Питательные среды для выделения кишечной

Глюкозо-пептонная среда (Эйкмана) (ГПС)

Глюкозо-пептонная среда готовится в двух модификациях: концентрированная и разведенная. Концентрированная глюкозо-пептонная среда. К 1 л водопроводной воды прибавляют 100 г пептона, 100 г глюкозы и 50 г хлористого натрия. Сначала в воде растворяют пептон и соль, кипятят, фильтруют и, добавив в фильтрат глюкозу, устанавливают pH 7,4. Если необходимо, среду подщелачивают. После установления pH среду кипятят; если образовался осадок, фильтруют.

Концентрированную среду разливают в бродильные сосуды 1 и пробирки с поплавками с таким расчетом, чтобы при посеве среда разбавлялась посевным материалом в 10 раз. Для посева 100 мл воды нужно в бродильный сосуд поместить 10 мл ГПС, а в пробирки для посева 10 мл воды вливают по 1 мл ГПС. Стерилизация концентрированной глюкозо-пептонной среды осуществляется в кипятильнике Коха по 30 мин в течение трех дней.

В практической работе для сокращения срока стерилизации глюкозо-пептонной среды можно рекомендовать следующий режим. Температуру автоклава вначале доводят до 120°С и стерилизуют среду при этой температуре 5 мин. Постепенно снижают давление в автоклаве, выпуская пар и прекратив нагрев, до 0 ат (что соответствует температуре 100 °С) и при 100 °С (при открытом паровыпускном клапане) выдерживают среду еще 15 мин.

Разведенная глюкозо-пептонная среда содержит в 10 раз меньше всех плотных ингредиентов, чем концентрированная. Это достигается прибавлением к одной части концентрированной среды девяти частей воды. Разведенную глюкозо-пептонную среду разливают в пробирки с поплавками по 9 мл. Стерилизуют так же, как и основную среду. Используют разведенную глюкозо-пептонную среду при посеве малых количеств воды или ее разведений.

Среда Булира

При санитарной оценке воды и молока для определения в них коли-титра вместо ГПС можно применять среду Булира в разведенном и концентрированном виде.

Концентрированная среда Булира – основной раствор. Используется она в тех случаях, когда для посева берут 10 мл воды и более. К 1 л мясопептонного бульона добавляют 2,5 г маннита и после растворения устанавливают pH 6,8-7,0. Кипятят среду 10 мин, затем в горячий раствор добавляют насыщенный водный раствор нейтральрота до появления ясной вишнево-красной окраски. Среду фильтруют и разливают в бродильные сосуды и пробирки с поплавками с таким расчетом, чтобы при посеве среда разбавлялась посевным материалом в 3 раза. Обычно среды в бродильный сосуд наливают в 2 раза меньше, чем вносится посевного материала, т.е. для посева 10 мл воды в бродильный сосуд наливают 5 мл среды, для посева 100 мл воды нужно налить 50 мл среды и пр. Стерилизация среды Булира проводится в кипятильнике Коха по 30 мин в течение трех дней. Можно стерилизовать ее и в автоклаве при 120 °С в течение 15 мин.

При исследовании молока, а также при анализе воды, когда для посева берут небольшие количества продукта, готовят разведенную среду Булира: к одной части концентрированной среды приливают две части воды. Разведенную среду Булира разливают в пробирки с поплавками по 6-7 мл. Стерилизуют, как указано выше. Среда ГПС и среда Булира являются средами накопления.

Среда Кеслера

Среда Кеслера применяется для определения коли-титра в молоке и других молочных продуктах. К 1 л водопроводной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании в течение 20-30 мин, фильтруют ее через вату и в фильтрате растворяют 10 г лактозы. Объем доводят до 1 л. pH среды устанавливают 7,4-7,6, добавляют 2-4 мл 1%-ного раствора (водного) генцианвиолета на 1 л среды. В пробирки с поплавками разливают по 5 мл среды и стерилизуют 15 мин при 120 °С.

Источник

Текущая версия страницы пока не проверялась опытными участниками и может значительно отличаться от версии, проверенной 25 мая 2018; проверки требуют 27 правок.

Забор бактериологической петлёй материала колоний микроорганизмов выросших на плотной питательной среде для дальнейшего исследования

Культивирование микроорганизмов в чашках Петри и пробирках с питательными средами в лабораторном термостате с возможностью поддержания газовой среды. Внешняя дверца термостата открыта

Питательная среда — однокомпонентный или многокомпонентный субстрат, применяемый для культивирования микроорганизмов или культур клеток высших организмов.

Требования, предъявляемые к питательным средам[править | править код]

быть питательными, то есть содержать в легко усваиваемом виде все вещества, необходимые для удовлетворения пищевых и энергетических потребностей. При культивировании ряда микроорганизмов в среды вносят факторы роста — витамины, некоторые аминокислоты, которые клетка не может синтезировать.
иметь оптимальную концентрацию водородных ионов — pH, так как только при оптимальной реакции среды, влияющей на проницаемость оболочки, микроорганизмы могут усваивать питательные вещества.

Для большинства патогенных бактерий оптимальна слабощелочная среда (pH 7,2—7,4). Исключение составляют холерный вибрион — его оптимум находится в щелочной зоне (pH 8,5—9,0) и возбудитель туберкулёза, нуждающийся в слабокислой реакции (pH 6,2—6,8).
Чтобы во время роста микроорганизмов кислые или щелочные продукты их жизнедеятельности не изменили pH, среды должны обладать буферностью, то есть содержать вещества, нейтрализующие продукты обмена.

быть изотоничными для микробной клетки; то есть осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. Для большинства микроорганизмов оптимальная среда, соответствующая 0,5 % раствору натрия хлорида.
быть стерильными, так как посторонние микробы препятствуют росту изучаемого микроба, определению его свойств и изменяют свойства среды.
плотные среды́ должны быть влажными и иметь оптимальную для микроорганизмов консистенцию.
обладать определённым окислительно-восстановительным потенциалом, то есть соотношением веществ, отдающих и принимающих электроны, выражаемым индексом RH2. Например, анаэробы размножаются при RH2 не выше 5, а аэробы — при RH2 не ниже 10.
быть по возможности унифицированным, то есть содержать постоянное количество отдельных ингредиентов.

Желательно, чтобы среды были прозрачными — удобнее следить за ростом культур, легче заметить загрязнение среды посторонними микроорганизмами.

Классификация[править | править код]

Определение антибиотикоустойчивости микроорганизма (светлые свободные от колоний микроорганизма участки питательной среды вокруг тестовых кружков пропитанных разными антибиотиками показывают насколько данный антибиотик эффективен против данного микроорганизма)

В промышленных биологических реакторах для культивирования микроорганизмов или получения продуктов их жизнедеятельности используются жидкие или полужидкие питательные среды

По исходным компонентам:
- натуральные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения (мясо, асцит, костная мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)
- синтетические среды — готовят из определённых химически чистых органических и неорганических соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворённых в дважды дистиллированной воде.
По степени готовности:
- готовые питательные среды (в чашках Петри, во флаконах)
- сухие смеси
По консистенции (степени плотности):
- жидкие (бульоны)
- полужидкие
- плотные

Плотные и полужидкие среды отличаются от жидких наличием желирующего агента (агар-агар, реже желатин). Кроме того, в качестве плотных сред применяют коагулировавшие яичные или сывороточные белки, картофель, среды с силикагелем. Некоторые микроорганизмы используют желатин как питательное вещество — при их росте среда разжижается.

По составу:
- простые: мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), питательный желатин,
- сложные — многокомпонентные среды, которые могут содержать аминокислоты, витамины, микроэлементы и другие вещества.
По назначению:
- основные — служат для культивирования большинства микроорганизмов, например МПБ, МПА, бульон, шоколадный агар, пептонная вода.
- специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.
- элективные (избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся элективными при добавлении к ним определённых антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные среды называют средами накопления.
- дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.
- транспортные — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

Приготовление сред[править | править код]

Посуда для приготовления сред[править | править код]

Посуда для приготовления сред не должна содержать посторонних веществ, например щелочей, выделяемых некоторыми сортами стекла, или окислов железа, которые могут попасть в среду при варке её в ржавых кастрюлях. Лучше пользоваться стеклянной, эмалированной или алюминиевой посудой. Перед употреблением посуду необходимо тщательно вымыть, прополоскать и высушить. Новую стеклянную посуду предварительно кипятят 30 минут в 1-2 % растворе хлороводородной кислоты, после чего в течение часа прополаскивают в проточной воде.

Сырьё[править | править код]

Исходным сырьём для приготовления большинства сред служат продукты животного и растительного происхождения, а также готовые полуфабрикаты.

Этапы приготовления[править | править код]

варка: среды варят на открытом огне, водяной бане, автоклаве или варочных котлах.
установление pH: ориентировочно производят с помощью индикаторной бумаги, для точного определения пользуются потенциометром или компаратором. При стерилизации pH снижается на 0,2, поэтому сначала готовят более щелочной раствор.
осветление производят, если при варке среды мутнеют или темнеют. Для этого используют белок куриного яйца или сыворотку крови.
фильтрация жидких и расплавленных желатиновых сред производят через влажный бумажный или матерчатый фильтры. Фильтрация агаровых сред затруднена — они быстро застывают. Обычно их фильтруют через ватно-марлевый фильтр.
разливают среды не более чем на ¾ ёмкости, так как при стерилизации могут намокнуть пробки и среды утратят стерильность.
стерилизация: режим стерилизации зависит от состава среды и указан в её рецепте.
контроль

для контроля стерильности среды ставят на 2 суток в термостат, после чего их просматривают.
химический контроль окончательно устанавливает pH, содержание общего и амминого азота, пептона, хлоридов.
для биологического контроля несколько образцов среды засевают специально подобранными культурами, и по их росту судят о питательных свойствах среды.

Виды питательных сред[править | править код]

Среда типа АГВ (ТУ 9229-083-00419785-97).
Агаризованная дрожже-молочно-солевая среда (АДМС)
Среда Байрд-Паркера (агаризованная)
Среда Блаурокка (агаризованная)
Среда Бушнелла-Хааса (агаризованная)
Среда Вильсона-Блера (агаризованная)
Среда Гамборга (агаризованная)
Среда Гаузе-1 (агаризованная)
Среда Кери-Блейра (агаризованная) или среда среда Кери-Блэр (Кэри-Блэир).
Среда Китт Тароцци (агаризованная)
Среда Левенштейна-Йенсена.
Среда Левина-ГРМ
Среда Мак-Конки (агаризованная)
Среда Мурасиге-Скуга (агаризованная)
Среда Мюллера-Хинтон (плотная)
Среда МРС-2 (агаризованная)
Среда типа MRS (агаризованная) (ГОСТ 51331-99) — латинская аббревиатура предыдущей среды
Среда типа Neogen
Среда Рогоза (агаризованная)
Среда Сабуро (агаризованная)
Среда Смирнова А. М.
Среда Сотона (агаризованная)
Среда СР-15 (агаризованная)
Среда Стрита (агаризованная)
Среда Стюарта (транспортная)
Среда триптон-соевый агар (TSA)
Среда Хейфлика (агаризованная) или Hayflick Liquid Medium
Среда Чапека (агаризованная)
Среда Эймса (транспортная) или Amies Liquid Medium
Среда Эндо (агаризованная)
Среда Эшби (агаризованная)[1][2]

Изображения[править | править код]

Пробирки с жидкими питательными средами (слева 6) для идентификации микроорганизмов по их свойству изменять среды
Пробирки с плотной скошенной питательной средой (трёхсахарный железистый агар) засеянными разными микроорганизмами
Чашки Петри с плотными питательными средами

См. также[править | править код]

Культура клеток и тканей
Биотехнология
Шоколадный агар
Агар-агар

Примечания[править | править код]

↑ Смирнов А. М. Рост и метаболизм изолированных корней в стерильной культуре. М.: Наука, 1970. 455 с.
↑ Бутенко Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений. М.: Наука, 1964. 272 с.

Литература[править | править код]

Замчук Л. А. Питательные среды // Большая медицинская энциклопедия, 3-е изд. — М.: Советская энциклопедия. — Т. 19.
Калина Г. П. Синтетические питательные среды // Большая медицинская энциклопедия, 3-е изд. — М.: Советская энциклопедия. — Т. 23.
Биргер М. О. Дифференциально-диагностические среды // Большая медицинская энциклопедия, 3-е изд. — М.: Советская энциклопедия. — Т. 7.
Белокрысенко С. С. Бактериальная культура // Большая медицинская энциклопедия, 3-е изд. — М.: Советская энциклопедия. — Т. 2.
Белокрысенко С. С. Гемокультура // Большая медицинская энциклопедия, 3-е изд. — М.: Советская энциклопедия. — Т. 5.
Белокрысенко С. С. Биологическая проба в микробиологии // Большая медицинская энциклопедия, 3-е изд. — М.: Советская энциклопедия. — Т. 3.
Игнатова Т. H., Поспелова Т. В., Губин В. А., Добрынин Я. В., Чертков И. Л. Культуры клеток и тканей (питательные среды для культур клеток и тканей) // Большая медицинская энциклопедия, 3-е изд. — М.: Советская энциклопедия. — Т. 12.
Титр бактерий // Большая советская энциклопедия : [в 30 т.] / гл. ред. А. М. Прохоров. — 3-е изд. — М. : Советская энциклопедия, 1969—1978.

Источник

4.2.2.1. Среда Кесслер с лактозой.

К 1 куб. дм водопроводной воды добавляют (10,0 +/- 0,1) г пептона и 50 куб. см желчи крупного рогатого скота. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании 20 – 30 минут. Затем фильтруют ее через ватно-марлевый фильтр, добавляют 2,5 г лактозы, доводят объем водой до 1 куб. дм. Устанавливают pH 7,4 – 7,6, используя 1 н растворы NaOH или HCl и проверяя значение pH на потенциометре или универсальной индикаторной бумагой. Добавляют 4 куб. см 1-процентного раствора генцианового фиолетового, разливают в колбы по 90 куб. см и в пробирки по 10 куб. см, закладывают поплавки (пробирки Уленгута) отверстием книзу.

Стерилизуют при (121 +/- 2) град. C в течение 15 минут.

4.2.2.2. 1% раствор генцианового (кристаллического) фиолетового.

Взвешивают (1,0 +/- 0,01) г генцианового (кристаллического) фиолетового, помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доливают до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре (4 +/- 1) град. C в течение 7 суток.

4.2.2.3. Среда Кесслер с лактозой из сухих питательных сред.

Среда готовится согласно прописи на этикетке банки.

4.2.2.4. Среда Эндо.

Среду Эндо производства ДагНИИ питательных сред готовят согласно прописи на этикетке банки. Изготовленную и разлитую в стерильные чашки Петри среду можно хранить при температуре (4 +/- 1) град. C до 10 суток.

4.2.2.5. Среда на индол.

Взвешивают (10,0 +/- 0,1) г сухого панкреатического гидролизата казеина (или 100,0 куб. см жидкого панкреатического гидролизата казеина с содержанием 500 мг% аминного азота), (5,0 +/- 0,1) г хлористого натрия, (1,0 +/- 0,01) г ДЛ-триптофана, растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды. Доводят pH до 7,0 +/- 0,1 н растворами NaOH или HCl и, измеряя значение pH на потенциометре или по универсальной индикаторной бумаге, разливают в пробирки по 5 куб. см, стерилизуют 15 минут при (121 +/- 2) град. C.

4.2.2.6. Реактив на индол (Эрлиха).

Взвешивают (5,0 +/- 0,1) г пара-диметиламинобензальдегида в стеклянном стакане вместимостью 100 куб. см, помещают в коническую колбу вместимостью 200 куб. см и растворяют в (50 +/- 1) куб. см этилового спирта. С помощью мерного цилиндра вместимостью 100 куб. см медленно добавляют (50 +/- 1) куб. см концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре (4 +/- 1) град. C.

4.2.2.7. Среда Кларка.

Взвешивают (5,0 +/- 0,1) г пептона, (5,0 +/- 0,1) г глюкозы, (5,0 +/- 0,1) г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворяют ингредиенты в 950 куб. см дистиллированной воды, устанавливают pH 6,9 +/- 0,1, используют 1 н растворы NaOH или HCl, проверяя значение pH на потенциометре или универсальной индикаторной бумагой. Доводят общий объем до 1 куб. дм дистиллированной водой и фильтруют при необходимости. Разливают в пробирки по 5 куб. см, стерилизуют в течение 20 минут при (115 +/- 2) град. C.

4.2.2.8. 90% раствор этилового спирта.

Добавляют к (900 +/- 5) куб. см 96-процентного этилового спирта (60 +/- 1) куб. см дистиллированной воды в колбе емкостью 100 куб. см.

4.2.2.9. Раствор индикатора метилового красного.

Взвешивают (0,1 +/- 0,001) г индикатора метилового красного, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 куб. см, растворяют в (300 +/- 1) куб. см 90-процентного раствора этилового спирта (п. 4.2.2.8), добавляют до 500 куб. см дистиллированной водой. Хранят раствор в колбе с притертой пробкой при температуре (4 +/- 1) град. C.

4.2.2.10. 5% раствор альфа-нафтола.

Взвешивают (5,0 +/- 0,1) г альфа-нафтола, растворяют в (100 +/- 1) куб. см абсолютного этилового спирта. При отсутствии абсолютного этилового спирта можно использовать ректификованный этиловый спирт 96 град. Раствор должен быть свежеприготовленным.

4.2.2.11. 40-процентный раствор гидроокиси калия.

Взвешивают (40,0 +/- 0,1) г гидроокиси калия в стакане вместимостью 100 куб. см, переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в (60,0 +/- 1) куб. см дистиллированной воды, затем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре (4 +/- 1) град. C.

4.2.2.12. Среда Козера.

Взвешивают (1,5 +/- 0,1) г натрия-аммония фосфорнокислого, (1,0 +/- 0,01) г калия фосфорнокислого двузамещенного, (0,2 +/- 0,01) г магния сульфата, (3,0 +/- 0,1) г натрия лимоннокислого трехзамещенного. Растворяют в 950 куб. см дистиллированной воды. Добавляют 10 куб. см 0,5-процентного спиртового раствора бромтимолового синего. Устанавливают pH 6,8 1 н растворами NaOH или HCl, проверяя значение pH на потенциометре. Доводят объем дистиллированной водой до метки (1 куб. дм). Разливают по 10 куб. см в пробирки, стерилизуют в течение 15 минут при (121 +/- 2) град. C.

4.2.2.13. 0,5-процентный раствор бромтимолового синего в спирте.

Взвешивают (0,5 +/- 0,01) г бромтимолового синего, помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят этиловым спиртом до метки. Раствор хранят при температуре (4 +/- 1) град. C в течение 30 суток.

4.2.2.14. Среда Симмонса.

Среда готовится аналогично среде Козера (п. 4.2.2.12). Но после измерения pH в нее добавляют (20 +/- 0,1) г агара на 1 куб. дм, прогревают на водяной бане до растапливания агара, стерилизуют в течение 15 минут при (121 +/- 2) град. C. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

Источник

Оглавление темы “Методы выделения бактерий. Микроскопия. Питательные среды для культивирования бактерий.”:

1. Методы выделения бактерий. Микроскопия материала. Микроскоп. Светооптическая микроскопия. Световая микроскопия.

2. Темнопольная микроскопия. Принципы темнопольной микроскопии. Фазово-контрастная микроскопия. Техника фазово-контрастной микроскопии.

3. Поляризационная микроскопия. Интерференционная микроскопия. Люминесцентная микроскопия. Техника микроскопии.

4. Электронная микроскопия. Просвечивающий электронный микроскоп. Подготовка материала к микроскопии. Нативные препараты.

5. Окрашенные препараты. Окрашенные мазки. Отбор материала для микроскопии. Фиксация препарата. Фиксация мазка. Фиксация бактерий.

6. Окрашивание мазка. Окрашивание бактерий. Специальные методы окраски бактерий. Окраска бактерий по Граму. Дифференцирующие методы окрашивания.

7. Питательные среды для культивирования бактерий. Питательные среды для бактерий. Источники азота и углерода для бактерий. Виды питательных сред для выращивания бактерий.

8. Классификации питательных сред для культивирования бактерий. Классификация сред для бактерий. Искусственные питательные среды для бактерий. Естественные среды для выращивания бактерий.

9. Характеристики питательных сред для культивирования бактерий. Консервирующие среды для бактерий. Среды обогащения для бактерий. Элективные и селективные питательные среды для выращивания бактерий.

10. Дифференциально-диагностические питательные среды для культивирования бактерий. Среды содержащие белки. Среды содержащие углеводы. Среды для определения редуцирующей способности бактерий.

Классификации питательных сред для культивирования бактерий. Классификация сред для бактерий. Искусственные питательные среды для бактерий. Естественные среды для выращивания бактерий.

Среды классифицируют по консистенции, составу, происхождению, назначению и загрязнённости материала.

При классификации питательных сред по консистенции питательные среды разделяют на плотные (твёрдые), полужидкие и жидкие.

При классификации питательных сред по составу выделяют белковые, безбелковые и минеральные среды.

При классификации питательных сред по происхождению среды разделяют на искусственные и естественные (природные).

Классификации питательных сред для культивирования бактерий. Классификация сред для бактерий

Искусственные питательные среды для бактерий

Искусственные среды разделяют на животные [например, мясопептонный агар (МПА) или мясопептонный бульон (МПБ)] и растительные (например, настои сена и соломы, отвары злаков, дрожжей или фруктов, пивное сусло и др.).

Естественные среды для выращивания бактерий

Естественные питательные среды могут содержать компоненты животного (например, кровь, сыворотка, жёлчь) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения. По назначению выделяют консервирующие среды (для первичного посева и транспортировки), среды обогащения (для накопления определённой группы бактерий), среды для культивирования {универсальные простые, сложные специальные и для токсинообразования), среды дм выделения и накопления (консервирующие, обогащения и элективные) и среды для идентификации (дифференциальные и элективно-дифференциальные).

Классификации питательных сред по загрязнённости материала

Если материал слабо загрязнён посторонней микрофлорой, то для выделения чистых культур применяют простые (по составу) среды. При обильной контаминации сапрофитами используют специальные или элективные (для отдельных видов), селективные (только для отдельных бактерий), дифференциально-диагностические (для облегчений идентификации) среды.

– Также рекомендуем “Характеристики питательных сред для культивирования бактерий. Консервирующие среды для бактерий. Среды обогащения для бактерий. Элективные и селективные питательные среды для выращивания бактерий.”

Источник