchis, IgG
• [07-043] Toxocara, IgG, титр
• [07-050] Trichinella, IgG
• [07-123] Ascaris lumbricoides, IgG

В норме яйца, личинки и взрослые особи гельминтов, цисты и вегетативные формы простейших в кале отсутствуют. Их обнаружение свидетельствует о текущей инфекции.

Серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.

Что может влиять на результат?

• Время, прошедшее с момента заражения: яйца гельминтов и цисты простейших могут быть обнаружены через 2-4 недели и позже после заражения.
• Характер и скорость образования яиц гельминтов и цист простейших: часто наблюдается прерывистый характер их поступления в кал, что может привести к получению ложноотрицательного результата и обуславливает необходимость исследования трех, а не одного образца кала.



Важные замечания

• Для получения точного результата необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту;
• результат комплексного анализа следует интерпретировать с учетом анамнестических, клинических и инструментальных данных;
• отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.

Также рекомендуется

[06-022] Креатинкиназа общая

[06-025] Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) общая

[06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)

[06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)

Кто назначает исследование?

Врач общей  практики, педиатр, инфекционист.

Литература

• Kucik CJ, Martin GL, Sortor BV. Common intestinal parasites. Am Fam Physician. 2004 Mar 1;69(5):1161-8.
• McPhee S.J., Papadakis M. CURRENT Medical Diagnosis and Treatment / S. J. McPhee, M. Papadakis; 49 ed. – McGraw-Hill Medical, 2009.