Рнга с кишечной группой антигенов

Антитела к возбудителю псевдотуберкулёза, Yersinia pseudotuberculosis, РПГА — выявление антител, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на инфицирование возбудителем псевдотуберкулёза методом РПГА (реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации).

Yersinia pseudotuberculosis — возбудитель псевдотуберкулёза.
Путь передачи — фекально-оральный, то есть посредством заражённой пищи и воды, которые содержат бактерии.

Резервуар инфекции — животные (свиньи, крысы, мыши и другие грызуны, домашние животные и птицы).

Псевдотуберкулёз — острое бактериально-инфекционное заболевание, поражающее, в основном, желудочно-кишечный тракт. К туберкулёзу это заболевание отношения не имеет (исходное название связано с внешним сходством с туберкулёзными бугорками гранулём, выявленных в тканях больных животных).

Длительность инкубационного периода 1—2 дня. Минимальный период — 15 часов, максимальный — 4 дня.

Клиническая картина при иерсиниозе и псевдотуберкулёзе
Основные клинические симптомы заболевания: острое начало, повышение температуры до 38–40 ºС, лихорадка, боли в животе, преимущественно в правой подвздошной области, тошнота, рвота, жидкий стул без патологических примесей, боль в мышцах и суставах, увеличение печени, селезёнки и периферических лимфатических узлов, боли в суставах, у многих больных — сыпь, чаще мелкопятнистая, гиперемия лица, отёчность и гиперемия кистей и стоп. Частым проявлением являются лимфадениты и полиадениты, артралгии, артриты и полиартриты.

Антитела к Yersinia pseudotuberculosis
Выявление специфических антител к возбудителю можно наблюдать к концу первой недели заболевания с быстрым ростом их концентрации на протяжении 2 недель и, в дальнейшем, снижением через 2–6 месяцев. Исследование антител следует проводить в динамике — в парных сыворотках, взятых в начале заболевания и далее через 7–10 дней. Диагностически достоверным серологическим показателем считают 4-кратный (и более) прирост титра антител в РПГА. При отсутствии выраженной динамики титров или необходимости оценки одиночных результатов следует учитывать эпидемиологическую обстановку и сроки болезни, при этом допустимо использовать минимальный условно-диагностический титр 1:100–1:200. При групповых вспышках псевдотуберкулёза, для детей до 5 лет условно диагностический титр может быть снижен до 1:50–1:100.

Показания:

• обследование пациентов с клиникой острой кишечной инфекции;
• для подтверждения клинического диагноза при получении отрицательного результата бактериологического обследования; 
• в целях ретроспективного подтверждения диагноза;
• при позднем обращении больного, назначении антибактериальной терапии.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 11 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Единицы измерения и коэффициенты пересчёта: тест полуколичественный.

Результат предоставляется в форме «отрицательно» или «положительно». В последнем случае указывается титр антител — последнего разведения сыворотки, дающей положительный результат. 

Диагностически достоверным считают прирост титров в 4 и более раз за 7—10 дней.

Условно-диагностический титр — 1:100.

При групповых вспышках псевдотуберкулёза для детей до 5 лет условно-диагностический титр может быть снижен до 1:50. 

Положительно:

• текущая или перенесённая в прошлом инфекция. Рекомендовано обследовать больного не менее 2 раз — в начале заболевания и с интервалом в 7–10 дней, диагностически достоверным считают 4-кратный и более прирост титров антител. При необходимости оценивать одиночные результаты или отсутствие выраженной динамики титров допустимо использовать минимальный условно-диагностический титр 1:100. При групповых вспышках заболевания для детей до 5 лет условно диагностический титр может быть снижен до 1:50. Результат следует оценивать в комплексе с эпидобстановкой, формой и сроками болезни;
• редко — перекрёстные реакции (другие виды Yersinia, Vibrio, Salmonella, Brucella, Rickettsia). 

Отрицательно: 

• отсутствие инфекции;
• низкая концентрация или отсутствие антител в ранний период инфекции.

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) относится к серологическим методам исследования. Серология – наука об изучении различных свойств плазмы крови. Если точнее говорить, то серология изучает взаимодействие антител, находящихся в организме человека, с определёнными антигенами. В медицинской клинико-лабораторной диагностики серология является одним из разделов иммунологии.

Основными серологическими методами исследования являются различные реакции. Такие реакции, как правило, делятся на прямые и косвенные. В свою очередь прямые бывают двухкомпонентными – это агглютинация, гемолитическая агглютинация или реакция преципитации. А косвенные реакции в основном трехкомпонентные, к ним относятся реакции торможения гемолитической агглютинации и нейтрализации (микроорганизма и вируса).

Агглютинация представляет собой слипание и выпадения в осадок клеток, имеющих определенный антиген, который вступил во взаимодействие с таким же антигеном. Реакция преципитации помогает определить в организме или исследуемом материале неизвестный антиген путем добавления определенного антитела. В результате при положительном результате выпадает осадок в виде хлопьев.

Такие исследования проводят для определения инфекционного или бактериологического заболевания. К сожалению, такие методы не являются однозначными в диагностики данных групп заболеваний. Поэтому при постановке диагнозов следует учитывать анамнез пациента, клинические проявления заболевания, а также назначать дополнительные подтверждающие методы исследования.

Реакция непрямой гемолитической агглютинации (РНГА) – этот метод специфичен для определения инфекционных заболеваний, вызванных бактериями (например, сальмонеллезов или дизентерии), риккетсиями, простейшими или грибами. Также этот метод эффективен в отношении диагностирования сифилиса.

Принцип метода РНГА

При постановке реакции используются эритроциты (может использоваться латекс), которые имеют на своей стенке определенные антигены. К планшету с эритроцитами добавляется исследуемый материал. Если в нем имеются специфические антитела или белки определяемого возбудителя заболевания, то они вступают в связь с антигенами, слипаются и образуют видимый осадок.

Стандартный набор в основном содержит пустой планшет, эритроциты баранов, которые и имеют чувствительность к антигену выявляемого заболевания. Также в наборе присутствуют эритроциты, не имеющие антигенов. Контроли – положительный и отрицательный и стандартный реактив для разведения сывороток.

Самое главное в постановке реакции – это строгое соблюдение всех этапов. Для начала берут пустой планшет для РНГА, в лунки раскапываются последовательно заранее разведенные исследуемые образцы. В первую и последнюю лунки капают контроли. К сывороткам добавляют эритроциты со специфическими антигенами. Инкубируют планшет 2 часа.

Далее описывают визуальный результат. Он учитывается в крестах. Реакция считается верной только тогда, когда контроли прошли реакцию. Соответственно, в лунке с положительным контролем эритроциты располагаются по всему дну в виде хлопьев («зонтик»). В случае с отрицательным контролем на дне лунки выпадает маленькое четкое кольцо из эритроцитов («пуговка»).

Учет результатов

Результат учитывается по интенсивности осадка из эритроцитов в лунке.

• «-» отрицательный результат, как отрицательный контрольный образец, в виде плотного кольца на дне без какой-либо зернистости.
• «+» слабая интенсивность реакции, кольцо на дне в виде «пуговки», но при этом видны отдельные отложения эритроцитов. Результат описывается как «сомнительный». Обязательная пересдачи крови через 2 недели.
• «++» средняя интенсивность прошедшей реакции. Образовавшееся кольцо на дне лунки достаточно широкое с просветом в центре. Результат трактуется как слабо положительный.
• «+++» интенсивная реакция. В лунке эритроциты занимают всю поверхность, выпадают в виде «зонтиков». То есть с тонким кольцом по периферии. Результат оценивается как положительный.
• «++++» резкая интенсивность реакции. Вся лунка равномерно заполнена зернистыми выпадениями эритроцитов, иногда может быть в виде «зонтика». Также результат считается положительным или резко положительным.

Реакция может быть ложноположительной при протекании в организме человека тяжелых аутоиммунных заболеваний. Поэтому, если при пересдаче анализа реакция дает перекрест и результат отчитывается как ложноположительный, незамедлительно нужно обратиться к врачу для выяснения причины данной реакции.

Иногда этот метод принимают для подтверждения другого метода диагностики, основанного также на связывании антиген-антитело, называемого иммуноферментный анализ.

Подготовка к анализу

Чтобы не допустить ложноположительных результатов, к анализу нужно подготовиться заранее. Забор крови на данный анализ производится строго натощак и без употребления утром какой-либо жидкости. Нужно воздержаться от курения, хотя бы за час до сдачи анализа. Алкогольные напитки стоит исключить из рациона как минимум за сутки до анализа. Кровь на РНГА забирается из вены.

В настоящее время реакцию непрямой (пассивной) гемолитической агглютинации очень широко используют в медицинской лабораторной диагностике. Эта методика впервые была протестирована еще в 1965 году. И до сегодняшнего дня очень востребована. Она дает возможность не только определить, протекает ли в данный момент инфекционное заболевание у человека, но и на какой стадии оно находится.

Используют РНГА чаще всего для скрининга населения на наличие инфекционных заболеваний и для подтверждения положительных результатов, например, на сифилис. Основано это на том, что тест считается достаточно чувствительным и эффективным. Но при этом реакция проста в постановке и не требует много времени, результат можно получить уже в день сдачи крови.

Cергеева Екатерина Андреевна

[07-117]
Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

380 руб.

Выявление в сыворотке крови специфических антител к бледной трепонеме (Treponema pallidum), используемое для подтверждения результатов неспецифических тестов на сифилис, скрининга сифилиса, обследования контактных лиц и доноров крови.

Синонимы русские

Люэс, бледная трепонема.

Синонимы английские

Syphilis, passive hemagglutination test; Syphilis, indirect hemagglutination test; Treponema Pallidum Hemaglutination Assay, TPHA.

Метод исследования

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических (“нетрепонемных”), так и специфических (“трепонемных”) антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифические (“нетрепонемные”) и специфические (“трепонемные”). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к “трепонемным”, то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86  %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100  %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, “нетрепонемного” исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100  %.

Чувствительность РПГА и других “трепонемных” тестов превосходит чувствительность неспецифических (“нетрепонемных”) тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять “трепонемные” тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой “трепонемный” тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.

При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.

Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5  % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза “сифилис” необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Для чего используется исследование?

• Чтобы подтвердить диагноз “сифилис” при положительном результате неспецифического скринингового теста;
• для скрининга сифилиса;
• для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
• для исключения сифилиса у донора крови.

Когда назначается исследование?

При обследовании:

• пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием “сухого” рубца (третичный сифилис);
• лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
• донора крови;
• при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

• первичный, вторичный, третичный, а также скрытый сифилис (приобретенный и врождённый);
• беременность;
• ВИЧ-инфекция;
• гепатиты В и С;
• употребление инъекционных наркотиков;
• острый инфаркт миокарда;
• диффузные заболевания соединительной ткани;
• возвратный тиф;
• лептоспироз;
• клещевой боррелиоз;
• тропические трепонематозы (фрамбезия, беджель, пинта);
• воспалительные процессы, обусловленные сапрофитными трепонемами полости рта и гениталий;
• злокачественные новообразования;
• обширная травма и переломы;
• бактериальный эндокардит;
• туберкулез;
• инфекционный мононуклеоз;
• поствакцинальная реакция.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие сифилиса;
• первые 2-4 недели после инфекции T. pallidum.

Что может влиять на результат?

• Результат анализа может быть ложноотрицательным в течение первых 2-4 (до 6) недель после заражения.



Важные замечания

• Исследование не позволяет дифференцировать;
  • сифилис (T. pallidum) и другие трепонематозы (T. pallidumsubspeciespertenue, endemicum, carateum);
  • ранний и поздний сифилис.
• Исследование не предназначено для контроля лечения сифилиса.
• Результат анализа следует оценивать вместе с дополнительными анамнестическими, лабораторными и инструментальными данными.

Также рекомендуется

• Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр
• Treponema pallidum, IgM, титр
• Treponema pallidum, IgG, титр
• Treponema pallidum, IgG вликворе
• Treponema pallidum, антитела
• HIV 1, 2 Ag/Ab Combo (определение антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена p24)
• Вирусный гепатит B. Контроль активности вируса перед началом лечения
• Вирусный гепатит C. Анализы для первичного выявления заболевания. Обследование контактных лиц
• Интимный – оптимальный – анализ мазка у мужчин
• Интимный – оптимальный – анализ мазка у женщин
• Госпитализация в хирургический стационар
• Госпитализация в терапевтический стационар

Кто назначает исследование?

Дерматовенеролог, невролог, врач общей практики, эпидемиолог.

Литература

• French P, Gomberg M, Janier M, Schmidt B, van Voorst Vader P, Young H; IUST. IUSTI: 2008 European Guidelines on the Management of Syphilis. Int J STD AIDS. 2009 May;20(5):300-9.
• Seña AC, White BL, Sparling PF. Novel Treponema pallidum serologic tests: a paradigm shift in syphilis screening for the 21stcentury. Clin Infect Dis. 2010 Sep 15;51(6):700-8.
• Luger A. Diagnosis of syphilis. Bull World Health Organ. 1981;59(5):647-54.
• Holmes K.K. Sexually Transmitted Diseases / K.K. Holmes, P.F. Sparling, W.E. Stamm; 4th ed. – McGraw-Hill, 2008.