Титр бактерий группы кишечной палочки
Оглавление темы “Санитарно-микробиологическое исследование почвы. Микрофлора водоемов.”: Индикаторы загрязнения. Бактерии группы кишечной палочки.Между группами санитарно-показательных микроорганизмов нет чётко очерченных границ. Некоторые микроорганизмы являются показателями как фекального, так и орального загрязнения. Некоторые — показателями процессов самоочищения. В связи с этим все СПМ расценивают как индикаторы биологического загрязнения. • Группа А санитарно-показательных микроорганизмов. Включает обитателей кишечника человека и животных. Микроорганизмы расценивают как индикаторы фекального загрязнения. В нее входят БГКП — эшерихии, энтерококки, протеи, сальмонеллы. Также в группу А включены сульфитвосстанавливающие клостридии (Clostridium petfringens и др.), термофилы, бактериофаги, бактероиды, синегнойная палочка, кандиды, акинетобактеры и аэромонады. • Группа В санитарно-показательных микроорганизмов. Включает обитателей верхних дыхательных путей и носоглотки. Микроорганизмы расценивают как индикаторы орального загрязнения. В неё входят зеленящие, а- и (3-стрептококки, стафилококки (плазмокоагулирующие, лицитиназа-положительные, гемолитические и антибиотикоустойчивые; в некоторых случаях также определяют вид золотистого стафилококка). • Группа С санитарно-показательных микроорганизмов. Включает сапрофитические микроорганизмы, обитающие во внешней среде. Микроорганизмы расценивают как индикаторы процессов самоочищения. В неё входят бактерии-протеолиты, бактерии-аммонификаторы и бактерии-нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, бделловибрионы и сине-зелёные водоросли.
Основные группы санитарно-показательных микроорганизмовК основным санитарно-показательным микроорганизмам относят БГКП, энтерококки, протеи, сальмонеллы, Clostridium perfringens, термофильные бактерии и бактериофаги энтеробактерий (колифаги). Бактерии группы кишечной палочкиКишечная палочка положила начало всей группе СПМ. В состав БГКП включены различные представители семейства Enterobacteriaceae. В зависимости от цели и объекта исследования к санитарно-показательным БГКП предъявляют различные требования. Их условно разделяют на три подгруппы и при различных обстоятельствах используют факт их наличия для бактериологической характеристики объекта или субстрата. Подгруппа I кишечной палочки включает БГКП, которые пытаются выявить, но которых не должно быть при исследовании объектов и субстратов, «чистых» по своей природе или ставших чистыми в результате их обработки (например, термической). В группу объектов, обладающих такими свойствами, входят следующие. Питьевая (артезианская, водопроводная хлорированная, колодезная) и дистиллированная вода (взятая из дистиллятора или трубопровода). Термически обработанные пищевые продукты (котлеты, колбасы, рыба и т.д.). Анализируют пробы, отобранные из толщи продукта. Молоко (взятое из пастеризатора до поступления в молокопроводы), супы, соусы, компоты, вторые блюда (отобранные из котлов). Смывы, отобранные при проведении контроля эффективности дезинфекционной обработки в положенные сроки (не ранее 45 мин и не позднее 1 ч после обработки). Бактерии этой подгруппы кишечной палочки ферментируют лактозу и глюкозу или только глюкозу до газа при 37 °С и не проявляют оксидазную активность. В эту подгруппу входят Escherichia га//, клебси-еллы, цитробактеры, энтеробактеры и другие представители семейства Enterobacteriaceae. Их наличие допускается в объектах, не относящихся к разряду «чистых». Подгруппа II кишечной палочки включает БГКП, указывающие на неопределённое по времени фекальное загрязнение. Микроорганизмы сбраживают лактозу и глюкозу до кислоты и газа при 43-44,5 °С. В эту подгруппу входят бактерии (Е. coli, клебсиеллы, цитробактеры, энтеробактеры и др.), сохранившие способность к газообразованию при повышенном температурном режиме. Подобные требования предъявляют к БГКП при невозможности уберечь субстрат от загрязнения. При этом следует ограничиться определением лишь показателей эпидемиологического неблагополучия. К таким объектам относят: воду открытых водоёмов, сточные воды, почву и все пищевые продукты, для которых высок риск обсеменения после термической обработки. В подобных случаях исследуют твёрдые пищевые продукты (поверхностный слой), жидкие пищевые продукты, вторые и третьи блюда на раздаче, смывы с оборудования и посуды. Посевы культивируют при 43-44,5 °С. Е. coli дифференцируют от других бактерий по способности ферментировать лактозу и глюкозу или только глюкозу. Подгруппа III кишечной палочки включает БГКП, указывающие на свежее фекальное загрязнение. Отличительная особенность бактерий этой группы — способность расщеплять лактозу до газа при 43-44,5 “С. – Также рекомендуем “Бактерии рода Enterococcus. Бактерии рода Proteus.” |
Источник
Санитарно-бактериологическое исследование воды – Ф. К. Черкес
Исследованию подлежит вода:
1) централизованного водоснабжения;
2) из колодцев различного типа;
3) открытых водоемов (рек, озер, морей);
4) плавательных бассейнов;
5) сточных вод.
Примечание. Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором (гипосульфитом).
Отбор проб воды. Из открытых водоемов воду берут с помощью специальных бутылей или батометров, снабженных грузилами. Пробу воды рекомендуют брать на глубине 10-15 см от поверхности (так как поверхность подвергается воздействию атмосферных факторов) и на расстоянии 1,5 м от берега (вода у самого берега может быть загрязнена микрофлорой почвы).
Для отбора проб водопроводной воды используют стерильные флаконы вместимостью 500 мл, закрытые ватно-марлевыми пробками и покрытые бумажными колпачками.
Кран предварительно обжигают тампоном, смоченным спиртом, после чего воду спускают в течение 10-15 мин и набирают во флаконы. Заполненные флаконы закрывают стерильными пробками.
Примечание. Исследуют 333 мл воды (табл. 54).
Таблица 54. Эмпирическая таблица ГОСТ 16963-73
В распределительной сети водопровода отбор проб воды осуществляют в зависимости от количества населения, проживающего в зоне обслуживания.
Стандартные методы исследования регламентированы для воды центрального водоснабжения (ГОСТ 18963-73) и предусматривают:
1. Определение общего числа микроорганизмов (в 1 мл исследуемой воды должно быть не более 100).
2. Определение коли-индекса и коли-титра (коли-индекс 3, коли-титр 333 и выше; для Москвы и Ленинграда коли-индекс не более 2, а коли-титр более 500).
3. Исследование по эпидемиологическим показаниям на патогенную микрофлору (патогенных микроорганизмов не должно быть обнаружено).
Определение общего числа бактерий
Согласно ГОСТу 18963-73 общее число бактерий – это то количество микроорганизмов, которое содержится в 1 мл исследуемой воды, способных в течение суток при температуре 37° С образовывать колонии, видимые невооруженным глазом (или при увеличении с помощью лупы).
Первый день исследования
При исследовании водопроводной воды засевают 2 чашки. В одну из них вносят 1 мл неразведенной воды, в другую 1 мл воды, разведенной в 10 раз (т. е. 0,1 мл исходной пробы).
При исследовании более загрязненной воды засевают 1 мл воды, разведенной в 100 раз. Это соответствует 0,01 и 1 мл .воды, разведенной в 1000 раз (0,001 мл) и т. д. Для получения таких объемов готовят последовательно десятикратные разведения, по 1 мл каждого разведения вносят в чашку и заливают тонким слоем (12-15 мл) растопленного и остуженного до 45° С питательного агара. Для равномерного распределения исследуемой воды залитые агаром чашки перемешивают путем вращения их. После застывания агара посевы ставят в термостат и инкубируют при температуре 37° С 24 ч.
Второй день исследования
Чашки с посевами вынимают из термостата и подсчитывают число выросших колоний. Учитывают только те чашки, где число колоний находится в пределах 30-300. Если колоний немного, их подсчитывают невооруженным глазом или при помощи лупы.
Если колоний много, то подсчет можно вести с помощью специального прибора для счета микробных колоний (рис. 54).
Рис. 54. Прибор для счета колоний микроорганизмов. 1 – столик для чашки Петри; 2 – игла с пружинным устройством; 3 – показатель счетчика; 4 – тумблер для включения импульсного счетчика; 5 – тумблер для включения лампы освещения счетчика
Подсчитанное количество колоний умножают на разведение и узнают число микробов в 1 мл исследуемой воды.
Определение БГКП
Наличие БГКП (бактерий группы кишечной палочки) является показателем фекального загрязнения, интенсивность которого характеризуют:
Коли-индекс – количество кишечных палочек, обнаруженных в 1 л воды.
Коли-титр – наименьшее количество воды, в котором обнаруживают присутствие кишечной палочки*.
* ()
Для выявления в воде БГКП можно пользоваться двумя методами: титрационным (бродильным) и методом мембранных фильтров.
Титрационный метод
Для исследования воды используют среду накопления глюкозопептонную (ГПС) среду Эйкмана с индикатором и бродильными трубками. Среда готовится концентрированной (в 10 раз) и нормальной концентрации – для посева 1 мл воды.
Первый день исследования
Исследуемую воду засевают по 100 мл в 3 колбы, по 10 мл в 3 пробирки (с концентрированной средой) и по 1 мл в 3 пробирки (со средой нормальной концентрации) – всего 333 мл. Посевы инкубируют в термостате при 37° С 24 ч.
Второй день исследования
Вынимают посевы из термостата и просматривают их.
При наличии помутнения в колбах или пробирках из них производят посев петлей на сектора среды Эндо в чашках Петри. Посевы инкубируют в термостате при 37° С.
Третий день исследования
Вынимают чашки из термостата. Из подозрительных колоний делают мазки. При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазную активность. Положительная проба на оксидазу дает право дать отрицательный ответ.
Проба на оксидазу. 1-й способ: со среды Эндо снимают петлей 2-3 колонии каждого типа и наносят на поверхность фильтровальной бумаги, смоченной диметилпарафенилендиамином. Положительная реакция характеризуется посинением штрихов, сделанных из колоний.
2-й способ: реактив можно нанести на изолированную колонию на среде Эндо (красная колония – синеет) (рис. 55).
Рис. 55. Определение коли-индекса воды титрационным методом
Отрицательная проба на оксидазу свидетельствует о наличии в воде БГКП. В этом случае вычисляют коли-индекс и коли-титр с помощью стандартных (эмпирических) таблиц ГОСТа 16963-73 (см. табл. 54).
Эти таблицы предусматривают любую возможную комбинацию объемов посева, из которых выделена кишечная палочка.
Метод мембранных фильтров
Для фильтрации воды можно использовать воронку Гольдмана вместимостью 700-800 мл.
Первый день исследования
В воронку смонтированного и простерилизованного фильтровального прибора Зейтца наливают отмеренный объем исследуемой воды. С помощью насоса создают вакуум в приемном сосуде (обычно воду фильтруют через фильтры № 2 и 3). По окончании фильтрации стерильным или обожженным в огне пинцетом снимают фильтр и накладывают его на среду Эндо в чашке Петри так, чтобы поверхность с осевшими на ней микробами была обращена вверх (на одну чашку можно помещать 3-4 мембранных фильтра).
Посевы инкубируют в термостате при температуре 37° С 18-24 ч.
Второй день исследования
Чашки с посевами (фильтрами) вынимают из термостата. Отсутствие подозрительных колоний дает право дать отрицательный ответ.
Учету подлежат все красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму (рис. 56).
Рис. 56. Определение коли-индекса воды методом мембранных фильтров
При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Положительная оксидазная проба дает право дать отрицательный ответ. При отрицательной оксидазной пробе производят посев на полужидкую среду с глюкозой и индикатором или на среду ГПС с бродильными трубками – для выявления ферментации углевода до кислоты и газа. При наличии кислоты и газа вычисляют коли-индекс. Например, на всех фильтрах, находящихся на среде Эндо, выросло 3 колонии, пропущено через фильтр было 300 мл воды.
Расчет. 300 мл – 3 колонии
1000 мл – х
х = 10; коли-индекс 10
Примечание. Титрационный метод более точный и может быть использован при наличии в воде примесей. Метод мембранных фильтров экономичнее и дает возможность дать ответ на 2-й день.
Выявление свежего фекального загрязнения
Для определения наличия в воде свежих фекальных кишечных палочек производят посев воды (3-х объемов) на лактозопептонную среду с борной кислотой. Инкубируют при 43° С 24 ч. Наличие кислоты и газа свидетельствует о свежем фекальном загрязнении.
По эпидемиологическим показаниям в воде определяют сальмонеллы, шигеллы, энтеровирусы.
Примечание. Общепринятым дополнительным показателем фекального загрязнения питьевой воды являются энтерококки. При проведении бактериологического исследования определяют все группы энтерококков, хотя санитарное значение имеют преимущественно фекальные стрептококки, обнаружение которых является показателем свежего фекального загрязнения.
Контрольные вопросы
1. Какова основная задача санитарной микробиологии?
2. Что такое санитарно-показательные микроорганизмы?
3. Что такое коли-индекс и коли-титр?
4. Какие Вы знаете методы определения БГКП?
Задание
Определите общее число микробов в исследуемой пробе воды. Среда ГПС (Эйкмана).
Питательные среды
ГПС (Эйкмана) концентрированная. В 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г хлорида натрия. Нагревают смесь до кипения, фильтруют, прибавляют 100 г глюкозы, устанавливают рН 7,4-7,6 и разливают по 10 мл в колбы вместимостью 250 мл, по 1 мл в 3 пробирки (концентрированной среды) и по 1 мл в 3 пробирки со средой нормальной концентрации (во всех емкостях среду до нужной концентрации доводят стерильной водой).
Примечание. При исследовании особенно загрязненных вод делают большие разведения (например, 10-6, 10-7 и т. д.).
Источник
Для пастеризованного молока и сливок, молока с наполнителями, кефира, кумыса, ацидофильных напитков, простокваши, ряженки и других кисломолочных продуктов и напитков с наполнителями и без наполнителей определение цитратотрицательных кишечных палочек (коли-титр) выполняют п9 табл. 165. [c.356]
Для определения титра кишечной палочки (титра коли) применяют метод Эйкмана, заключающийся в том, что определяют наименьшее количество воды, которое вызывает брожение в среде Эйкмана, а следовательно, содержит одну кишечную палочку. В настоящее время для определения титра кишечной палочки применяют также метод фильтрации пробы воды через мембранный фильтр и затем проращивают фильтр на среде Эндо. [c.228]
Вследствие приспособленности к существованию в кишечнике человека кишечная палочка отличается от других представителей нетипичных молочнокислых бактерий способностью вызывать брожение при 43—45°, причем сбраживать она может не только сахара, но и спирты. Поэтому в состав питательной среды, используемой для первого этапа определения коли-титра, вводится в качестве единственного источника углерода многоатомный спирт маннит. Таким образом, сразу исключаются из учета многие, не разлагающие маннит бактерии, которые могут быть приняты за кишечную палочку при постановке анализа на лактозе или глюкозе. Посевы помещают на 24 час в термостат при температуре 44°. [c.167]
Второй этап в определении коли-титра состоит в том, что из тех посевов, где имеются явные признаки брожения (помутнение среды, образование кислоты и газа) делают высев на плотную питательную среду. Чаще всего используется фуксин-сульфитный агар (среда Эндо), в состав которой входит лактоза, основной фуксин и сернистокислый натрий. Готовая, застывшая в чашках среда имеет серовато-розоватый цвет, так как фуксин обесцвечивается и находится в лейкоформе. При выращивании кишечной палочки содержащаяся в среде Эндо лактоза сбраживается с образованием альдегида, который, взаимодействуя с обесцвеченным фуксином, переводит его в окрашенную и придает выросшим колониям ярко-красный цвет с металлическим оттенком. Таким образом, назначение бродильной пробы, являющейся первым этапом определения коли-титра, состоит в том, чтобы выявить присутствие кишечной палочки в определенных объемах воды, засеваемых на жидкие среды. Второй этап— высев на плотную диагностическую среду (среда Эндо) — [c.167]
Определение титра кишечной палочки (коли-титр). Важное значение при оценке молока имеет определение титра кишечной палочки обитателя кишечника человека и животных. Бактерии этой группы указывают на фекальное загрязнение молока. Бактерии группы кишечной палочки могут вызывать вспучивание сыра на первых этапах его созревания. [c.156]
Количество бактерий в сточных водах бывает довольно значительное. Оно может достигнуть многих миллионов в 1 мл. Объем бактериальной массы (содержащей 85% воды) при количестве 100 млн. бактерий в 1 мл составляет 0,04% от объема сточных вод. Наличие большого количества бактерий в сточных водах характеризует степень их загрязненности. Однако этот показатель не является исчерпывающим. Во-первых, могут быть очень загрязненные воды, не имеющие бактерий, но содержащие токсичные вещества, во-вторых, помимо патогенных бактерий, бывают и сапрофитные, т. е. полезные. Поэтому, кроме определения количества бактерий в мл сточных вод, важно знать, какое количество кишечных палочек (бактерий коли ) присутствует в сточных водах. Наличие кишечных палочек в воде еще не говорит о зараженности ее инфекционными началами, например брюшного тифа. Но факт обнаружения кишечной палочки свидетельствует о нахождении в воде выделений человека и животных, что является отрицательным санитарным показателем. Бактериальную загрязненность сточных вод характеризуют величиной коли-титра, т. е. наименьшим объемом воды в мл, ъ котором содержится одна кишечная палочка. Так, если коли-титр равен 10, то это значит, что в 10 лгл найдена 1 кишечная палочка при коли-титре, равном 0,001, в 1 мл обнаруживается 1000 кишечных палочек. Коли-индекс означает количество кишечных палочек в 1 л жидкости. В сточных водах коли-титр может быть 0,000001 и даже меньше. [c.227]
Выращивание колоний при исследовании водопроводной воды производится при 37°, в то время как при определении коли-титра кишечные палочки выращиваются при 44 . Это объясняется тем, что развитию кишечной палочки из водопроводной воды, подвергшейся в процессе очистки и обеззараживания действию ряда угнетающих факторов, температура 44° не благоприятствует в этом случае кишечная палочка лучше растет при более низкой температуре. [c.168]
Определение кишечной палочки основано на ее способности, в отличие от других бактерий, разлагать сахар и спирты при определенной температуре [104—108]. Количественно присутствие ее характеризуют коли-ин-дексом — числом кишечных палочек, находящихся в 1 л воды, или коли-титром, который численно равен объему воды в миллилитрах, содержащему одну кишечную палочку. [c.48]
Определение коли-титра (см. 14.1.4) и коли-индекса. Коли-индекс – индекс кишечной палочки – это число кишечных палочек, обнаруженных в 1 мл исследуемой воды (по зарубежному – международному и европейскому – стандарту в 100 мл). [c.167]
Ввиду сложности непосредственного определения содержания патогенных бактерий в сточных водах обычно применяют метод оценки эффективности их обеззараживания по титру кишечной палочки. По А. А. Смородинцеву, обеззараживание сточных вод может быть признано достаточным, если коли-титр в них будет доведен до 0,001. [c.454]
Вопрос доброкачественности питьевой воды решают путем определения количества кишечной палочки в 1 л воды. Кишечная палочка — это микроб, постоянно обитающий в кишечнике человека и животных и, следовательно, безвредный. Однако ее присутствие в воде свидетельствует о наличии в ней выделений людей или животных и о возможности загрязнения воды болезнетворными бактериями. Согласно нормам, в 1 л питьевой воды может содержаться не более трех бактерий хруппы кишечной палочки (БГКП). Это число называется коли-индексом воды обратная величина, т е. количество миллилитров воды, в котором находитбя одна кишечная палочка, называется коли-титром. Питьевая вода, безупречная в бактериальном отнощении, должна иметь коли-титр не менее 333. [c.198]
Понятие о титре энтерококка и о титре Вас. perfringens совершенно аналогично понятию о титре кишечной палочки. Определение этих показателей имеет вспомогательное значение. К ним прибегают в тех случаях, когда нужно получить дополнительную характеристику фекального загрязнения в отношении его свежести и, следовательно, эпидемиологической актуальности. Наиболее четкие результаты получаются при сопоставлении титров этих бактерий с коли-титром. Для воды чаще определяют титр энтерококка и результаты оценивают таким образом [c.168]
Коли-титр – титр кишечной палочки – это наименьшее число исследуемого материала в миллилитрах, в котором еще обнаруживается кишечная палочка. Для выявления кишечной палочки и определения ее титра в молоке используют газообразующую способность группы бактерий oli aerogenes на жидкой среде Булира следующего состава МПБ - [c.156]
В связи с тем что прн биологическом анализе воды определение патогенных бактерий затруднено, бактериологические определения сводятся к нахождению общего числа бактерий в 1 мл воды, растущих при 37 °С, и кишечной палочки — бактерии коли. Наличие последней имеет индикаторные функции, т. е. свидетельствует о загрязнении воды выделениями людей и Животных и т. п. Минимальный объем испытуемой воды (iiIл), приходящийся на одну кишечную палочку, называют коли-титром, а количество кишечных палочек в 1 л воды — коли-индексом. [c.60]
Микробиологическое загрязнение вод может измеряться с помощью лабораторных способов или набора простых полевых приборов [31]. В литературе [173] описаны детали процесса отбора проб, лабораторной подготовки и проверки. Наиболее важными являются методы определения коли-титра, фекального колититра (F ), кишечных палочек (FS), отношения F /FS и золотистых стафилло-кокков [173]. [c.635]
Источник