Выделение чистой культуры кишечной палочки
Механические методы выделения чистых культур аэробных ифакультативно-анаэробных бактерий основаны на механическом разобщении бактериальных клеток на поверхности твердых питательных сред (рис.7). Чистая культура — это популяция микроорганизмов одного вида. К механическим методам относятся:
1) метод Дригальского – это качественный метод, широко применяется для бактериологической диагностики инфекционных заболеваний;
2) метод пластинчатых разводок Коха – это количественный метод, применяется в санитарной микробиологии;
3) метод клонов – получение колоний из одной бактериальной клетки (клонирование).
Биологические методы – методы, основанные на биологических свойствах бактерий:
1)метод Щукевича. Исследумый материал засевают в конденсационную воду скошенного МПА. Данный метод культивирования применяется при подозрении на инфицирование бактериями рода Proteus (P. vulgaris). В случае роста P. vulgaris обнаруживается ползучий рост – рост по всей поверхности агара за счет выраженной подвижности (рис. 8).;
2) бактериостатический метод, основанный на различном действии некоторых химических веществ (например, 5% серная кислота быстро убивает большинство микробов, а микобактерии туберкулеза выживает в этих условиях) и антибиотиков на бактерии (например, небольшие концентрации пенициллина задерживает рост грамположительных бактерий и не влияет на грамотрицательные;
3) метод прогревания. При прогревании исследумого материала при 80°С в течение 10-15 минут вегетативные формы бактерий погибают, а споры сохраняются;
4) метод обогащения. Исследумый материал засевают на элективные питательные среды, способствующие росту определенного вида микроорганизмов. Например, культивирование стафилококков на желточно-солевом агаре.
5) культивирование в организме лабораторных животных, например, выделение чистой культуры возбудителя чумы (Y. рestis) из материала, загрязненного посторонней микрофлорой, возбудителя туляремии (Fr. tularensis). Бактериологическая диагностика туляремии имеет существенную особенность – выделить возбудителя от больного человека непосредственными высевами не удается, тат как накопление микроба в крови и тканях больных крайне незначительно, поэтому бактериологическое исследование начинают с заражения лабораторных животных, то есть с обогащения биологическим способом.
6) культивирование вирусологическими методами (заражение куриного эмбриона, тканевых культур, чувствительных животных) облигатных внутриклеточных паразитов: риккетсий, хламидий, факультативных паразитов. Например, микоплазмы – мембранные паразиты, очень требовательны к питательным средам, растут на сложных питательных средах с добавление холестерина, жирных кислот, белка, углеводов и др., растут медленно, образуют колонии, напоминающие «яичницу – глазунью», то есть более гомогенным приподнятым центром и ажурными плоскими полупросвечивающими краями (рис.9). Можно их культивировать на клеточных культурах и куриных эмбрионах.
Метод Дригальского
Цель метода: Выделение чистой культуры аэробных и факультативно-анаэробных бактерий и их идентификации.
Исследуемыми материалами могут быть мокрота, гной, испражнение и др. в зависимости от локализации возбудителя инфекционного заболевания. Метод проводится в 4 этапа, при выделении гемокультуры – 5 этапов. Выделение чистой культуры аэробных и факультативно-анаэробных бактерий изучаем на примере выделения чистой культуры кишечной палочки (E coli) из ее смеси со стафилококком.
1-й этап.Получение изолированных колоний. Колонии – это размножившиеся особи одной бактериальной клетки, выросшие на поверхности твердой питательной среды в виде изолированного скопления.
Ход работы:
а) приготовление мазков из данной смеси микробов и окраска по Граму. Под микроскопом видны грамотрицательные кишечные палочки и грамположительные стафилококки ;
б) рассев смеси на чашку с МПА шпетелем (рис.10). Мы засеваем несколько измененным методом Дригальского. Вместо 3-х чашек с МПА берем одну. На поверхность питательной среды в чашке наносят петлёй каплю исследуемого материала в 3-х точках: первые две точки – ближе к стенке чашки, а третью точку – в центре, которую растирают прокаленным и охлажденным шпателем сначала в одном направлении, затем перпендикулярно в другом направлении (рис.11). Чашку надписывают (фамилия студента, номер группы, дата) и ставят в специальный цилиндр вверх дном, чтобы образующиеся капельки паров воды, попадающие на крышу, не стекали на поверхность среды и не размазывали посева;
Рис.11.
в) инкубация посева в термостате при 370 в течение 18-24 часов.
2-й этап.Выделение чистой культуры, то есть культуры, содержащей одного вида бактерий.
Ход работы:
а) макроскопическое изучение колоний по величине, форме, окраске, характеру поверхности и краев, консистенции, структуре и размеру.
Просматривают чашку (не открывая) со стороны дна в проходящем свете, держа ее на уровне глаз на расстоянии 20-30 см. Видно, что посев смеси дал рост неоднородных колоний. Колонии стафилококка выпуклые, гладкие, блестящие, с ровным краем, размером 1-4 мм в диаметре, прозрачные, золотистые или белого цвета (рис.12). Колонии кишечной палочки слабовыпуклые, полупрозрачные, сероватого цвета, с ровным краем и гладкой блестящей поверхностью, размером 2-3 мм в диаметре (рис.13).
Колонии можно просмотреть с помощью лупы или под микроскопом (при малом увеличении) при этом лучше видна разница в структуре колоний;
б) микроскопическое исследование колоний.
Выбирают изолированные колонии того и другого микроба, из части каждой колонии делают мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Убеждаются, что золотистого цвета колонии содержат стафилококки – кокки располагаются скоплениями, грамположительны (рис.14), а серого цвета колонии – кишечные палочки, беспорядочно расположенные, грамотрицательные (рис.15);
в) остатки колоний кишечной палочки и стафилококков пересевают в пробирки с косым агаром. К пробиркам прикрепляют этикетку с указанием даты посева, группы, фамилии студента;
г) инкубация посевов в термостате при 370 в течение 18-24 часов.
3-й этап. Идентификация выделенной чистой культуры.
Ход работы:
а) макроскопическое определение роста культуры на скошенном МПА. Стафилококк на скошенном агаре растет в виде прозрачного налета золотистого или белого цвета, кишечная палочка – в виде сочного, блестящего, полупрозрачного налёта серого цвета;
б) проверка чистоты культуры. Готовят мазок, окрашивают его по Граму и просматривают под микроскопом (не менее 10 полей зрения). Во всех полях зрения чистая культура должна быть однородной морфологически и тинкториально;
в) идентификация выделенной чистой культуры бактерий проводится по биохимическим, антигенным свойствам, фагочувствительности, токсигенности (вирулентности) и по генетической структуре.
Идентификация E.coli по биохимическим признакам:
а) идентификация по сахаролитической активности E.coli проводится по изменению короткого «пестрого» ряда, который включает в себя среды Гисса (МПБ, 0,5% углеводов: лактозы, сахарозы, глюкозы, мальтозы, маннита и индикатр Андреде-кислый фуксин; в каждую пробирку помещают « поплавок» – стеклянные трубочки, запаянные с одного конца для улавливания газа; покраснение среды является показателем образования кислоты при ферментации углеводов). Исследуемую культуру засевают на среды «пестрого» ряда и инкубируют при 370 в теч. 18-24 часов. E.coli ферментирует всех углеводов короткого «пестрого» ряда до кислоты и газа, за исключением сахарозы (рис.16) и в отличие от других представителей семейства Enterobacteriaceae, например, возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В: S. typhi, S.P.A и S.P.B. S. typhi ферментирует всех углеводов короткого «пестрого» ряда до кислоты за исключением сахарозы и лактозы (рис.17), паратифозные палочки – тех же углеводов, но с образованием кислоты и газа.
б) идентификация по протеолитической активности.
Разложение микробами белка сопровождается образованием индола, сероводорода, аммиака.
Реакция на сероводород.Исследуемую культуру засевают в МПБ, под пробкой укрепляют полоску бумаги, пропитанной ацетатом свинца. Почернение бумаги после инкубации при 370 в течение 2-3 суток свидетельствует о наличии сероводорода. E.coli не образует сероводород в отличие от возбудителей брюшного тифа и паратифа В.
Проба на индол: Способ Эрлиха: в пробирку с культурой бактерий прибавляют 2-3 мл эфира, содержимое энергично перемешивают и добавляют несколько капель реактива Эрлиха (спиртовой раствор парадиметиламидобензальдегида с хлороводородной кислотой). В присутствии индола наблюдается розовое окрашивание; при осторожном наслаивании образуется розовое кольцо.
Идентификация стафилококков по биохимическим признакам:
а) определениекаталазной активности
На предметное стекло наносят каплю 1-3% раствора пероксида водорода и вносят в нее петлю с бактериальной культурой. Каталаза разлагает пероксид водорода на кислород и воду. Выделение пузырьков O2 свидетельствует о наличии у данного вида бактерий фермента каталазы. Каталазной активностью обладают стафилококки в отличие от стрептокков;
б) определение плазмокоагулазной активности.Плазмокоагулаза – фермент S.aureus сворачивающий фибрин за счет активации предшествующего в плазме крови протромбина, тем самым, защищая бактерии от клеточных и гуморальных факторов иммунитета.
В пробирку с цитратной плазмой вносят исследуемую культуру, помещают в термостат при (37 +/- 1) °С и через 1, 2, 3, 18 и 24 ч проверяют наличие свертывания плазмы. Реакция считается положительной независимо от степени свертывания плазмы. S.аureus обладает плазмокоагулазной активностью в отличие от других стафилококков.
4-й этап.Учет результатов идентификации и оформление заключения о виде.
Например, выделена чистая культура E.coli (S. аureus), идентификация проведена по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным свойствам, токсигенности (вирулентности), фагочувствительности и по генетической структуре.
Источник
Метод Дригальского. Первый этап. Рассев смеси на чашку с МПА шпателем.
Посев проводим несколько измененным методом Дригальского. Вместо трех чашек Петри с МПА берем одну чашку.
Бактериологическую петлю стерилизуйте в пламени горелки. С помощью стерильной петли на поверхность питательной среды в чашке нанесите каплю исследуемого материала в 3-х точках: первые две точки – ближе к стенке чашки, а третью точку – в центр питательной среды.
Центральную каплю распределите по поверхности питательной среды с помощью прокаленного на пламени горелки и охлажденного шпателя сначала в одном направлении, затем перпендикулярно в другом направлении.
На чашке с помощью карандаша по стеклу напишите фамилию, номер группы и дату.
Чашку Петри поставьте в специальный цилиндр вверх дном, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки, не стекала на поверхность среды и не помешала получить изолированные колонии.
Чашки выдерживают в термостате в течение 1 – 7 суток при температуре 37°С.
8. Контроль освоения заданий по самостоятельной контактной работе.
8.1. Выполнить тестовые задания.
8.1.1. Выберите один наиболее правильный ответ.
1. В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИСТОЧНИКА УГЛЕРОДА, МИКРООРГАНИЗМЫ БЫВАЮТ
1) литотрофы
2) фототрофы
3) хемотрофы
4) автотрофы
2. ШТАММ – ЭТО КУЛЬТУРА МИКРООРГАНИЗМОВ ВЫДЕЛЕННАЯ
1) из объектов внешней среды
2) одного вида, выделенная из разных источников или в разное время
3) из разных источников в разное время
4) из организма животного или человека
3. ОСНОВОЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ЯВЛЯЕТСЯ
1) агар-агар
2) глюкоза
3) крахмал
4) глицерин
4. ЭЛЕКТИВНЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ПРИМЕНЯЮТ для
1) предупреждения отмирания патогенных бактерий
2) первичного посева материала
3) накопления бактерий определённой группы
4) пересева со сред обогащения
8.1.2. Установите соответствие.
5. Установите соответствие между фазами кривой роста бактерий в жидкой питательной среды и их характеристикой: к каждой позиции, данной в первом столбце, подберите соответствующую позицию из второго столбца.
| характеристика | фазы кривой роста бактерий |
| А) Наступает вследствие накопления кислых продуктов обмена или в результате автолиза под влиянием собственных ферментов Б) Постоянная максимальная скорость деления клеток, которая зависит от вида бактерий и питательной среды. В) Происходит адаптация бактериальных клеток к новым условиям культивирования, идет синтез индуцибельных ферментов. Г) Снижение темпов размножения и прекращение увеличения числа клеток в результате истощения среды и накопления в ней токсических продукты метаболизма. | 1. Лаг-фаза 2. Экспоненциальная фаза 3. Стационарная фаза 4. Фаза отмирания |
6. Установите соответствие между типами консистенции питательной среды и их составом: к каждой позиции, данной в первом столбце, подберите соответствующую позицию из второго столбца.
| состав | консистенция питательной среды |
| А) Мясопептонный бульон, пептонная вода, сахарный бульон. Б) 0,5 % мясо-пептонный агар. В) Питательная желатина, картофель, свернутая сыворотка, свернутый яичный белок. | 1. Жидкие питательные среды 2. Полужидкие питательные среды 3. Плотные питательные среды |
8.1.3. Для каждого вопроса один или несколько ответов являются правильными. Выберите ответ:
| Верно | 1, 2, 3 | 1, 3 | 2, 4 | 1, 2, 3, 4 |
| Ответ | А | Б | В | Г |
7. Для выделения микроорганизмов предпочтительно использовать питательные среды
1) простые
2) элективные
3) сложные
4) среды обогащения
8. Для контроля качества питательной среды в практических лабораториях чаще применяют
1) определение аминного азота
2) титрованный посев контрольного штамма
3) определение рН
4) определение окислительно-восстановительного потенциала
9. Для выращивания микроорганизмов наиболее важным является
1) соблюдение температурного режима
2) обеспечение определенной степени аэрации среды
3) определенное значение рН среды
4) определение окислительно-восстановительного потенциала среды
10. Для выделения чистых культур используют
1) посев исследуемого материала методом «штрих с площадкой»
2) посев исследуемого материала на элективные среды
3) заражение восприимчивых животных
4) прогревание исследуемого материала для выделения бацилл
8.2. Решить ситуационные задачи.
Задача 1. По типу питания и способу получения энергии бактерии делятся на разные группы. По источникам углерода бактерии делят на два типа: аутотрофы и гетеротрофы. По источникам энергии различают фототрофы и хемотрофы.
К какой группе относятся микроорганизмы, вызывающие инфекционные заболевания человека? Обоснуйте;
Какой тип взаимоотношений сложился между возбудителями инфекционных заболеваний и организмом человека.
Задача 2. На первом этапе бактериологического метода исследования проводится посев исследуемого материала на плотные питательные среды с целью получения изолированных колоний.
Каким способом можно сделать эту работу, если имеется: исследуемый материал в пробирке, три чашки Петри с плотной питательной средой, стерильный шпатель и бактериологическая петля?
Какой принцип лежит в основе этого метода посева?
Задача 3. На чашках первичного посева получен сплошной рост микроорганизмов.
Можно ли переходить к следующему этапу работы? Какой метод был использован? Что необходимо сделать?
Ответ:
Задача 4. При посеве спинно-мозговой жидкости, полученной от обследуемого с предварительным диагнозом «Менингит» выявить рост микроорганизмов на питательных средах не удалось.
Можно ли приготовить универсальную питательную среду, на которой росли бы, если не все, то большинство микроорганизмов?
Назовите примеры общеупотребляемых сред?
Ответ:
Практическое занятие № 5
Источник
Культивирование. Эшерихий — факультативные анаэробы, обладающие дыхательным и бродильным типами метаболизма. Оптимальная температура роста 37- 38° С, рН среды 7,0-7,2, хорошо растут на всех широко используемых в лабораторной практике питательных средах.
Исследуемый материал высевают на плотные селективно-дифференциальные среды Эндо, или Левина, или Мак-Конки и среду с сорбитом. Посевы инкубируют при 37° С в течение 18-24 часов. По истечении этого срока посевы просматривают и отбирают 10 колоний (5, выросших после посева фекалий или соскобов со слизистой кишечника, и 5 – из других органов, в т.ч. брыжеечных лимфатических узлов), типичных для эшерихий, которые пересевают в МПБ, на МПА и среду Минка (при наличии колоний слизистой консистенции, т.е. тянущихся за петлей, их обязательно отсевают на среду Минка) в чашках, разделенных карандашом для стекла на 10 секторов (каждую колонию на 2 среды в отдельный пронумерованный сектор). При подозрении или целенаправленном исследовании на отечную болезнь поросят (энтеротоксемию) дополнительно пересевают несколько колоний на кровяной агар в чашке, разделенной на соответствующее количество секторов. С чашек с культурами на среде с сорбитом отсевают 3-4 колонии S-формы серовато-белого цвета в пробирки со скошенным МПА. Культуры, выделенные от птиц, на МПА и среду Минка не пересевают. Их высевают в специальные питательные среды для изучения биохимических свойств.
Характер роста эшерихий на питательных средах. На плотных питательных средах эшерихий образуют круглые с гладкой, вьшуклои поверхностью, ровным краем, диаметром 2-4 мм колонии. На МПА колонии полупрозрачные, сероватого цвета. На средах Эндо, Левина и Мак-Конки за счет ферментации лактозы и закисления среды приобретают цвет индикаторов: на среде Эндо – красные, малиново-красные с металлическим блеском или без него; на среде Левина — темно-синие, фиолетовые, черные с металлическим блеском или без него; на среде Мак-Конки — розовые, красные (отдельные штаммы эшерихий могут не ферментировать лактозу и формировать на перечисленных средах бесцветные колонии). На среде с сорбитом эшерихий серогруппы О157 (варианты О157:Н7 и О157:Н), вызывающие диарею животных с признаками геморрагического гастроэнтерита, образуют серовато-белые колонии S-формы. Колонии эшерихий других серогрупп — красно-малинового цвета. Колонии штаммов, образующих гемолизин, на кровяном агаре окружены зоной гемолиза. В МПБ рост эшерихий проявляется в виде равномерного помутнения среды с образованием легко разбивающегося осадка.
Обнаруженные на данном этапе исследований эшерихий с гемолитическими свойствами, выделенные от поросят-отъемышей с признаками отечной болезни (из содержимого тонкого отдела их кишечника и (или) брыжеечных лимфатических узлов), относят к возбудителю отечной болезни (энтеротоксемии) поросят.
Морфология клеток эшерихий в культуре. Вмазках, приготовленных из культур, эшерихий обнаруживают в виде грамотрицательных, мелких (1,0-3,0×0,3-0,6 мкм) прямых палочек с закругленными концами. В поле зрения микроскопа располагаются одиночно, реже попарно. Спор не образуют. Некоторые (штаммы серо групп 08, 09, 020, 0101) образуют капсулу или микрокапсулу. Большинство подвижно за счет перетрихиальных жгутиков, но встречаются и неподвижные.
Идентификация эшерихий по ферментативным признакам. Выделенные чистые культуры микроорганизмов с характерными для эшерихий культуральными, морфологическими и тинкториальными свойствами окончательно относят к роду Escherichia и виду E.coli на основании изучения их ферментативных свойств. Ориентируясь на критерии к E.coli относят штаммы, образующие индол, не образующие H2S, дающие положительную реакцию с метиловым-красным (среда окрашивается в розово-красный цвет) и отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра (среда окрашивается в желтый цвет), не растущие на среде Симмонса, не расщепляющие мочевину, образующие лизиндекарбоксилазу. Большая часть эшерихий образует орнитиндекарбоксилазу, ферментирует манит. Все (за редким исключением) сбраживают лактозу.
На данном этапе исследований диагноз на колибактериоз считают установленным в том случае, если выделены чистые культуры Е. coli не менее чем из двух ниже указанных органов и тканей: селезенки, крови, крови сердца, костного мозга, головного мозга свежего трупа животного без изучения патогенных свойств штаммов и установления их серогрупповой принадлежности. В остальных случаях устанавливают патогенность выделенных культур.
Серологическая идентификация. Важнейшую информацию о патогенных свойствах эшерихий получают при определении их антигенной структуры. Клетки эшерихий содержат три вида антигенов: О — соматический; К — оболочечный и Н — жгутиковый.
О-антиген термостабилен (выдерживает нагревание при 100° С в течение 2,5 часов). Является липополисахаридо-протеиновым комплексом, неоднороден, и на его основе эшерихий делят на группы (более 160
О-групп).
К-антигены поверхностные, оболочечные (кислые полисахариды, редко протеины). По своим свойствам их подразделяют на три типа:
L-антиген термолабильный, инактивируется при 100° С в течение часа;
В-антиген в этих же условиях теряет агглютинабелыюсть; А-антиген термостабильный, инактивируется при 120° С в течение 2,5 часов, имеется у слизистых капсулообразующих эшерихий О-групп 08,09,020,0101;
Н-антиген термолабильный, инактивируется при 60° С в течение 1 часа, протеин, располагается в фимбриях (пилях), пронизывающих клеточную стенку, поэтому в последнее время его чаще называют фимбриальным антигеном.
К-антигены покрывают О-антиген и делают клетки эшерихий иннаглютинабельными в гомологичных О-сыворотках. Они обладают адгезивными свойствами, т.е. с их помощью бактерии прикрепляются к эпителиальным клеткам кишечника. Адгезивные антигены являются фактором патогенности, который изучается у чистых культур E.coli в первую очередь.
Н-антиген — жгутиковый, состоит из протеина, термолабилен, имеет несколько десятков разновидностей, определяемых в РА. Для диагностики существенного значения не имеет. Сочетание О-, К- и Н-антигенов характеризует серологический вариант (серовар) эшерихий.
Ведущая роль в развитии колибактериоза принадлежит эшерихиям с адгезивными антигенами К88, К99, F41, F18, 987Р, А20 и др. Наличие этих адгезинов можно выявить в реакции агглютинации на стекле или в ELISA-тесте с соответствующими антисыворотками. В нашей стране наиболее распространенным методом выявления адгезивных антигенов у эшерихий является РА. Для этой цели промышленностью выпускается набор агглютинирующих сывороток к адгезивным антигенам эшерихий. Этот набор включает моновалентные агглютинирующие сыворотки к антигенам К88, К99, F41, 987Р, А20 и поливалентную агглютинирующую сыворотку, представляющую собой смесь моновалентных сывороток в равных объемах. Сыворотки выпускаются в сухом виде во флаконах по 0,5 см3, что обеспечивает сохранение их специфической активности на срок не менее 5-ти лет.
Постановка РА. В ампулу (флакон) с сухой сывороткой добавляют растворитель (дистиллированная вода или физиологический раствор) до первоначального объема сыворотки (0,5 см3), затем растворителем разводят поливалентную сыворотку в соотношении 1:2, а моновалентные — 1:10 (рабочий титр). Разведенные сыворотки хранят в пробирках (флаконах) под резиновой пробкой при температуре 4-10° С до 3 месяцев. По внешнему виду разведенные сыворотки должны представлять собой прозрачную или слегка опалесцирующую бледно-розовую жидкость. Мутные сыворотки, проросшие плесенью или другими микроорганизмами, с обильным осадком к употреблению непригодны.
Для выявления антигенов К88, 987Р и А20 используют культуры эшерихий, выращенные на МПА или агаре Хоттингера, для обнаружения антигенов К99 и F41 — на среде Минка. В обоих случаях посевы инкубируют при 37-38° С в течение 20-24 часов.
Культуры эшерихий, выделенные от птиц, для выявления адгезивных антигенов не используют. Выросшие культуры исследуют в РА на стекле вначале с поливалентной, а затем (в случае положительной реакции) с моновалентными сыворотками. С этой целью каплю поливалентной сыворотки наносят на предметное стекло, бактериологической петлей берут испытуемую культуру и тщательно растирают с сывороткой. Реакцию учитывают в течение одной минуты при легком покачивании стекла при температуре от 18 до 28° С. Контролем служит испытуемая культура, смешанная с каплей физиологического раствора (рН 7,2 -7,4) и с каплей нормальной кроличьей сыворотки, разведенной 1:10 (для исключения самоагглютинации культуры).
Положительная реакция характеризуется склеиванием микробных клеток в зерна или хлопья различной величины и полным или частичным просветлением сыворотки при отсутствии агглютинации в контроле.
Эшерихии, давшие положительную реакцию агглютинации с одной из сывороток, считают возбудителем колибактериоза (колидиареи).
Наличие адгезивных антигенов у энтеропатогенных эшерихии (ЕРЕС) имеет определенную связь с хозяевами этих возбудителей и
О-серогруппами (табл. 21).
Культуры эшерихии на скошенном МПА, полученные после пересева серовато-белых колоний со среды с сорбитом (не ферментирующие этот многоатомный спирт), исследуют с агглютинирующей коли-сывороткой О157 в РА на стекле. Реакцию ставят с живыми культурами. Для исключения самоагглютинации бактериальных клеток культуру исследуют с 0,85%-ным раствором натрия хлорида. При отсутствии агглютинации в контроле и ее наличии на стекле с коли-сывороткой О157 исследуемые эшерихии относят к возбудителю колибактериоза.
Источник