Выявление бактерий группы кишечных палочек
ГОСТ 31747-2012
Группа Н09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
Food products. Methods for detection and quantity determination of coliformes
____________________________________________________________________
Текст Сравнения ГОСТ 31747-2012 с ГОСТ Р 52816-2007 см. по ссылке.
– Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________
Дата введения 2013-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 “Межгосударственная система стандартизации. Основные положения” и ГОСТ 1.2-2009 “Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены”
1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением “Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности” (ГНУ “ВНИИКОП”) на основе аутентичных переводов на русский язык международных стандартов, указанных в пункте 4
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственном советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 1 октября 2012 г. N 51)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 | Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения | AM | Минэкономики Республики Армения |
Беларусь | BY | Госстандарт Республики Беларусь |
Кыргызстан | KG | Кыргызстандарт |
Молдова | MD | Молдова-Стандарт |
Российская Федерация | RU | Росстандарт |
Узбекистан | UZ | Узстандарт |
4 Настоящий стандарт модифицирован по отношению к международным стандартам:
– ISO 4831:2006* “Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the detection and enumeration of coliforms – Most probable number technique”, (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод для выявления и подсчета количества колиформ. Метод наиболее вероятного числа);
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. – Примечание изготовителя базы данных.
– ISO 4832:2006 “Microbiology of food and animal feeding stuffs – Horizontal method for the enumeration of coliforms – Colony-count technique”, (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Горизонтальный метод подсчета колиформ. Метод подсчета колоний) в части пищевых продуктов.
При этом дополнительные положения и требования, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики указанных выше государств и особенностей межгосударственной стандартизации, выделены в тексте стандарта курсивом*.
_________________
* В бумажном оригинале обозначения и номера стандартов и нормативных документов в разделе “Предисловие” приводятся обычным шрифтом, остальные по тексту документа выделены курсивом. – Примечание изготовителя базы данных.
Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ 1.5 (пункт 3.6).
Сравнение структуры настоящего стандарта со структурой указанных международных стандартов приведено в дополнительном приложении ДА.
Степень соответствия – модифицированная (MOD).
Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 52816-2007
5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1771-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31747-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе “Национальные стандарты”, а текст изменений и поправок – в ежемесячном информационном указателе “Национальные стандарты”. В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе “Национальные стандарты”. Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты, кроме молока и молочных продуктов, и устанавливает метод выявления в определенной навеске пищевого продукта колиформных бактерий и три метода определения их количества: метод наиболее вероятного числа (НВЧ) и методы посева в или на агаризованные селективно-диагностические среды.
Метод определения НВЧ колиформных бактерий предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц (КОЕ) колиформных бактерий.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 смжидкого продукта более 150 КОЕ колиформных бактерий.
Допускается использование хромогенных сред для предварительного выявления количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) в масложировой продукции.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ ISO 7218-2011 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 24104-2001* Весы лабораторные. Общие технические требования
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 53228-2008, здесь и далее по тексту. – Примечание изготовителя базы данных.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 29184-91 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
Примечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному справочному указателю “Национальные стандарты”, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя “Национальные стандарты” за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 колиформные бактерии: Бактерии, которые при температуре 37 °С ферментируют лактозу с образованием газа по методам, приведенным в настоящем стандарте.
3.2 выявление колиформных бактерий: Определение присутствия или отсутствия колиформных бактерий в определенной массе или объеме продукта в соответствии с настоящим стандартом
3.3 определение количества колиформных бактерий:
3.3.1 Количество бактерий, содержащееся в 1 см или 1 грамме продукта, определенное путем посева продукта и (или) его разведений в или на агаризованную селективно-диагностическую среду, подсчете после инкубирования при температуре 37 °С типичных и атипичных колоний и определении возможности бактерий из этих колоний ферментировать лактозу с образованием газа по методам, приведенным в настоящем стандарте.
При необходимости, подтверждают по биохимическим признакам принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
3.3.2 Количество бактерий, содержащееся в 1 см или 1 грамме продукта, определенное по методу НВЧ, указанному в настоящем стандарте.
4 Метод выявления колиформных бактерий и определения количества по методу НВЧ
Методы выявления и определения НВЧ колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) разведений навески продукта в жидкую селективную среду с лактозой, инкубировании посевов, учете положительных пробирок, пересеве культуральной жидкости в жидкую селективную среду для учета газообразования или пересева, при необходимости, культуральной жидкости на поверхность агаризованной селективно-диагностической среды для подтверждения по биохимическим и культуральным признакам роста принадлежности выделенных колоний к колиформным бактериям.
4.1 Метод выявления колиформных бактерий
4.1.1 Пробирку с селективной обогатительной средой инокулируют продуктом или разведением навески продукта и инкубируют при температуре 37 °С 24 или 48 ч.
4.1.2 Пробирку с подтверждающей средой инокулируют из пробирки, полученной по 4.1.1, где отмечено образование газа и/или помутнение и инкубируют при температуре 37 °С 24 или 48 ч.
4.1.3 Присутствие колиформных бактерий считается подтвержденным, в случае если отмечено помутнение и образование газа после осмотра пробирки, полученной по 4.1.2.
4.2 Метод НВЧ – определение количества колиформных бактерий
4.2.1 Три пробирки с жидкой обогатительной средой двойной концентрации инокулируют определенным количеством продукта, если исходный продукт жидкий, или определенным количеством исходной суспензии в случае другого продукта.
4.2.2 Три пробирки с жидкой обогатительной средой нормальной концентрации инокулируют определенным количеством продукта и/или разведением продукта, если исходный продукт жидкий, или определенным количеством исходной суспензии и/или разведением в случае другого продукта.
4.2.3 Посевы в пробирках, содержащие обогатительную среду двойной концентрации, инкубируют при температуре 37 °С 24 ч. Посевы в пробирках со средой нормальной концентрации, инкубируют 24 или 48 ч, после этого в этих пробирках отмечают наличие газа и/или помутнения, мешающего выявлению образования газа.
4.2.4 Пробирки с подтверждающей средой инокулируют культурами из пробирок с обогатительной селективной средой двойной концентрации и культурами из пробирок с обогатительной селективной средой нормальной концентрации, в которых отмечено образование газа и/или помутнение.
Посевы в пробирках с подтверждающей средой инкубируют при температуре 37 °С 24 или 48 ч, после этого в пробирках отмечают образование газа.
4.2.5 Наиболее вероятное число колиформных бактерий в 1 см или 1 г пробы продукта (НВЧ) рассчитывают исходя из числа пробирок с подтверждающей средой (4.2.4), показавших образование газа. Для определения наиболее вероятного числа пользуются таблицей ГОСТ 26670.
5 Методы определения количества колиформных бактерий – подсчет колоний
Источник
Метод определения БГКП основан на обнаружении образования газа и кислоты при высеве определенного количества продукта (или смыва с его поверхности) в жидкие питательные среды, содержащие лактозу (среда Кесслера) с последующим подтверждением принадлежности выросших микроорганизмов к группе кишечных палочек по морфологическим и культуральным признакам.
Исследование на наличие БГКП проводят в несколько этапов:
1 этап – приготовление разведений продукта. Если продукт плотный (колбаса, сыр, масло, творог и т. д.), то результат выражают в отсутствии БГКП в определенной его массе (г). Если продукт жидкий (молоко, кисломолочные напитки, сок и т. д.), го БГКП должны отсутствовать в определенном его объеме (см3).
2 этап – посев определенного количества продукта или его разведений в среду Кесслера. Среду Кесслера разливают в пробирки или колбы, в которые помещают поплавок (стеклянная трубочка с одним запаянным концом). После стерилизации поплавок должен быть заполнен средой.
В пробирки со средой Кесслера вносят по 1 см3 соответствующего разведения продукта (10-1; 10-2; 10-3) и ставят их в термостат при температуре 37±1 °С. Через 24 ч инкубации посевы просматривают и отмечают образование газа в поплавке и изменение цвета среды из фиолетового в желто-зеленый. Записывают, в каких разведениях произошло газообразование.
3 этап – подтверждение принадлежности микроорганизмов, выросших на среде Кесслера, к БГКП. Из забродивших пробирок со средой Кесслера делают пересев петлей на поверхность плотной среды Эндо таким образом, чтобы получить изолированные колонии. Бактериологической петлей берут минимальное количество исследуемого материала из пробирки и высевают его на поверхность ПС. Чашки Петри подписывают и помещают в термостат (крышками вверх) с температурой 37±1 °С на 18-24 ч.
После инкубации чашки просматривают. Бактерии группы кишечных палочек образуют на среде Эндо красные или розовые блестящие колонии с металлическим блеском или без него. Такой характер роста на среде Эндо эти бактерии дают за счет сбраживания лактозы и образования кислоты, вызывающей восстановление индикатора фуксина, окрашивающего колонии.
При наличии на среде Эндо типичных колоний из них готовят препараты, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Если в препарате обнаруживаются мелкие грамотрицательные, неспорообразующие палочки, то делают заключение о том, что обнаруженные в продукте микроорганизмы относятся к БГКП. При этом указывают навеску продукта (в г) или объем (в см3). При отсутствии на среде Эндо типичных для БГКП колоний продукт считают не загрязненным кишечными палочками.
11.2.3 Определение количества дрожжей и плесеней.
Для определения количества дрожжей и плесеней в пищевых продуктах делают посев соответствующих разведений в чашки Петри, которые заливают расплавленным и остуженным до 45-50 °С сусло-агаром или средой Сабуро. Содержимое чашек перемешивают вращательными движениями и оставляют для застывания на 10-15 мин, после чего ставят в термостат с температурой 30 ±2 °С на 2-3 суток. После инкубации в чашках подсчитывают отдельно количество выросших колоний плесеней и дрожжей. Результат выражают числом КОЕ/см3 (или г).
Задание:
1. Подготовить к стерилизации: пробирки с физиологическим раствором, пипетки, чашки Петри в количестве, необходимом для микробиологического анализа пищевых продуктов, подготовленных студентами.
2. Приготовить питательные среды для стерилизации: ГРМ-агар, Сабуро, Эндо, среду Кесслера.
3. Произвести анализ микробной обсемененности пищевых продуктов.
4. По окончании инкубирования сделать вывод о соответствии исследуемых продуктов требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01 Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов.
Список литературы:
Джей Дж. М. Современная пищевая микробиология / Дж. М. Джей, М. Дж. Лесснер, Д.А. Гольден; пер. 7-ого англ. изд. – М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2011. – 886 с.
Жарикова Г.Г. Микробиология продовольственных товаров. Санитария и гигиена: учебник для ВУзов / Г.Г. Жарикова. – 3-е изд., стер. – М.: Издательский центр «Академия», 2008. – 304 с.
Нетрусов А.И. Микробиология: учебник для студ. высш. Учеб.заведений / А.И. Нетрусов, И.Б. Котова. – 3-е изд., испр. – М.: Издательский центр «Академия», 2009. – 352 с.
Нетрусов А.И. Практикум по микробиологии: учебное пособие для студентов высших учебных заведений / Нетрусов А.И , Егорова М.А., Захарчук Л.М. и др.; под ред. А.И. Нетрусова. – М.: Академия, 2005. – 608 с.
Никитина Е.В. Микробиология: Учебник / Е.В. Никитина, С.Н. Киямова, О.А. Решетник. – СПб.: ГИОРД, 2009. – 368 с.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник
БГКП – это колиморфные бактерии, которые относятся к семейству энтеробактерий и используются в качестве определителя фекальной контаминации. Они имеют принципиальные отличия от стафилококков – данная категория представлена разнородными микроорганизмами, к которым относятся представители родов Citrobacter, Escherichia, Enterobacter и другие бациллы. Их объединяет схожесть с главной представительницей флоры кишечника – кишечной палочкой. Несмотря на некоторое сходство, на микробиологических питательных средах они способствуют образованию колонии другого цвета и вида.
Эшерихии имеет отличия от цитробактера и энтеробактера и заключаются они в свойствах размножения. Данная особенность позволяет определить, как давно произошло микробное обсеменение. Если при проверке обнаруживается присутствие эшерихий, это может свидетельствовать о том, что загрязнение БГКП было произведено недавно. Цитробактер или энтеробактер указывают на то, что с момента образования бактерий прошло несколько недель.
Важность проведения регулярных проверок на наличие микроорганизмов
Правила, направленные на создание регламентирующих документов, в том числе МУ и СанПиН, разрабатывались на основании данных проводимых исследований микроорганизмов. Они необходимы для определения частоты проверок, рекомендованных методик, объектов, которые подвергаются более пристальному контролю. Учитывая важность обеспечения безопасности населения, легко объяснить скрупулезность действий в СанПиН и МУ.
Полный и актуальный прайс-лист на услуги Узнать цены
Фекальные микроорганизмы, которые попадают в окружающую среду из желудочно-кишечного тракта, относятся к одной из наиболее распространенных категорий. Второй категорией является оральная – она представлена микроорганизмами, которые обитают в полости рта. Большинство БГКП по признакам схоже с Escherichia coli – это распространенный представитель группы в связи с легкостью дифференцирования. Также она отличается быстрейшими темпами роста и поэтому служит определителем того, что загрязнение произошло недавно.
В чем опасность БГКП для организма?
БГКП может вызвать острую кишечную инфекцию, проявляемую в виде отравления. Путем распространения заболевания может быть вода, которой моют посуду после употребления пищи, сама посуда или еда. Компоненты постоянно контактируют между собой, за счет чего производится осеменение и последующая передача к здоровому человеку.
Проведение анализа
Следует помнить, что не во всех случаях возбудитель может стать возбудителем заболеваний – подобное происходит при превышении предельно допустимой концентрации микроорганизмов. В нормативных документах указывается безопасный уровень, превышение которого и может вызвать различные осложнения. Обнаружение возбудителей осуществляется при помощи материалов, которые могут потенциально содержать бактерии или контактировать с больным.
Определение безопасности может проводиться в трех направлениях:
- анализ на наличие бактерий;
- установление количества;
- диагностика биохимических характеристик.
Первые варианты используются повсеместно, третий – при необходимости детального изучения возбудителя. В зависимости от целей исследования процедуры, которые необходимы для анализа, могут отличаться.
- Для выявления бактерий потребуется осуществить посев образца в пробирку, в которой будет находиться богатая на лактозу среда. Взятые образцы выдерживаются при температуре 37 C до 48 часов. В подобных условиях производится выращивание колоний группы кишечной палочки.
- Для определения числа бактерий такой же объем материала наносится на специальные чашки Петри. После проведения процедуры инкубации в термостате происходит рост колонии – в данном случае клетки получают название колониеобразующих единиц. С помощью подсчета КОЕ можно определить количество бактерий в 1 л.
- Биохимические свойства устанавливаются при помощи пробирок со средой Гиса. Добавляя необходимые компоненты, можно определить уровень сахаролитической активности микроорганизмов.
В отдельных случаях может использоваться ускоренный метод выявления бактерий группы кишечных палочек. После первичной обработки образца отделяется небольшой фрагмент, который помещается в стерильную пробирку вместе с комочком стерильной фильтровальной бумаги. Далее в емкость наливается среда ХБ или Хейфеца. Пробирка укладывается в термостат на период от 12 до 14 часов. В случае, если в пробе имеются БГКП, среда меняет свой цвет.
Особенности отбора проб
Забор материалов для исследования производится на основании методических указаний и стандартов для каждого продукта. Смыв с рук обследуемого производится при помощи увлажненного средой ватного тампона. Чтобы добиться более точной оценки, требуется протереть каждую ладонь и пальцы не менее пяти раз, также не забыв о межпальцевых промежутках.
При изучении стаканов протирается внутренняя поверхность и верхний наружный край. Во время взятия смывов с санитарной одежды выборочно протирается четыре 25-сантиметровые – чаще всего это касается нижней части рукавов, а также фрагментов передних пол. Отметим, что стерильные тампоны заготавливаются лабораторией заблаговременно, устанавливаясь в пробирки с ватными пробками.
Далее отобранная проба отправляется в центр, помещаясь перед этим в герметично закрытую емкость. При перевозке помимо оптимальных условий хранения, которые препятствуют повреждению образцов, также важно обеспечивать низкий уровень температуры. В связи с этим не рекомендуется осуществлять забор образцов самостоятельно – этим должны заниматься специалисты. В лаборатории БГКП из емкости укладывается в раствор с использованием вибрирующего аппарата. Для проведения исследований достаточно 1 см³ жидкости.
В каких случаях нужно проводить исследования?
Проверка продуктов, а также одежды, посуды и оборудования чаще всего производится с целью оценки санитарно-гигиенического состояния организаций общественного питания, пищевой промышленности, а также больниц, лечено-профилактических и детских учреждений. В зависимости от цели исследования может проверяться наличие БГКП, их тип и общее число.
Определение БГКП в лаборатории «НОРТЕСТ»
Аккредитованная испытательная лаборатория «НОРТЕСТ» оснащена всем необходимым оборудованием для проведения микробиологических исследований воды и окружающей среды на предмет наличия БГКП и уровня концентрации. Анализу будет подвергаться широкий спектр показателей, а точность и достоверность результатов помимо новейшего оборудования также обеспечит квалифицированный персонал.
Источник