Серологические исследования на кишечные инфекции

[09-134]
Острые кишечные инфекции, скрининг (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus)

1920 руб.

Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.

Синонимы русские

ОКИ, ПЦР (кал).

Синонимы английские

Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Кал.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.

Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев “бактериологически неподтвержденной дизентерии”, особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).

В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является “золотым стандартом” в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Для чего используется исследование?

• Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
• для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).

Когда назначается исследование?

• При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
• при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
• при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

• присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus).

Причины отрицательного результата:

• отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus.



Важные замечания

• Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации.
• Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).

Также рекомендуется

• Yersinia pseudotuberculosis, ДНК [ПЦР]
• anti-Shigella flexneri 1-5, anti-Shigella flexneri 6, anti-Shigella sonnei
• Посев кала на патогенную флору (диз. группа и тифо-паратифозная группа)
• Посев кала на условно-патогенную флору с определением чувствительности к антибиотикам
• Анализ кала на цисты простейших
• Копрограмма
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Лейкоцитарная формула
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.

Литература

• Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2005. – 736 с.
• Gómez-Duarte O., Bai J., Newel E. Detection of E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1-9. PMCID: PMC2701628.

Анализы на кишечную инфекцию – распространенный вид лабораторного исследования, позволяющий выявить наличие патогенных микроорганизмов в желудочно-кишечном тракте.

Диагностический метод применяют при проявлении характерных симптомов кишечной инфекции, а также во время периодических медицинских осмотров. Данные анализы позволяют не только выявить морфологическую принадлежность возбудителей заболевания, но и определить чувствительность к различным группам антибиотиков.

Показания к исследованию

Анализы на наличие кишечной инфекции назначают в случаях проявления симптоматики, которая указывает на присутствие возбудителя бактериальной природы:

• кишечной палочки;
• стафилококка;
• сальмонеллы, провоцирующей развитие брюшного тифа.

На наличие того или иного возбудителя в желудочно-кишечном тракте укажут следующие симптомы:

При совокупности перечисленных характерных симптомов необходима срочная консультация врача инфекциониста, который назначит необходимые лабораторные исследования.

Как определяют

Анализы на кишечные инфекции, в том числе стафилококк и брюшной тиф – лабораторные методы исследования у детей и взрослых, которые позволяют выявить конкретного возбудителя инфекции и определить тактику дальнейшего лечения.

В качестве биоматериала для изучения применяют каловые массы. Однако, в случае диагностирования брюшного тифа используют сыворотку крови, т. к. исследование испражнений обладает малой чувствительностью и позволяет выявить возбудителя у 30-40% пациентов.

Наличие патогенной флоры в каловых массах определяют с помощью лабораторных методов, состоящих из 2 видов исследований:

• бактериологические;
• микроскопические.

Бактериологический анализ каловых масс считается наиболее точным методом для определения конкретного возбудителя инфекции. Для проведения исследования часть взятого материала помещают в специальные питательные среды, в условиях которых происходит активное размножение бактерий в течение 5 дней.

После окончания взращивания колоний определяют характер их роста и принадлежность к определенным видам инфекций. На выращенных колониях проводят тест на чувствительность к антибиотикам или бактериофагам. Стоимость анализа варьируется от 450 до 850 руб.

Микроскопические исследования проводят с помощью микроскопа. Для этого образец кала размешивают с водой, а затем образовавшуюся смесь по капле наносят на предметное стекло, где с помощью нативного материала определяют патологические элементы.

При диагностировании кишечной инфекции, вызванной стафилококками, применяют микроскопию кала, окрашенного по Граму.

Суть анализа заключается в окрашивании образцов биоматериала специальным набором красителей, с помощью которых определяют принадлежность бактерий к грамположительным или грамотрицательным. При наличии стафилококка в мазках будут выявлены грамположительные кокки. Стоимость исследования – от 580 руб.

В случаях, когда инфекция в кишечнике спровоцирован вирусом или простейшими микроорганизмами, анализ на кишечную группу может не обладать достаточной информативностью. Тогда проводят полимерную цепную реакцию (ПЦР-диагностику) кала – диагностический метод, позволяющий в течение 1 суток выявить или опровергнуть наличие желудочно-кишечной инфекции.

ПЦР относят к молекулярно-генетическому исследованию, при котором происходит выделение РНК/ДНК болезнетворных организмов и увеличение их численности с дальнейшим распознаванием. Стоимость комплексного анализа на определение главных возбудителей составляет 1200 руб. и выше.

К дополнительным методам исследования инфекции у детей и взрослых относят бак посев и серологическое исследование крови, позволяющее выявить антитела к возбудителям. Подобные анализы только косвенно указывают на наличие инфекционного процесса, поэтому не используются в качестве основного метода диагностирования.

Подготовка и проведение анализа

Анализы на кишечную инфекцию требуют тщательной подготовки, чтобы не допустить получения недостоверных результатов. Перед проведением исследования пациенты отказываются от приема препаратов, соблюдают специальную диету и правила сбора биологического материала.

Основные правила сбора кала распространены на все виды лабораторных исследований и считаются общепринятыми:

• Для сбора биоматериала используют только стерильную посуду – пластиковую тару, приобретенную в аптеке или стерилизованную стеклянную баночку.
• Сбор каловых масс для исследования осуществляют в утреннее время после проведения гигиены внешних половых органов. Если сдача анализа необходима ребенку, его предварительно подмывают и предлагают помочиться.
• После естественной дефекации кал собирают с чистой поверхности, чтобы избежать заселение материала посторонними микроорганизмами. Запрещено брать каловые массы из унитаза. Сбор материла у детей грудного возраста осуществляют с поверхности подгузника.
• Для исследования необходимо около 20 г каловых масс, взятых со средней части биоматериала.
• Присутствующие в кале гнойные выделения и слизь также собирают для проведения исследования.
• Для более точного результата, кал нужно доставить в течение 2 ч после сбора. При отсутствии такой возможности, собранный материал можно хранить в холодильнике не более 4 ч.

Если забор биоматериала производит медицинский сотрудник в условиях стационара, то процесс сопровождается следующими манипуляциями:

1. Пациента укладывают на кушетку в положении согнутых к животу ног.
2. Для сбора биологического образца используют стерильную пробирку с петлей, помещенной в специальный раствор.
3. С помощью петли проникают в прямую кишку пациента на глубину 4-5 см – у взрослых, и 2-3 см – у детей. Затем петлю извлекают и помещают в пробирку с раствором.

Собранный материал доставляют в лабораторию сразу после проведения всех манипуляций. Допускается хранение образца в пробирке в течение 24 ч при температуре 2-4°С.

Анализ на кишечные инфекции

Анализ на кишечные инфекции требует от пациента тщательной подготовки, чтобы избежать получение недостоверных результатов:

• За 7 дней до забора кала отказаться от приема антибактериальных препаратов и слабительных средств;
• 3а 3 дня до проведения исследования внести корректировки в питании, отказавшись от продуктов, провоцирующих брожение в кишечнике. К таким продуктам относят: бобовые, мясо и рыба, капуста, мучные и хлебобулочные изделия. Запрещено также употреблять алкоголь.
• В течение последних 3 суток перед сдачей кала не пользоваться ректальными суппозиториями.
• В день сбора кала не использовать промывные клизмы.

Собранный сразу после акта дефекации кал без примесей мочи в стерильной таре отправляют в лабораторию. Каловые массы засевают на твердые цветные среды. Если образец кала был собран на тампон в условиях стационара, его наносят на твердую среду, а затем рассеивают с помощью шпателя. Затем посевы отправляют в термостат и содержат при температуре 37°С в течение 24 ч.

Спустя сутки выращенные колонии осматривают с помощью микроскопа, изучая культурные признаки бактерий. Затем выявленные бактериологические колонии окрашивают по Граму для того, чтобы пересеять их на другие специфические среды для дальнейшего взращивания чистых культур возбудителя.

На 5-7 сутки исследования происходит идентификация выделенной чистой культуры с дальнейшим изучением биохимических свойств бактерий. Окончательные результаты анализов получают спустя неделю после сдачи материала.

Анализ на стафилококк

Развитие кишечной инфекции стафилококковой природы провоцирует золотистый стафилококк. Для выявления его наличия используют бактериологические и бактериоскопические методы исследования. Материалом для изучения являются каловые массы, сбор которых осуществляется после выполнения всех условий подготовки.

За 3 суток до проведения исследования пациентам необходимо отказаться от приема следующих групп препаратов:

• железосодержащие;
• энтеросорбенты;
• слабительные;
• антибиотики широкого спектра действий.

Биоматериал собирают в утреннее время после естественной дефекации и в течение 2-3 ч. доставляют в лабораторию в стерильной таре.

После того как образцы каловых масс попадают в лабораторию, их подвергают бактериоскопии с применением окрашивания по Грамму. О наличие стафилококковой инфекции будет свидетельствовать выявление кокков, расположенных группами по 2-3 бактерии в виде гроздьев винограда.

Далее проводят бактериологической исследование. Собранный биоматериал засеивают на 2 питательные среды – желточно-солевой и кровяной агар. Затем засеянные среды инкубируют в течение суток при температуре 37°С.

На вторые сутки оценивают характер роста колоний. На желточно-солевом агаре размещены стафилококковые колонии золотистого или белого цвета, с гладкой поверхностью и ровными краями. На кровяном агаре по периметру расположения колоний образуются зоны разрушения эритроцитов.

Высеянные колонии на обоих средах окрашивают по Граму и изучают с помощью микроскопии. На 3 день исследования определяют вид стафилококковой инфекции и ее чувствительность к антибиотикам.

Анализ на брюшной тиф

Возбудителем брюшного тифа являются бактерии рода Сальмонелла.

Для диагностики наличия инфекции в организме выбирают бактериологическое исследование, биоматериалом для которого выступает:

• сыворотка крови;
• каловые массы;
• урина;
• желчь;
• костный мозг.

Наибольшей информативностью в первую неделю заболевания обладает бактериологический анализ крови, забор которой осуществляется из вены.

Перед проведением диагностики пациенту необходимо пройти подготовку:

1. За 3 суток до сдачи анализа прекращают прием всех медикаментов.
2. В день сбора крови запрещено курить и употреблять спиртные напитки.
3. За 1 сутки до проведения исследования отказаться от приема острой, жирной пищи.
4. Анализ проводят натощак либо не раньше, чем через 4 ч. после последнего приема пищи.

Проведение исследование осуществляется поэтапно:

1. Взятую венозную кровь в объеме 15-20 мл засеивают на специальную среду Рапопорта в соотношении 1:10 (на 10 мл среды 1 мл крови).
2. Полученные посевы помещают в термостат при температуре 37°С на 18-24 ч.
3. Спустя сутки бактерии пересеивают на среду Левина. Бактерии подозрительного характера, имеющие черный или прозрачный цвет, повторно сеют на агар.
4. На образованной среде происходит распознавание сальмонелл по характерным признакам: способности расщеплять глюкозу с образованием кислоты.

В качестве дополнительного метода диагностики проводят общий анализ крови. На наличие в организме сальмонеллы, провоцирующей брюш