Среда ресселя кишечная палочка

Наибольший интерес из кишечно-тифозной группы бактерий представляют три основных рода: Esherichia, Salmonella, Shigella, которые являются возбудителями кишечных инфекции (коли-инфекция, брюшной тиф, паратифы, сальмонеллезы, дизентерия). Все бактерии этой группы имеют одинаковые морфологические и культуральные свойства: это грамотрицательные палочки, спор и капсул не образуют, сальмонеллы и эшерихии подвижные, шигеллы неподвижные, в МПБ дают равномерное помутнение, на пластинчатом МПА – бесцветные, полупрозрачные, округлые колонии с фестончатыми (сальмонеллы и эшерихии) и ровными (шигеллы) краями. Первичное распознавание бактерий кишечно-тифозной группы осуществляют на дифференциально-диагностических средах с содержанием лактозы – это среды Эндо, Левина, Плоскирева, Ресселя. Эшерихии разлагают лактозу до кислоты и газа, сальмонеллы и шигеллы не действуют на этот углевод.

Среда Эндо содержит лактозу, фуксин (индикатор), который в щелочной среде приобретает розовый цвет, а в кислой – красный. Эшерихии на среде Эндо дают малинового цвета колонии, сальмонеллы и шигеллы – бесцветные.

Среда Левина содержит лактозу и индикатор – эозинметиленовую синь, который в щелочной среде приобретает сиреневый цвет, а в кислой – темно-синий. Эшерихии на среде Левина дают темно-синие колонии, сальмонеллы и шигеллы – бесцветные. Среды Эндо и Левина используют для выделения чистой культуры эшерихий.

Среда Плоскирева (бактоагар Ж) содержит лактозу с индикатором – нейтральный красный( краситель) и дополнительные компоненты: соли желчных кислот, подавляющие рост эшерихий и бриллиантовый зеленый, подавляющий рост грампо- ложительной микрофлоры. Среда Плоскирева используется для выделения чистой культуры сальмонелл и шигелл, которые дают на этой среде бесцветные колонии. Эшерихии на среде Плоскирева дают красного цвета колонии.

Среда Ресселя содержит 1% лактозы, 0,1% глюкозы, индикатор Андреде. Среду готовят в виде скошенного агара, нижняя часть ее в виде столбика, а верхняя – в виде скошенной поверхности. Посев чистой культуры бактерий производят на скошенную поверхность и уколом в столбик среды. Эшерихии, ферментирующие оба углевода (глюкоза и лактоза), изменяют цвет всей среды. Сальмонеллы и шигеллы, ферментирующие один углевод (глюкоза), изменяют цвет столбика и скошенная поверхность среды Ресселя. Разрывы столбика среды свидетельствуют о газообразовании.

Коли-инфекция (эшерихиоз) (билет 28) – острая кишечная инфекция, вызываемая патогенными вариантами кишечной палочки (E.coli), протекающая с синдромом гастроэнтерита и гастроколита.

E.coli имеет три антигена: соматический О-антиген (термостабильный), капсульный К-антиген (термолабильный), жгутиковый Н-антиген (термолабильный). Капсульный К-антиген неоднороден, имеет три фракции -A,B,L. По О-антигену эшерихии делятся на О-группы. Внутри каждой О-группы бактерии различаются по Н- и К-антигену. Патогенные варианты кишечной палочки содержат ОК(В)-антиген. Принято подразделять патогенные для человека кишечные палочки на четыре группы: энтеропатогенные (ЭПКП), энтероинвазивные (ЭИКП), энтеротоксигенные (ЭТКП) и энтеро-геморрагические (ЭГКП) кишечные палочки.

Эпидемиология

Источник инфекции – больные, бактерионосители. Пути передачи инфекции – алиментарный (фекально-оральный), иногда контактно-бытовой. Факторы передачи – молочные продукты, вода. Входные ворота – слизистая жкт.

Патогенез

Инкубационный период не более трех дней. В этот период возбудитель проникает с пищей в жкт, где разрушается с выделением и накоплением эндотоксина. ЭПКП и ЭТКП вызывают интоксикацию, лихорадку, слабость, тошноту, рвоту и т.д. ЭИКП вызывает дизентериеподобную коли-инфекцию, размножается внутри эпителиальных клеток с продукцией эндотоксина, с последующим разрушением и отторжением эпителиальных клеток, формированием поверхностных микроязв. ЭГКП вызывают геморрагический колит с тяжелыми осложнениями в виде тромбоцитопенической пурпуры.

Клиника

Клинически – слизисто-кровянистый стул. ЭПКП (возбудитель коли-энтеритов), ЭТКП (возбудитель холероподобных заболеваний) размножаются на поверхности эпителиальных клеток. Патологический процесс при коли-энтеритах (ЭПКП) связан с действием эндотоксина, а ЭТКП (холероподобные заболевания) образует еще и энтеротоксин.

Постинфекционный иммунитет группоспецифический, слабонапряженный.

Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал – испражнения, рвотные массы остатки пищевых продуктов.

1. Микроскопический метод – не применяется, так род определить невозможно.

2. Бактериологический метод: Первый день – испражнения, рвотные массы засевают на среды Эндо и Левина.

Второй день – исследуют крупные изолированные колонии малинового цвета на среде Эндо и темно-синие на среде Левина. С каждой чашки исследуют не менее 10 колоний в реакции агглютинации с комплексной ОК(В)-коли сывороткой для выявления патогенных вариантов кишечной палочки. Агглютинирующую колонию накапливают на среде Ресселя. Третий день – отмечают изменение всего столбика цвета среды Ресселя. Для определения серотипа ставится реакция агглютинации с типовыми ОК(В)-коли сыворотками. При наличии агглютинации с одной из сывороток ставят развернутую реакцию агглютинации с этой же сывороткой.С живой культурой для установления В-антигена и с культурой, прогретой в течение 2 ч при 1000°С, для установления О-антигена.

3. Серологический метод – не применяется.

4. Аллергический метод – не применяется.

5. Биологический метод – не применяется.

Лечение и профилактика

Специфическая профилактика коли-инфекций не разработана. Этиотропная терапия – ампициллин, норфлоксацин, амоксициллин.

Сальмонеллы (сальмонеллезы, брюшной тиф, паратифы)

Сальмонеллез (билет 26, 44)– острая кишечная инфекция, характеризующаяся преимущественным поражением слизистой желудочно-кишечного тракта. Возбудители сальмонеллеза относятся к семейству Enterobacteriaceae, роду Salmonella. Насчитывается более 2200 видов сальмонелл. Наиболее частые возбудители сальмонеллезов: S.typhimurium, S.enteritidis, S.choleraesuis, S.heidelberg, S.anatum, S.newsport, S. derby.

Эпидемиология

Источник инфекции – больные люди и животные (крупный рогатый скот, свиньи, овцы, лошади, водоплавающие птицы), бактерионосители. Путь передачи инфекции – алиментарный (пищевой и водный). Факторы передачи инфекции – пищевые продукты (мясо инфицированных животных или птиц, их яйца). Инфицирование мяса может происходить при жизни самого животного во время его болезни, при разделке туш животных – бактерионосителей (обсеменение мяса содержимым кишечника при его ранении), в процессе транспортировки, хранения, неправильной кулинарной обработки. При тесном общении с больным человеком или животными возможен контактно-бытовой путь передачи инфекции.

Входные ворота – слизистая желудочно-кишечного тракта. Сальмонеллы относительно устойчивы к различным факторам внешней среды: к солению, копчению и действию кислот. Для разрушения бактерий требуется качественно проводимая термическая обработка. Так, для полной инактивации сальмонелл, находящихся в куске мяса массой 400 г, необходимо варить его не менее 2,5 часа.

Патогенез

Инкубационный период в среднем 12-24 часа. За этот период сальмонеллы из ротовой полости проникают в ЖКТ, достигают тонкого кишечника. Преодолев эпителиальный барьер тонкой кишки, проникают в толщу тканей, захватываются макрофагами, где не только размножаются, но и частично погибают с освобождением эндо токсина. Эндотоксин поражает нервно-сосудистый аппарат кишечника и повышает проницаемость клеточных мембран, что способствует дальнейшему распространению сальмонелл по лимфатическим путям и занесению их в мезентериальные лимфатические узлы. Эндотоксин оказывает как местное действие, так и способствует развитию симптомов общей интоксикации организма. Инфекционный процесс на этой стадии заболевания может завершиться (локализованная форма). При тяжелом течении возможна кратковременная бактериемия.

Генерализованная форма сальмонеллеза возникает при глубоком нарушении барьерной функции лимфатического аппарата кишечника и сопровождается длительной бактериемией, в результате чего сальмонеллы заносятся в различные внутренние органы, вызывают в них формирование вторичных гнойных очагов (септикопиемия).

Повышение секреции жидкости в кишечнике связано с активацией аденилатциклазы и гуанилатциклазы энтероцитов сальмонеллезным энтеротоксином и последующим нарастанием внутриклеточной концентрации биологически активных веществ (цАМФ, цГМФ и др.). Это ведет за собой поступление в просвет кишечника большого количества жидкости, калия, натрия и хлоридов.

КлиникаУ больных развиваются рвота и понос, интоксикация организма. Появившиеся симптомы больные четко связывают с приемом недоброкачественной пищи. Часто появляются симптомы обезвоживания организма. Постинфекционный иммунитет при сальмонеллезе малонапряженный и кратковременный.

Лабораторная диагностика.

Исследуемый материал – рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь, кровь.

1. Микроскопический метод – имеет ориентировочное значение. Морфологически сальмонеллы представляют собой грамотрицательные палочки с закругленными концами, подвижны, перитрихи, спор и капсул не образуют.

2. Бактериологический метод:

Первый день – посев исследуемого материала (рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, желчь) на плотные дифференциальные питательные среды Левина, Плоскирева, висмут-сульфит агар. Если исследуемым материалом является кровь, то посев производят на жидкие питательные среды: 10% желчный бульон или среду Раппорт. Посевы выдерживают в термостате при 37°С в течение суток. Забор исследуемого материала следует производить до начала лечения.

Второй день. На среде Левина и Плоскирева, отмечают бесцветные колонии сальмонелл, не разлагающие лактозы. Бактерии из бесцветных колоний и из жидких питательных сред исследуют в окрашенных по Граму мазках на чистоту и в «висячей капле» на подвижность, пересевают на скошенный агар и среду Ресселя. Посевы ставят в термостат при 37°С на 24 часа.

Третий день. Проверяют чистоту культуры со скошенного агара в мазках по Граму. Отмечают характер роста на среде Ресселя: сальмонеллы, разлагающие только глюкозу, дают двухцветное изменение столбика среды. Идентификация возбудителя проводится в реакции агглютинации на стекле со смесью монорецепторных групповых сальмонеллезных 0 -сывороток с целью определения серогруппы выделенной сальмонеллы. При положительном результате по таблице Кауфмана – Уайта определяют, какие виды сальмонелл относятся к данной группе. Затем ставят реакцию агглютинации на стекле с видовыми монорецепторными сальмонелллезными Н-сыворотками, относящимися к данной группе (см. таблицу в учебнике).

3. Серологический метод – реакция непрямо гемагглютинации( РИГА) дает положительные результаты на 5-й день болезни. Специфические антитела определяются в диагностическом титре 1:200. Реакцию агглютинации (РА) ставится на 7-8-й день заболевания и считается положительной, если специфические антитела определяются при разведении сыворотки больного не менее 1:200 (диагностический титр).

4. Биологический метод не применяется.

5. Аллергический метод – не применяется.

Сальмонеллезы (пищевые токсикоинфекции) необходимо дифференцировать с пищевыми интоксикациями, причиной которых является экзотоксин, выделяемый такими микроорганизмами, как стафилококк, палочка ботулизма, палочка перфрингенс тип F (см таблицу).

Таблица дифференциальной диагностики пищевых токсикоинфекций и пищевых интоксикаций

Дифференциальный признак	Пишевые токсикоинфекции	Пищевые интоксикации
1 .Возбудитель	Обладает слабой патогенностью (имеет слабый эндотоксин). Это нормальные обитатели кишечника человека и животных: кишечная палочка, протей, энтерококк, сальмонеллы.	Возбудитель выделяет экзотоксин, не разрушающийся пищеварительными ферментами. Это: палочка ботулизма, стафилококк, палочка перфрингенс тип F.
2.Условия развития заболевания	Возбудитель предварительно размножается в пищевом продукте.	Возбудитель предварительно размножается в пищевом продукте с выделением и накоплением экзотоксина.
З.Виды пищевых продуктов	Мясо здоровых и больных животных при разделке туш и ранении кишечника обсеменяется его содержимым (кишечная палочка, энтерококк, сальмонеллы). Овощи и фрукты длительнохранившиеся (часто инфицированы протеем).	1 .Консервы домашнего приготовления: мясные для палочек перфрингенс типа F, рыбные (особенно осетровые), овощные (чаще грибные) для палочки ботулизма. 2.Продукты, содержащие сахар, масло, молоко для стафилококка (крем, торты, мороженое, молоко, кефир и т.д.).
4.Патогенез	Возбудитель в большом количестве с пищевым продуктом поступает в желудок, где разрушается с выделением эндотоксина, который раздражает слизистую желудка и кишечника, нарушая ее проницаемость, проникает в кровь, вызывая бактериемию.	Экзотоксин (энтеротоксин стафилококка и палочки перфрингенс типа F; энтеротоксин и нейротоксин палочки ботулизма) в большом количестве с пищевым продуктом поступает в желудок, раздражая слизистую желудка и кишечника. Нейротоксин палочки ботулизма поражает ядра черепномозговых нервов.
5.Клиника.	Инкубационный период 68 час. Это время требуется для накопления эндотоксина. Характерные клинические признаки: лихорадка – не менее 38°С, рвота, жидкий стул.	Инкубационный период 1-2 часа для стафилококка и палочки перфрингенс типа R 2-4 дня для палочки ботулизма. Характерные клинические признаки: температура тела нормальная или субфебрильная (не более 38°С), рвота, жидкий стул. Для ботулизма характерна еще клиника поражения черепно-мозговых нервов: шум в ушах, двоение в глазах, нарушение глотания, речи и т.д.
6. Методы лабораторной диагностики.	Микроскопический – ориентировочный. Бактериологический – ведущий. Серологический – не применяется. Аллергический – не применяется. Биологический – не применяется.	Микроскопический Бактериологический Серологический – не применяется Аллергический – не применя- етя Биологический – биопробы на животных с целью обнаружения и идентификации экзото- токсина.
7.Исследуемый материал.	Пищевые продукты, рвотные массы, промывные воды желудка, кровь.	Пищевые продукты, рвотные массы, промывные воды желудка.
8.Питательные среды.	Среда Плоскирева, Вис- мут-сульфит-агар для выделения сальмонелл. Среда Эндо, Левина для выделения кишечной палочки. ЖСА для выделения стафилококка. Посев по Шукевичу для выделения протея.	ЖСА для выделения стафилококка. Среда Китта -Тароцци для выделения палочки ботулизма перфрингенс типа F.
9.Специфическая терапия.	Нет.	Антитоксические сыворотки.

Дата добавления: 2017-02-28; просмотров: 918 | Нарушение авторских прав | Изречения для студентов

Описание

Среда Ресселя-ГРМ Оболенск — Цена за упаковку 0,25 кг

Среда Ресселя-ГРМ Оболенск — плотная цветная дифференциально-диагностическая среда, используемая для идентификации микробов кишечной группы. Среду Расселла можно готовить на любой основе: мясном или казеиновом переваре по Хоттингеру (соответственно разведенных в 5—6 или 4—5 раз), дрожжевом аутолизате (профильтрованном и разведенном в 2 раза), мартеновском пептоне и др. К расплавленному и охлажденному до 50—60° 1% агару, приготовленному на любой питательной основе, добавляют 4% индикатора Андраде, устанавливают рН=7,3—7,4 и после этого прибавляют 1% лактозы и 0,1% глюкозы. Готовая среда Расселла прозрачна и имеет слабо-желтую окраску. Среду разливают в пробирки по 10—15 мл и стерилизуют автоклавированием при t° 112° в течение 20 мин. либо текучим паром 2—3 дня по 30 мин., после чего дают застыть таким образом, чтобы нижняя часть оставалась столбиком, а верхняя была скошена.

Посев на Среда Ресселя-ГРМ производят глубоким уколом в столбик и рассевом штрихом на поверхности скошенной части. Посевы помещают в термостат при t° 37° и на следующие сутки учитывают результаты. При росте бактерий, сбраживающих глюкозу (возбудители дизентерии и тифо-паратифозных инфекций), происходит покраснение среды только в глубине столбика по уколу. Образование газа регистрируется по пузырькам, накапливающимся в толще среды, что в случае интенсивного газообразования приводит к разрыву столбика. При росте бактерий, сбраживающих лактозу (кишечная палочка), происходит резкое покраснение среды как по уколу, так и по штриху на скошенной поверхности.

Существуют различные модификации среды Расселла, в которых глюкозу и лактозу заменяют соответственно маннитом и сахарозой или готовят лактозо-сахарозо-маннитную среду; в определенных случаях к среде добавляют еще хлористый свинец для регистрации образования сероводорода. В качестве индикатора можно использовать также бромтимоловый синий, розоловую кислоту, феноловый красный, а также 0,1% спиртового раствора (1,6%) бромкрезолового пурпурного. Иногда применяют сухую среду типа среды Расселла, а также Среда Ресселя-ГРМ, составленную из сухих сред Гисса.

Среда Ресселя-ГРМ Оболенск

Среда Ресселя-ГРМ Оболенск предназначена для первичной идентификации энтеробактерий по признаку ферментации лактозы и глюкозы.

Представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок светло-желтого цвета.

Состав:

Панкреатический гидролизат рыбной муки, натрия хлорид, глюкоза, лактоза, бромтимоловый синий, агар.

Приготовление:

Препарат в количестве, необходимом для приготовления конкретной серии питательной среды, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят 2 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по 6-8 мл в стерильные пробирки и стерилизуют автоклавированием в течение
20 мин при температуре 112 °С. Среду в пробирках скашивают, оставляя столбик высотой 15-20 мм.

Готовая среда имеет зеленый цвет.

рН 7,2±0,2

Стерильную среду можно использовать в течение 3-х недель при условии ее хранения при температуре
2-8 C или в течение 3 суток при температуре хранения 18-25 °С (хранить пробирки следует в защищенном от света месте).

Принцип действия:

Среда Ресселя-ГРМ содержит углеводы, которые, разлагаясь с образованием кислоты, вызывают изменение цвета индикатора бромтимолового синего из зеленого в желтый. При подщелачивании индикатор дает синее окрашивание.

Проведение анализа:

Исследования образцов проводятся по соответствующим Методическим указаниям и ГОСТам.

Исследуемую культуру бактериологической петлей засевают в пробирку со средой уколом в столбик. Инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 18-20 ч.

Контроль качества:

Тест-штамм	Наблюдаемый эффект
Shigella flexneri I a 8516	Изменение цвета столбика среды в желтый и посинение ее скошенной части
Salmonella paratyphi A-225	Изменение цвета столбика среды в желтый с образование газа и посинением скошенной части среды
Alcaligenes faecalis 415	Изменение цвета всей среды в синий или посинение ее скошенной части
Escherichia coli 055 К 59 № 339	Изменение цвета всей среды в желтый с образование газа в столбике