Транспортная среда для кишечных бактерий
Среда Хейфеца.Выпускается в сухом виде. В состав, кроме основных питательных компонентов (вода, пептон, маннит, натрия хлорид), входят розоловая кислота, раствор метиленового синего. Готовая среда красно_фиолетового цвета, при росте кишечной палочки рН сдвигается в кислую сторону, и среда приобретает зеленоватую окраску.
ХБ.В 1000 мл воды растворяют 10 г пептона, 5 г маннита, 5 г хлорида натрия. Приготовленную смесь кипятят 15–20 мин, устанавливают рН 7,4–7,6, процеживают через бумажный фильтр, кипятят фильтрат 10 мин, охлаждают до температуры +60_С, после чего прибавляют 30 мл дрожжевого диализата, 15 мл желчи, 10 мл раствора хинозола и 10 мл 1,6%_ного спиртового раствора бромкрезола пурпурного. Среду разливают в стерильные пробирки по 7–8 мл.
Среда Кесслера.К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании в течение 20–30 мин, фильтруют через вату, добавляют 2,5 г лактозы, доводят объем дистиллированной воды до 1000 мл, устанавливают рН 7,4–7,6, добавляют 2 мл 1%_ного водного раствора генцианвиолета, разливают в пробирки с поплавками по 8–10 мл и стерилизуют при температуре +121_С в течение 10 мин. Готовая среда имеет темно-фиолетовый цвет.
Индикация сальмонелл.Навесок колбасы массой 25 г от объединенной пробы, тщательно измельченный ножницами, вносят во флакон, содержащий 100 мл среды обогащения (Мюллера, Кауфмана, хлористо-магниевой) или 225 мл селенитового бульона. Флакон встряхивают и помещают в термостат при температуре +37_С, через 24 ч петлей или пастеровской пипеткой проводят высев из среды обогащения в чашки Петри со средой Эндо, Плоскирева, Левина или ВСА. Посевы помещают в термостат при температуре +37_С на 16–24 ч. На среде Эндо, Плоскирева и Левина бактерии из рода сальмонелл образуют бесцветные колонии. На ВСА сальмонеллы образуют черные или коричневые колонии с металлическим блеском, при этом участок среды под агаром чернеет. Не менее 5 изолированных колоний, характерных для сальмонелл, пересевают на трехсахарный агар Крумвиде–Олькеницкого в модификации Ковальчука штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик и инкубируют при температуре +37_С в течение 12–16 ч.
При росте сальмонелл на трехсахарном агаре цвет скошенной поверхности среды розовый, столбик — желто-бурый. Газообразование устанавливают по наличию трещин и разрыву столбика агара, при образовании сероводорода питательная среда чернеет.
Другие грамотрицательные бактерии семейства энтеробактерий дают следующие изменения цвета трехсахарного агара:
-БГКП окрашивает среду в синий или сине-зеленый цвет с образованием газа или без него;
-палочка протея окрашивает среды в ярко-красный цвет (вследствие расщепления мочевины), в случае выделения Н2S может появиться черный осадок с возможным разрывом агара.
Для дальнейшей идентификации бактерий готовят мазки, которые окрашивают по Граму, микроскопируют, а также изучают антигенные свойства путем постановки РА на предметном стекле с поливалентной (или комплексной) сальмонеллезной агглютинирующей сывороткой. Далее проводят идентификацию с помощью монорецепторных О- и Н-агглютинирующих сальмонеллезных сывороток.
Обнаружение подвижных (кроме S. gallinarum и S. pullorum) грамотрицательных палочек, дающих характерный рост на элективных средах, не ферментирующих лактозу и сахарозу, сбраживающих глюкозу и маннит до кислоты и газа (S. typhisuis маннит не ферментирует), образующих Н2S и не образующих индол, дающих положительную реакцию агглютинации с комплексными, монорецепторными О- и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками, указывает на выделение бактерий из рода сальмонелл.
Индикация протеяв Н_форме проводится внесением исследуемого продукта в конденсат свежескошенного МПА (метод Щукевича). Посевы помещают в термостат на 18–24 ч при температуре +37_С. При наличии в исследуемом продукте протея подвижная палочка поднимается вверх по скошенной поверхности агара, образуя вуалеобразный голубоватый налет. Культура издает характерный гнилостный запах.
Обнаружение полиморфных грамотрицательных палочек, подвижных, сбраживающих глюкозу и мочевину, не ферментирующих лактозу и маннит, указывает на наличие в продукте бактерий из рода протея.
Индикация стафилококкав исследуемом продукте основана на изучении морфологии, культуральных свойств и способности некоторых стафилококков ферментировать лецитиназу и коагулировать цитратную плазму крови кролика под воздействием фермента коагулазы.
Вначале исследуемый продукт разводят 1 : 10, вносят в МПБ, содержащий 6,5% натрия хлорида. Через сутки после инкубирования в термостате проводят пересев на молочно-солевой агар для изучения наличия пигмента и на желточно-солевой агар для выявления лецитиназной активности.
Посевы выдерживают 24 ч в термостате и сутки при комнатной температуре, затем учитывают результат: на поверхности питательной среды стафилококки образуют слегка выпуклые круглые колонии с ровными краями, т. е. S-формы; на желточно-солевом агаре вокруг колоний стафилококков появляется «радужный венчик», что является одним из признаков их патогенности (лецитовителазная активность).
Не менее чем из 5 типичных колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии стафилококков обнаруживают грамположительные кокки, располагающиеся в виде беспорядочных кучек и гроздьев винограда. Для подтверждения патогенности выделенных стафилококков ставят реакцию плазмокоагуляции по следующей методике: в пробирку с 0,5 мл цитратной плазмы крови кролика, разведенной физраствором (1 : 5), вносят петлю чистой суточной культуры стафилококка и помещают в термостат при температуре +37_С. Реакцию плазмокоагуляции предварительно учитывают через 3–4 ч (осторожно наклоняя, не встряхивая пробирку). В сомнительных случаях пробирки оставляют в термостате для окончательного учета через 24 ч. Реакцию считают положительной, если плазма коагулирует в сгусток (реакцию подвижная палочка поднимается вверх по скошенной поверхности агара, образуя вуалеобразный голубоватый налет. Культура издает характерный гнилостный запах.
Обнаружение полиморфных грамотрицательных палочек, подвижных, сбраживающих глюкозу и мочевину, не ферментирующих лактозу и маннит, указывает на наличие в продукте бактерий из рода протея.
Индикация стафилококкав исследуемом продукте основана на изучении морфологии, культуральных свойств и способности некоторых стафилококков ферментировать лецитиназу и коагулировать цитратную плазму крови кролика под воздействием фермента коагулазы.
Вначале исследуемый продукт разводят 1 : 10, вносят в МПБ, содержащий 6,5% натрия хлорида. Через сутки после инкубирования в термостате проводят пересев на молочно-солевой агар для изучения наличия пигмента и на желточно-солевой агар для выявления лецитиназной активности.
Посевы выдерживают 24 ч в термостате и сутки при комнатной температуре, затем учитывают результат: на поверхности питательной среды стафилококки образуют слегка выпуклые круглые колонии с ровными краями, т. е. S-формы; на желточно-солевом агаре вокруг колоний стафилококков появляется «радужный венчик», что является одним из признаков их патогенности (лецитовителазная активность).
Не менее чем из 5 типичных колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии стафилококков обнаруживают грамположительные кокки, располагающиеся в виде беспорядочных кучек и гроздьев винограда.
Для подтверждения патогенности выделенных стафилококков ставят реакцию плазмокоагуляции по следующей методике: в пробирку с 0,5 мл цитратной плазмы крови кролика, разведенной физраствором (1 : 5), вносят петлю чистой суточной культуры стафилококка и помещают в термостат при температуре +37_С. Реакцию плазмокоагуляции предварительно учитывают через 3–4 ч (осторожно наклоняя, не встряхивая пробирку). В сомнительных случаях пробирки оставляют в термостате для окончательного учета через 24 ч. Реакцию считают положительной, если плазма коагулирует в сгусток (реакцию оценивают по степени плотности сгустка от одного до четырех плюсов).
Индикация сульфитредуцирующих клостридий (СРК)в колбасе основана на учете специфического роста клостридий в железосульфитсодержащих средах. При взаимодействии натрия сульфита с хлоридом железа образуется сульфат железа, который вызывает почернение питательной среды.
Для выявления СРК 1 мл исследуемой взвеси стерильной пипеткой вносят в пробирку с 9 мл жидкой сульфит-циклосериновой среды или среды Вильсон–Блера. Затем проводят последовательные пересевы на аналогичные объемы среды и получают возрастающие 10_кратные разведения суспензии. Посевы выдерживают 18–20 ч при температуре +37_С, при наличии СРК среда чернеет.
Для подтверждения принадлежности выделенных культур к клостридиям проводят пересев на поверхность агаризованной плотной среды Вильсон–Блера и инкубируют в анаэробных условиях при температуре +37_С в течение 24–48 ч. Отбирают типичные колонии и изучают микроорганизмы по морфологическим и некоторым культурально-ферментативным свойствам, в частности, по отрицательной реакции на каталазу.
Если в посевах (в 4 колониях из 5) обнаружены СРК, спорообразующие палочки, грамположительные, каталаза-отрицательные, способные расти в анаэробных условиях, то делают заключение о наличии в продукте СРК по максимальному разведению суспензии, в посеве которого наблюдается почернение среды. Например, если характерные изменения наблюдаются в пробирках с разведением 10–1, то считают, что в 1 г исследуемого продукта содержится 10 клеток, при аналогичных изменениях в пробирках с разведением 10–2 — 100 клеток.
При получении неудовлетворительных результатов микробиологического анализа готовой продукции по требованию контролирующих организаций проводят исследование вспомогательных материалов при постоянном входном контроле.
Источник
Процедура сбора биологического материала и обеспечение его сохранности при транспортировке в лабораторию – важные этапы в микробиологических исследованиях, как при диагностике вирусов, бактериальных инфекций, так и в санитарной микробиологии.
Качественно собрать материал для доставки в лабораторию позволяют транспортные системы от компании ПОЛИГЕМ.
Транспортные системы ПОЛИГЕМ – это стерильные, готовые к применению наборы, предназначенные для сбора и транспортировки образцов для их последующего микробиологического исследования в диагностике широкого круга инфекционных заболеваний, устойчивости микроорганизмов к терапевтическим средствам и в санитарной микробиологии.
Транспортная система ПОЛИГЕМ представляет собой стерильный комплект, состоящий из пробирки, содержащей транспортную среду, и аппликатора с тампоном (зонда-тампона).
Каждый набор индивидуально упакован в пластиковую пленку, которая препятствует попаданию атмосферного воздуха внутрь упаковки.
Пробирки с юбкой устойчивости изготовлены из прозрачного полипропилена. Каждая пробирка имеет винтовую резьбу для укупорки крышкой из полиэтилена, оснащенной надежным захватом-держателем аппликатора с тампоном (зонда-тампона).
Головка тампона диаметром 5 мм может выполнена из нейлона или вискозы.
После взятия исследуемого материала тампон на пластиковом аппликаторе (зонд-тампон) помещается в пробирку с транспортной средой и обламывается в точке перелома. Собранный тампоном материал немедленно и полностью десорбируется в транспортную среду.
Собранные в транспортную среду микроорганизмы хорошо увлажнены и тем самым защищены от высушивания, что позволяет сохранять жизнеспособность микроорганизмов в течение всего времени, необходимого для доставки образца в лабораторию.
Особенности транспортных систем с жидкими средами. Благодаря жидкой основе транспортной среды биологический образец оказывается полностью диспергирован в жидкой среде. Перемешивание (взбалтывание) транспортной системы обеспечивает создание однородной суспензии (образец равномерно распределяется по всему объему транспортного раствора), которая может быть разделена на аликвоты и использована для несколько исследований.
Компания получила регистрационные удостоверения на Транспортные системы ПОЛИГЕМ без среды (РЗН 2020/9962) и Транспортные системы ПОЛИГЕМ со средой для вирусов (РЗН 2020/9961).
Преимущества Транспортные системы ПОЛИГЕМ:
- высокая степень адаптации к автоматическим посевным платформам;
- удобство в использовании;
- стерильность и герметичность;
- высокая степень сохранности проб при транспортировке;
- биологическая инертность и нетоксичность используемых материалов;
- высокая экономическая рентабельность использования.
Транспортные системы ПОЛИГЕМ выпускаются с другими различными средами: средой Эймса (жидкой, агаризованной или агаризованной с активированным углем), средой Кэри-Блейр (жидкой или агаризованной), пептонной водой.
- Среда Эймса применима для широкого спектра микроорганизмов, в том числе аэробных, факультативно анаэробных (Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus Influenzae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pyogenes), анаэробных бактерий (Prevotella melaninogenica, Bacteroide sfragilis, Peptostreptococcus anaerobius, Propionibacterium acnes), прихотливых микроорганизмов (Neisseria gonorrhoeae), сохранения их нуклеиновых кислот и антигенов. Данная среда способна более 3 дней поддерживать такие микроорганизмы, как Neisseria sp., Haemophilus sp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae и др., однако, наилучшие результаты дает культивирование в течение первых 24 часов. Выживаемость прихотливых микроорганизмов, таких как, например, Neisseria gonorrhoeae, может быть пролонгирована благодаря присутствию в составе среды Эймса активированного угля.
- Среда Кери-Блейр применима для сбора ректальных проб и проб фекалий, транспортирования и поддержания жизнедеятельности кишечных патогенов (Escherichia coli, Campylobacter sp, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, Shigella sonne, Vibrio cholera, Salmonella typhi, Salmonella typhimurium, Salmonella enteritidis, Clostridium difficile) и паразитов (Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis, Cryptosporidium parvum, Entamoeba histolytica). Среда Кери-Блейр позволяет сохранять большинство патогенов, включая требовательные микроорганизмы, такие как Neisseria sp., Haemophilus sp., Streptococcus sp. Данная среда является стандартной для транспортировки анаэробов.
- Пептонная вода (0,1%) применима для транспортировки неприхотливых аэробных и факультативных анаробных микроорганизмов, таких как Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella sp. Данная концентрация позволяет сохранить микроорганизмы, не давая им размножаться.
Источник
Кишечник человека содержит миллионы бактерий. Но не все из них являются полезными. В кишечнике иногда обитают вредоносные микроорганизмы, вызывающие различные заболевания. Что вызывает рост вредных бактерий, и как же восстановить нормальную микрофлору, поговорим далее.
Содержание:
Важность восстановления микрофлоры
Как восстановить микрофлору
Важность восстановления микрофлоры
Нормальная кишечная микрофлора – это баланс полезных и вредных бактерий, населяющих кишечник человека. Если преобладают вредные, а полезные находятся в меньшинстве, такое состояние называется дисбалансом микрофлоры и требует коррекции. Этим занимаются врачи-гастроэнтерологи.
Они рекомендуют сдать анализ кала на дисбактериоз и бактериальный посев при заметных нарушениях в работе кишечника (вздутие, понос, тошнота, запор, боли и т.д.).
По результатам анализов назначается соответствующее лечение, после которого микрофлора нормализуются, самочувствие человека улучшается. Нормальная микрофлора кишечника важна для выработки необходимых витаминов, укрепления иммунитета и защиты от различных болезней.
Различные факторы могут ухудшать состояние микрофлоры кишечника, это:
прием антибиотиков и НПВС;
увлечение западной диетой (с наличием фастфудов);
недостаточность клетчатки в рационе;
прием обезболивающих средств;
лечение ингибиторами протонного насоса;
применение блокаторов Н2- гистаминовых рецепторов.
Некоторые врачи считают, что среда кишечника не должна быть стерильной. Но вредные бактерии должны составлять не более 15 процентов всей микрофлоры. Только тогда дисбаланс сохранится.
Микрофлора может меняться в зависимости от возраста, настроения, самочувствия человека, климата, сезона.
Нарушение микрофлоры может вызывать следующие заболевания:
онкология;
астма;
колит;
аутизм;
экзема;
диабет;
ожирение;
рассеянный склероз;
заболевания сердца.
Именно поэтому мы должны заботиться о состоянии микрофлоры кишечника. Рассмотрим некоторые полезные советы по этому поводу.
Как восстановить микрофлору
Полноценный рацион
Человек должен за день съедать разнообразную пищу, а не скудную, состоящую в преимуществе из углеводов и жиров. Так питается большинство людей, перекусывая, за неимением времени, фастфудами, булками и т.д.. Надо включать в рацион каждый день клетчатку.
Это:
свежие овощи;
фрукты;
зерновой хлеб;
бобовые;
зелень;
орехи.
Полезен для нормализации микрофлоры православный пост. Замечено, кто соблюдает посты, меньше страдает заболеваниями кишечника, даже раком. Пост исключает животные жиры (мясо, сливочное масло, яйца) и делает акцент на свежих овощах и фруктах, ягодах, крупах.
Известно, что инулин, обладающий пребиотическим действием, находится в следующих продуктах:
чеснок;
лук;
лук-порей;
спаржа;
цикорий;
артишок.
Эти продукты помогают наладить микрофлору кишечника и победить вредные бактерии. Их обязательно необходимо включать в свой рацион, если есть проблемы с кишечником.
Источниками бифидобактерий, полезных для человека, являются:
яблоки;
черника;
артишок;
миндаль;
фисташки.
Они обязательно должны присутствовать на столе как можно чаще.
Ферментирование продуктов
Полезно есть ферментированные, т.е. квашеные продукты. В результате процесса квашения простые продукты становятся фантастически полезными, потому что изменяют свой состав благодаря бактериям. Они помогают восстановить микрофлору кишечника.
Самые распространенные квашеные продукты:
квашеная капуста;
кефир;
йогурт;
чайный гриб.
У некоторых народов принято квасить овощи, даже острые. Такое блюдо из квашеных острых овощей называется «кимчхи». Квашеные соевые бобы называются «темпе».
Молочные квашеные продукты имеют в составе лактобактерии, так необходимые для нормальной микрофлоры. Людям, страдающим заболеванием почек, они просто необходимы, т.к. при таких болезнях нарушается микрофлора.
Искусственные подсластители – вред
Заместители сахара (аспартам, сахарин) являются вредными продуктами. Они действуют разрушительно на микрофлору кишечника. Кроме того, они повышают уровень глюкозы в крови. Поэтому их надо исключить из рациона.
Больше пребиотиков
Пребиотики содержат полезные бактерии, которые помогают выселять вредные, попадая в кишечник человека. Они находятся в овощах, фруктах, бобовых, зерновых. Их надо есть как можно чаще. Они также понижают уровень триглицеридов, холестерина, инсулина в организме. Значит пребиотики снижают риск сердечно-сосудистых заболеваний, смерти от инфаркта, инсульта.
Цельные зерна
Польза цельных зерен в том, что они содержат клетчатку и неперевариваемые углеводы, которые не усваиваются в тонком кишечнике, а поступают в толстый. Там они расщепляются и вызывают рост полезных бактерий.
Цельные зерна содержат:
витамины группы В;
железо;
цинк;
белки;
углеводы.
Они продаются в целом виде, а также из них изготовляется цельнозерновой хлеб. Также из них изготовляется цельная пшеничная мука.
Искусственные пробиотики
Насчет препаратов-пробиотиков ведутся споры. Есть сведения о некоторой пользе, которую оказывают такие препараты. Но она полностью не доказана. Тем более, что среди препаратов немало подделок. Надо осторожнее выбирать пробиотики, руководствуясь рекомендациями врача. Рекомендуем обратить внимание на Максилак.
Остальные советы
Есть еще несколько советов для нормализации микрофлоры:
Надо меньше перекусывать, чтобы дать возможность кишечнику восстановиться.
При возможности голодать, именно в таком состоянии кишечник сам нормализует микрофлору.
Работайте в огороде. Замечено, что у людей, живущих на свежем воздухе и ведущим активный образ жизни, микрофлора богаче.
Заведите собаку. Доказано, что те, у кого есть собаки дома, легче справляются с вредными бактериями.
Меньше употреблять антибиотики.
Больше двигаться и пить чистой воды.
У каждого человека организм индивидуален, поэтому каждый может знать свои способы нормализации микрофлоры.
Источник